一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提出了一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，包括可以同时检测HSV1gB基因、HSV2gB基因和VZV gB基因的引物和探针，Taq聚合酶、dNTPs、Tris

【技术实现步骤摘要】
一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]疱疹病毒(herpes virus)是一群有包膜的DNA病毒，生物学特性相似，可以分为α、β、γ三大类。其感染宿主广泛，主要侵害皮肤、黏膜以及神经组织，严重影响着人及其他动物的健康。α疱疹病毒中的单纯疱疹病毒(Herpse simplex virus,HSV)和水痘
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带状疱疹病毒(Varicella
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Zoster Virus,VZV)均是常见的皮肤疾病致病源都能引发疱疹类疾病。HSV包括1型和2型可分别感染除生殖器以外皮肤黏膜和生殖器不同引起单纯疱疹，多在身体免疫力差时会发病，一般症状较轻，病程短，反复发作，当机体免疫力增强时可逐渐治愈。VZV可引起带状疱疹，该病发病总是沿着神经走向，呈条带状，需要抗病毒治疗和免疫增强治疗相结合，治愈后可获得对该病毒较持久的免疫。HSV1/HSV2/VZV引发的疱疹疾病可以带来不同的后果，需要不同的治疗策略，准确的辨认HSV1/HSV2/VZV三种病毒对于选择正确的治疗策略较为重要。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术提出了可同时检测HSV1、HSV2和VZV这3种病毒，并且具有较高的灵敏度和特异性的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒及其使用方法。
[0004]本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，包括可以同时检测HSV1 gB基因、HSV2 gB基因和VZV gB基因的引物和探针：
[0005]所述检测HSV1 gB基因的引物和探针包括由SEQ ID NO:1所示的正向引物，由SEQ ID NO:2所示的反向引物和由SEQ ID NO:3所示的探针；
[0006]所述检测HSV2 gB基因的引物和探针包括由SEQ ID NO:4所示的正向引物，由SEQ ID NO:5所示的反向引物和由SEQ ID NO:6所示的探针；
[0007]所述检测VZV gB基因的引物和探针包括由SEQ ID NO:7所示的正向引物，由SEQ ID NO:8所示的反向引物和由SEQ ID NO:9所示的探针；
[0008]在以上技术方案的基础上，优选的，所述SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示的探针均为锁核酸修饰的探针，且5'端均标记荧光基团，3'端均标记猝灭基团。
[0009]在以上技术方案的基础上，优选的，所述SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示探针的1个或多个位置的碱基被锁核酸修饰。
[0010]在以上技术方案的基础上，优选的，所述SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示探针的5'端起第9位、第11位、第12位、第15位和第17位中的1个或多个碱基被锁核酸修饰。
[0011]在以上技术方案的基础上，优选的，还包括Taq聚合酶、dNTPs、Tris
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HCl、MgSO4和增强剂。
[0012]在以上技术方案的基础上，优选的，所述增强剂为TMAC和PEG 6000。
[0013]在以上技术方案的基础上，优选的，所述Taq聚合酶的终浓度为8
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12U、dNTPs的终浓度为0.05
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0.10mmol/L、Tris
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HCl的终浓度为50
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60mmol/L、MgSO4的终浓度为5
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8mmol/L、TMAC的终浓度为15
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25mmol/L，PEG 6000的质量分数为3
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7％。
[0014]在以上技术方案的基础上，优选的，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、VIC、ROX、Cy3和Cy5中的一种或多种，所述猝灭基团为TAMRA、BHQ1、BHQ2和DABCYL中的一种或多种。
[0015]在以上技术方案的基础上，优选的，所述SEQ ID NO:1
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2、SEQ ID NO:4
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5和SEQ ID NO:7
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8所示的引物浓度均为0.25
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0.35μmol/L，所示SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示的探针浓度均为0.08
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0.15μmol/L。
[0016]本专利技术还提供了一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
[0017]S1，取HSV1假病毒、HSV2假病毒和VZV假病毒用阴性血清稀释后，提取模板DNA；
[0018]S2，模板DNA扩增检测，以荧光PCR仪上三个检测通道扩增模板的荧光信号强弱和循环阈值来判断样品中HSV1 gB基因、HSV2 gB基因和VZV gB基因的存在和基因型别。
[0019]本专利技术还提供了一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒在临床检测上的应用，使用上述试剂盒和检测方法在临床上检测疱疹病毒。
[0020]本专利技术的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒及其使用方法相对于现有技术具有以下有益效果：
[0021](1)本专利技术探针为锁核酸探针，5'端标记不同的荧光基团，3'端标记不同的猝灭基团，其结构中β
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D
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呋喃核糖的2'
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O，4'
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C位通过不同的缩水作用形成环形的氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥刚性缩合结构，环形桥锁定了呋喃糖C3'
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内型的N构型，降低了核糖结构的柔韧性，增加了磷酸盐骨架局部结构的稳定性。本专利技术通过加入锁核酸探针，在PCR过程中对目的片段进行富集，进一步提高检测灵敏度和特异性。
[0022](2)本专利技术PCR缓冲液中的TMAC和PEG6000可改善DNA变性复性情况、去除非特异扩增，提高反应效率和特异性。
[0023](3)本专利技术试剂盒可同时检测HSV1、HSV2和VZV这3种病毒，检测限为1000copies/mL，且与麻疹病毒、人呼吸道合胞病毒、EB病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、人巨细胞病毒感染样本均无交叉反应，没有假阳性。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1为本专利技术的HSV1的荧光扩增曲线图；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括可以同时检测HSV1 gB基因、HSV2 gB基因和VZV gB基因的引物和探针：所述检测HSV1 gB基因的引物和探针包括由SEQ ID NO:1所示的正向引物，由SEQ ID NO:2所示的反向引物和由SEQ ID NO:3所示的探针；所述检测HSV2 gB基因的引物和探针包括由SEQ ID NO:4所示的正向引物，由SEQ ID NO:5所示的反向引物和由SEQ ID NO:6所示的探针；所述检测VZV gB基因的引物和探针包括由SEQ ID NO:7所示的正向引物，由SEQ ID NO:8所示的反向引物和由SEQ ID NO:9所示的探针；所述SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示的探针均为锁核酸修饰的探针，且5'端均标记荧光基团，3'端均标记猝灭基团。2.如权利要求1所述的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示探针的1个或多个位置的碱基被锁核酸修饰。3.如权利要求2所述的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:9所示探针的5'端起第9位、第11位、第12位、第15位和第17位中的1个或多个碱基被锁核酸修饰。4.如权利要求1所述的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：还包括Taq聚合酶、dNTPs、Tris
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HCl、MgSO4和增强剂。5.如权利要求4所述的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述增强剂为TMAC和PEG 6000。6.如权利要求4所述的一种HSV1/HSV2/VZV病毒三联荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述Taq聚合酶的终浓度为8
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【专利技术属性】
技术研发人员：熊慧，高峰英，肖樊，曾海，
申请(专利权)人：武汉思泰得医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：