一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒及监测方法技术

本发明专利技术涉及流式细胞术领域，具体讲，涉及一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒及监测方法。本发明专利技术试剂盒包括30个抗体，针对30个项目进行监测，结合全光谱流式细胞仪，可一管panel完成以上所有检测，方便快捷，省时省力，操作简单。操作简单。

【技术实现步骤摘要】
一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒及监测方法


[0001]本专利技术涉及流式细胞术领域，具体讲，涉及一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒及监测方法。

技术介绍

[0002]肿瘤微环境(tumor microenvironment，TME)由定植于正常组织的肿瘤细胞，基质细胞、免疫细胞及其分泌因子、血管内皮细胞和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)等组分共同构成，在肿瘤的进展、免疫逃逸和耐药机制中发挥重要作用。起初这些由肿瘤细胞招募和激活的免疫细胞及相关基质成分，可以形成抑瘤性炎性微环境阻碍肿瘤发生发展。经过持续性肿瘤抗原刺激和免疫激活反应，微环境中相关效应细胞处于耗竭状态，导致无法发挥正常功能，从而产生免疫抑制性微环境促进肿瘤的发生发展。近些年的研究显示，靶向TME的免疫治疗可以激发或恢复免疫系统固有的抑瘤能力，重塑免疫微环境，并产生抗瘤性应答，因此监测肿瘤患者个体化的TME特征，可用于调整优化免疫治疗策略。
[0003]免疫过程包括免疫清除、免疫平衡和免疫逃逸三个阶段，在免疫清除阶段，先天性免疫和适应性免疫共同作用，快速将肿瘤细胞消灭，如果肿瘤细胞变异不能被有效识别，则可能进入平衡阶段，带瘤生存，如果在持续的免疫压力下，肿瘤细胞变异不再被适应性免疫识别、对免疫效应机制不敏感，或诱导肿瘤微环境为免疫抑制状态，则肿瘤细胞进入逃逸阶段，肿瘤的生长不再被免疫系统所阻断，导致免疫耐受。
[0004]免疫过程涉及的免疫细胞包括固有免疫的吞噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞等，适应性免疫细胞包括T细胞和B细胞，每类细胞又分为不同的亚群，分别执行不同的功能。固有免疫与适应性免疫、T细胞与B细胞通过协同作用，激活与抑制的平衡调节，抑制性受体的表达等机制共同参与肿瘤清除与发展的免疫过程。
[0005]流式细胞术(Flow CytoMetry，FCM)是直接对标记了荧光信号的单细胞进行检测，实现高速细胞定量分析和分选的技术。主要优点是测量速度快，可多参数检测，综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术，既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。目前在临床医学领域里有着广泛的应用，可用于血液肿瘤的免疫分型和免疫学研究等。从1980年1激光2色流式问世，到2000年3激光13色流式问世，流式技术的快速发展极大的推动了临床免疫学监测的应用及发展，2017年全光谱流式的问世，一跃将三激光流式的检测通道从传统流式的13个提高到38个，可实现一管25色以上监测，大大提高了检测信息量，提高了诊断精度和免疫学检测的深度。
[0006]由于肿瘤相关的免疫微环境涉及的免疫细胞和各细胞亚群众多，抑制性受体众多，传统流式检测通道较少、抗体价格昂贵、可用商品化荧光素不足等原因，以往的检测除了检测深度不够，很难将目的细胞全部检测到，检测广度和深度不足，则很难筛选出对特定肿瘤发生发展影响明确的细胞进行检测与监测，更不能据此及时的个体化调整临床治疗策略。
[0007]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]本专利技术第一专利技术目的在于提供一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒。
[0009]本专利技术第二专利技术目的在于提供该试剂盒的使用方法。
[0010]本专利技术的第三专利技术目的在于提供一种肿瘤相关免疫微环境的监测方法。
[0011]为了实现本专利技术的专利技术目的，采用的技术方案为：
[0012]本专利技术提出一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒，所述试剂盒中含有分别标记有不同荧光素的抗体，所述抗体包括用于监测免疫抑制相关的抗体、用于T亚群分类的抗体和用于监测免疫活化的抗体；
[0013]所述用于监测免疫抑制相关的抗体包括：抗2B4抗体、抗BTLA抗体、抗CD160抗体、抗LAG-3抗体、抗VISTA抗体、抗CD95抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗TIGIT抗体和抗TIM3抗体；
[0014]所述用于T亚群分类的抗体包括：抗CCR6抗体、抗CD127抗体、抗CD183抗体、抗CD25抗体、抗CD28抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD45RA抗体、抗CD62L抗体、抗CD8抗体、抗EOMES抗体、抗T-bet抗体、抗TCRab抗体和抗TCRrd抗体；
[0015]所述用于监测免疫活化的抗体包括：抗CD38抗体、抗CD39抗体、抗CD69抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体和抗HLA-DR抗体。
