可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体及其应用制造技术

本公开提供一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体及其应用，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示，或所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.2所示。该核酸适配体相比于蛋白抗体具有更高的亲和特异性，且无免疫原性、能够化学合成、分子量小且性质稳定、能够特异性结合氟苯尼考及氟苯尼考胺，该核酸适配体以氟苯尼考及氟苯尼考胺为靶标，可实现氟苯尼考及氟苯尼考胺定性和定量的快速检测，成本低、特异性高且适用范围广，还可以基于该核酸适配体构建各种用于检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的生物传感器。尼考胺的生物传感器。尼考胺的生物传感器。

【技术实现步骤摘要】
可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体及其应用


[0001]本公开涉及生物
，尤其涉及一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体及其应用。

技术介绍

[0002]目前，对于氟苯尼考和氟苯尼考胺的检测方法以免疫分析法和气相色谱
‑
质谱联用法为主；免疫分析法适用于现场检测但抗体的制备需要实验动物，很难被重复生产；气相色谱
‑
质谱联用法可用于确证检测，但前期处理过程复杂，需进行衍生化处理。。
[0003]因此，亟需操作简便且能够高效、高灵敏度检测氟苯尼考及氟苯尼考胺的检测技术。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本公开的目的在于提出一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体及其应用。
[0005]基于上述目的，本公开第一方面提供了一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]基于相同目的，本公开第二方面提供了一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.2所示。
[0007]基于相同目的，本公开第三方面提供了一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，所述核酸适配体的序列与SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列具有60％以上的同源性；
[0008]或，
[0009]所述核酸适配体的序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列的杂交序列；
[0010]或，
[0011]所述核酸适配体的序列为由SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列转录的RNA序列。
[0012]基于相同目的，本公开第四方面提供了如本公开第一方面、第二方面或第三方面所述的可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体在制备氟苯尼考和/或氟苯尼考胺检测试剂盒或氟苯尼考和/或氟苯尼考胺分子探针中的应用。
[0013]基于相同目的，本公开第五方面提供了应用本公开第一方面、第二方面或第三方面所述的可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体的氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的检测方法，所述方法包括：将核酸适配体与胶体金避光反应30～35min，然后向反应后的体系中加入待测样品，混匀，于37～40℃避光反应60～70min后测定溶液的吸光度值。
[0014]基于相同目的，本公开第六方面提供了一种用于检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的试剂盒，所述试剂盒包括本公开第一方面、第二方面或第三方面所述的可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体。
[0015]从上面所述可以看出，本公开提供的可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体及其应用，该核酸适配体相比于蛋白抗体具有更高的亲和特异性，且无免疫原性、能够化学合成、分子量小且性质稳定、能够特异性结合氟苯尼考及氟苯尼考胺，该核酸适配体以氟苯尼考及氟苯尼考胺为靶标，可实现氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺定性和定量的快速检测，成本低、特异性高且适用范围广，还可以基于该核酸适配体构建各种用于检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的生物传感器；该核酸适配体作为抗生素识别分子为食品加工、食品管理及营养规划等领域中的重要工具。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本公开或相关技术中的技术方案，下面将对实施例或相关技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本公开的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1为本公开实施例提供的甲苯磺酰基磁珠与氟苯尼考胺共价偶联(A)及MB
‑
SELEX筛选流程图(B)；
[0018]图2为本公开实施例提供的核酸适配体筛选过程中回收率富集率的变化图；
[0019]图3为本公开实施例提供的核酸适配体SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的二级结构预测图；
[0020]图4为本公开实施例提供的核酸适配体SEQ ID No.1和SEQ ID No.2利用GO的荧光共振能量转移检测亲和力的非线性拟合曲线图；
[0021]图5为本公开实施例提供的核酸适配体SEQ ID No.2的结合力分析示意图；
[0022]图6为本公开实施例提供的核酸适配体SEQ ID No.2的特异性分析示意图；
[0023]图7为本公开实施例提供的核酸适配体SEQ ID No.2用于氟苯尼考检测的标准曲线。
具体实施方式
[0024]为使本公开的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本公开进一步详细说明。
[0025]需要说明的是，除非另外定义，本公开实施例使用的技术术语或者科学术语应当为本公开所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。
[0026]氟苯尼考(Florfenicol，FF)作为一种广谱类抗菌药在临床上被广泛应用，但其半衰期长，在动物组织中残留会使细菌产生耐药性，且具有胚胎毒性，从而严重危害消费者的健康与安全。氟苯尼考胺(Florfenicol amine hydrochloride，FFA)是氟苯尼考的主要代谢物，不具有任何抗菌活性，用作监测氟苯尼考动物和环境残留物的标记物。为了确保食用组织中氟苯尼考残留的存在，最大残留限量标准设定为氟苯尼考和氟苯尼考胺的总和。
[0027]目前，对于氟苯尼考和氟苯尼考胺的检测方法以免疫分析法和气相色谱
‑
质谱联用法为主。免疫分析法适用于现场检测但抗体的制备需要实验动物，很难被重复生产。气相色谱
‑
质谱联用法可用于确证检测，但前期处理过程复杂，需进行衍生化处理。
[0028]因此，亟需操作简便且能够高效、高灵敏度检测氟苯尼考及氟苯尼考胺的检测技
术。
[0029]为了解决上述问题，本公开提供了一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，所述核酸适配体的序列为5'
‑
GCTGTGTGACTCCTGCAAACGGCCAGTGGGTGGGGCGGGTGGCGGCC GGTTGTTTCTATGCGCAGCTGTATCTTGTCTCC
‑
3'(SEQ ID NO.1)。经试验证明，序列为SEQ ID No.1的核酸适配体的解离常数Kd值为34.65
±
10.07nmol/L，对氟苯尼考及氟苯尼考胺具有良好的特异性。
[0030]对序列为SEQ ID No.1的核酸适配体进行二级结构预测，发现其结构中含有典型的茎环结构，而且核酸适配体与靶标结合中依赖核酸适配体的二级结构，茎环结构属于二级结构中的一种，茎环结构的形成是核酸适配体呈现亲和性的结构基础，含有典型的茎环结构表明该核酸适配体具有较好的稳定性；还发现该核酸适配体的序列中间具有可能结合的发夹结构，可以在此进行截断优化。
[0031]本公开还提供了一种可特异性识别氟苯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种可特异性识别氟苯尼考及氟苯尼考胺的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的序列与SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列具有60％以上的同源性；或，所述核酸适配体的序列为SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列的杂交序列；或，所述核酸适配体的序列为由SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的序列转录的RNA序列。4.根据权利要求1～3中任一项所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列上结合有标记物；优选地，所述标记物包括荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、si RNA和酶中的一种或多种。5.根据权利要求1～3中任一项所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰；优选地，所述修饰包括磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取...

【专利技术属性】
技术研发人员：王向红，刘若冰，史明慧，桑亚新，刘敏轩，崔琦琦，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：