一管法检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及试剂盒技术领域。本发明专利技术提供了一管法检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒及其应用。该试剂盒包含两个组份。一种是高效率的提取试剂：比现有的提取试剂操作更简单、使用更方便；不含有机溶液，保护操作人员和减少环境污染。只需要3步操作就可将血清中的乙肝病毒DNA高效地结合至磁珠上。另一种组分是扩增试剂：用于扩增的引物和探针互补结合B，C，D基因型的共同片段，扩增效率高达95%以上；但不结合其它病毒（如EB病毒、丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒等）的核酸序列，特异性高。对血清样本的最低检测限为5国际单位/毫升。检测限为5国际单位/毫升。检测限为5国际单位/毫升。

【技术实现步骤摘要】
一管法检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及试剂盒
，尤其涉及一管法检测乙型肝炎病毒DNA的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]目前应用于实时荧光定量PCR检测的DNA提取方法主要有四种，即碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱法和磁珠法。磁珠法提取DNA是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的DNA分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附，而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒(即磁珠
‑
DNA混合物)，再用洗脱液洗脱，从而得到纯净的DNA。再将纯净DNA加入到PCR反应液中进行荧光定量PCR反应。
[0003]目前常用的磁珠法提取的过程中所用的提取剂种类繁杂，有机溶剂的大量使用也容易对操作者带来伤害。且在整个洗脱过程中需要多步洗涤，才能够相对彻底地去除蛋白和盐分子，进而增加了整个实时荧光定量PCR检测过程的耗时，不仅增加了操作的工作量，还容易出现污染，进而影响最终的检测精度。此外，由于DNA提取与PCR扩增不在同一载体中进行，在提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙型肝炎病毒DNA定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上游引物、下游引物、探针和乙型肝炎病毒DNA提取液；所述上游引物的序列为：a
‑
1：ACTGTTCAAGCCTCCAAG；b
‑
1：TAGGAGGCTGTAGGCATAAAT；或c
‑
1：TTGTTGGTTCTTCTGGACTA；所述下游引物的序列为：a
‑
2：AGAGTAACTCCACAGAAGC；b
‑
2：AGATGATTAGGCAGAGGTGAA；或c
‑
2：GTGCTGGTGGTTGATGAT；所述探针的序列为：a
‑
3：TGTGCCTTGGGTGGCTTTGGGGCAT；b
‑
3：AGGCATAAATTGGTCTGTTCACCAGCACCAT；或c
‑
3：TCAAGGTATGTTGCCCGTTTGT。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乙型肝炎病毒DNA提取液包括提取液1~4，所述提取液1为曲拉通X
‑
100、异硫氰酸胍盐、盐酸胍、Tris、SDS、EDTA和氯化钠中...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩亚平，王玲，臧百胜，顾城玮，郭昀欣，
申请(专利权)人：北京吉检医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：