[0016]可选的，所述抗2B4抗体连接有荧光素RB730、所述抗BTLA抗体连接有荧光素RR664、所述抗CD160抗体连接有荧光素RR600、所述抗LAG-3抗体连接有荧光素RV496、所述抗VISTA抗体连接有荧光素RB780、所述抗CD95抗体连接有荧光素RV520、所述抗CTLA4抗体连接有荧光素RR778、所述抗PD-1抗体连接有荧光素RV805、所述抗TIGIT抗体连接有荧光素RV444、所述抗TIM3抗体连接有荧光素RB515、所述抗CCR6抗体连接有荧光素RR678、所述抗CD127抗体连接有荧光素RB667、所述抗CD183抗体连接有荧光素RR705、所述抗CD25抗体连接有荧光素RV480、所述抗CD28抗体连接有荧光素RV734、所述抗CD3抗体连接有荧光素RV780、所述抗CD4抗体连接有荧光素RV624、所述抗CD45RA抗体连接有荧光素RV526、所述抗CD62L抗体连接有荧光素RB697、所述抗CD8抗体连接有荧光素RV650、所述抗EOMES抗体连接有荧光素RV681、所述抗T-bet抗体连接有荧光素RV656、所述抗TCRab抗体连接有荧光素RB608、所述抗TCRrd抗体连接有荧光素RB574、所述抗CD38抗体连接有荧光素RB670、所述抗CD39抗体连接有荧光素RB710、所述抗CD69抗体连接有荧光素RV600、所述抗CD80抗体连接有荧光素RB713、所述抗CD86抗体连接有荧光素RV540、所述抗HLA-DR抗体连接有荧光素RV645。
[0017]可选的，每种所述抗体分别包装，所述抗体的浓度为80～120μg/ml，优选100μg/ml。
[0018]可选的，每种所述抗体的包装体积为0.5mL；每个待测样本使用每种所述抗体的体积为5μl。
[0019]可选的，抗CD95抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗TIGIT抗体、抗体TIM3抗体、抗2B4抗体、抗BTLA抗体、抗CD160抗体、抗LAG-3抗体、抗VISTA抗体、抗CCR6抗体、抗CD127抗
体、抗CD183抗体、抗CD25抗体、抗CD28抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD45RA抗体、抗CD62L抗体、抗CD8抗体、抗TCRab抗体、抗TCRrd抗体、抗CD38抗体、抗CD39抗体、抗CD69抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体和抗HLA-DR抗体为胞膜抗体，抗EOMES抗体和抗T-bet抗体为胞浆抗体。
[0020]本专利技术涉及该试剂盒的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于监测肿瘤相关免疫微环境的流式细胞术试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有分别标记有不同荧光素的抗体，所述抗体包括用于监测免疫抑制相关的抗体、用于T亚群分类的抗体、用于监测免疫活化的抗体；所述用于监测免疫抑制相关的抗体包括：抗2B4抗体、抗BTLA抗体、抗CD160抗体、抗LAG-3抗体、抗VISTA抗体、抗CD95抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗TIGIT抗体和抗TIM3抗体；所述用于T亚群分类的抗体包括：抗CCR6抗体、抗CD127抗体、抗CD183抗体、抗CD25抗体、抗CD28抗体、抗CD3抗体、抗CD4抗体、抗CD45RA抗体、抗CD62L抗体、抗CD8抗体、抗EOMES抗体、抗T-bet抗体、抗TCRab抗体和抗TCRrd抗体；所述用于监测免疫活化的抗体包括：抗CD38抗体、抗CD39抗体、抗CD69抗体、抗CD80抗体、抗CD86抗体和抗HLA-DR抗体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗2B4抗体连接有荧光素RB730、所述抗BTLA抗体连接有荧光素RR664、所述抗CD160抗体连接有荧光素RR600、所述抗LAG-3抗体连接有荧光素RV496、所述抗VISTA抗体连接有荧光素RB780、所述抗CD95抗体连接有荧光素RV520、所述抗CTLA4抗体连接有荧光素RR778、所述抗PD-1抗体连接有荧光素RV805、所述抗TIGIT抗体连接有荧光素RV444、所述抗TIM3抗体连接有荧光素RB515、所述抗CCR6抗体连接有荧光素RR678、所述抗CD127抗体连接有荧光素RB667、所述抗CD183抗体连接有荧光素RR705、所述抗CD25抗体连接有荧光素RV480、所述抗CD28抗体连接有荧光素RV734、所述抗CD3抗体连接有荧光素RV780、所述抗CD4抗体连接有荧光素RV624、所述抗CD45RA抗体连接有荧光素RV526、所述抗CD62L抗体连接有荧光素RB697、所述抗CD8抗体连接有荧光素RV650、所述抗EOMES抗体连接有荧光素RV681、所述抗T-bet抗体连接有荧光素RV656、所述抗TCRab抗体连接有荧光素RB608、所述抗TCRrd抗体连接有荧光素RB574、所述抗CD38抗体连接有荧光素RB670、所述抗CD39抗体连接有荧光素RB710、所述抗CD69抗体连接有荧光素RV600、所述抗CD80抗体连接有荧光素RB713、所述抗CD86抗体连接有荧光素RV540、所述抗HLA-DR抗体连接有荧光素RV645。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，每种所述抗体分别包装，所述抗体的浓度为80～120μg/ml，优选100μg/ml。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，每种所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洪岩，熊慧，李亚洲，梁宛丙，李欢，
申请(专利权)人：武汉思泰得医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：