一种HBVBCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术提出了一种HBV BCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒及其使用方法，试剂盒包括检测A1762T和G1764A两个突变位点的引物和探针、HBV野生型引物和探针、内参引物和探针、PCR反应混合液、阳性对照和阴性对照。检测A1762T和G1764A两个突变位点的引物自5'端第15位和第20位碱基加入锁核酸修饰。检测A1762T突变位点的上游引物自5'端第21位设置1个碱基错配；检测G1764A突变位点的下游引物自5'端第20位和第22位分别设置1个碱基错配。本发明专利技术通过ARMS

【技术实现步骤摘要】
一种HBV BCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒及其使用方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种HBV BCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒及其使用方法。

技术介绍

[0002]乙型肝炎(HBV)是严重威胁我国人民健康的病毒性传染病之一，在HBV持续感染过程中，其基因组DNA可出现各种变异，其变异率远远高于其它DNA病毒。核心启动子(BCP)区是HBV前C区mRNA转录的重要元件，BCP区的突变在病毒复制、表达及致病等方面有着重大意义。BCP区的突变形式包括T1753A/C、A1762T、G1764A等，其中以1762
‑
1764双联突变最为常见。与野生株相比，BCP区变异株由于病毒复制水平提高，逃脱机体的免疫监视而具有更强的致病性，同时变异株对抗病毒药物产生耐药性，其结果一方面引起持续感染而不断诱导肝细胞炎性损害，降低肝脏功能贮备，并增加产生新的HBV基因突变的机会；另一方面突变病毒毒力的增强和抗原表位的改变，可以引起过度免疫应答反应，造成严重的肝细胞损伤，导致乙肝慢性化、重症化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HBV BCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒，其特征在于：包括检测A1762T和G1764A两个突变位点的引物和探针；所述检测A1762T突变位点的引物和探针序列如SEQ ID NO:1
‑
3所示；检测G1764A突变位点的引物和探针序列如SEQ ID NO:4
‑
6所示；检测A1762T突变位点的上游引物自5'端第21位设置1个碱基错配，错配方式为A
‑
T互换；检测G1764A突变位点的下游引物自5'端第20位和第22位分别设置1个碱基错配，错配方式分别为A
‑
C互换，G
‑
T互换。2.如权利要求1所述的一种HBVBCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒，其特征在于：检测A1762T和G1764A突变位点的上下游引物自5'端第15
‑
20位的一个碱基或多个碱基均加入锁核酸修饰。3.如权利要求1所述的一种HBVBCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒，其特征在于：还包括HBV野生型引物和探针，引物和探针序列如SEQ ID NO:7
‑
9所示。4.如权利要求3所述的一种HBVBCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述检测A1762T和G1764A两个突变位点的探针的5'端标记FAM，3'端标记BHQ1猝灭基团；所述HBV野生型探针的5'端标记FAM荧光基团，3'端标记BHQ2猝灭基团。5.如权利要求3所述的一种HBVBCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒，其特征在于：还设置有内参引物和探针，所述内参为根据人描定蛋白重复区域53所设计，所述内参引物和探针的序列如SEQ ID NO:10
‑
12所示。6.如权利要求5所述的一种HBVBCP区1762/1764突变数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊慧，高峰英，肖樊，
申请(专利权)人：武汉思泰得医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：