新型DNA适体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及新型DNA适体及其用途。具体地，本发明专利技术涉及使用Cell

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型DNA适体及其用途


[0001]本公开涉及新型DNA适体。具体涉及使用Cell SELEX从胰腺癌DNA文库中选择特异性结合胰腺癌细胞的DNA适体。本专利技术基于一项研究，该研究既是国家癌症中心(NCC)的原始研究项目，也是中小企业和TIPS计划(Tech Incubator Program for Startup)的一部分。
[0002][项目编号：NCC
‑
1210080，标题：使用Cell
‑
SELEX鉴定胰腺癌特异性转移因子][0003][项目编号：NCC
‑
1710400，标题：分泌到肿瘤微环境中的激酶FAM20C调控胰腺癌转移的研究][0004][项目编号：S2562351，标题：利用适体抗体药物偶联物开发胰腺癌治疗剂]
技术介绍

[0005]适体是指具有独特的三维结构单链DNA或RNA寡核苷酸，以类似于抗体的方式与目标分子特异性结合。一般来说，适配子在浓度低至纳摩尔的情况下对皮克摩尔具有很高的亲和力。
[0006]由于其靶特异性结合特性，通常将适体和抗体进行比较。与抗体相比，适体易于通过化学合成而产生，无需使用细胞或动物的生物过程，在高温下相对稳定，并且由于其体积小，在接近目标方面具有优势。此外，适体在作为治疗剂的潜力方面优于抗体，因为适体在化学合成过程中易于修饰，并且不具有免疫原性和无毒性。然而，适体的缺点是它们的半衰期短，因为它们在体内被核酸酶降解。这一缺点可以通过各种化学修饰来克服。
[0007]胰腺癌是一种预后最差的癌症，其1年死亡率是所有癌症中最高的。胰腺癌的2年生存率约为10％，5年生存率仅为8％或更低。在过去二十年中，几乎所有癌症的5年生存率都大幅上升，但胰腺癌的结果非常糟糕，从1997年的3％上升到2016年的8％左右。
[0008]事实上，只有20％左右的胰腺癌患者被认为是可手术的，即使在这种情况下，只有当肿瘤大小小于等于1厘米且没有淋巴结转移或远处转移时，手术后才能预期90％或更高的存活率。然而，大多数患者在诊断时已经无法进行手术。当肿瘤无法手术时，患者通常依赖化疗或放疗。然而，由于目前还没有明确的标准化治疗方法，胰腺癌的早期检测对于提高生存率非常重要。
[0009]胰腺癌几乎没有早期症状，大多数情况下，当患者能够识别症状时，癌症已经发展到晚期。因此，胰腺癌的早期诊断非常困难。目前，几乎没有胰腺癌的早期检测标志物。
[0010]早期胰腺癌通常定义为大小小于2厘米、局限于胰腺且无浸润或淋巴结转移的肿瘤。然而，即使胰腺癌的大小小于2厘米(早期胰腺癌的阈值)，也有多达50％的此类病例发现了转移。即使在II期，根据肿瘤大小、淋巴结转移和远处转移进行胰腺癌分期时被归类为早期胰腺癌，在连接肠系膜上静脉或门静脉的区域也常见浸润，以及少量细胞的早期转移。在这种情况下，肿瘤是不能切除的。在考虑到扫描未发现远处转移且确定肿瘤局限于胰腺的情况下，手术后不久发现远处转移并不罕见。在这种情况下，即使手术后复发的风险也很高，由于没有疗效显著的抗癌药物，中位生存期仅为6～12个月。鉴于上述情况，有必要检测
尚未发展为实质性远处转移或少量细胞早期转移的早期胰腺癌，至少是为了早期手术切除，这是胰腺癌唯一的治疗方法。
[0011]在开发针对细胞表面蛋白的特异性探针时，细胞表面蛋白的胞外结构域可以以重组蛋白的形式分离和纯化，然后用作抗原来开发抗体或选择适体。选择适体的筛选过程通常称为SELEX(通过指数富集的配体系统进化，systematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术。这种技术通常使用分离的重组蛋白。然而，在分离过程中，细胞表面蛋白质的三维结构可能会发生改变，如果蛋白质的三维结构对与目标蛋白质的结合至关重要，则可能导致所选适体无法实际结合到细胞表面上的目标蛋白质的情况。
[0012]与传统的SELEX技术不同，使用Cell
‑
SELEX方法可以克服这些局限性，该方法涉及使用活细胞特异性地选择适体细胞膜。
[0013]在本专利技术中，使用Cell
‑
SELEX方法在胰腺癌细胞上选择对胰腺癌具有高结合亲和力的DNA适体。已发现所选择的适体在细胞靶向方面是有效的。
[0014][现有技术文献][0015](专利文献1)KR 10
‑
1458947
[0016](专利文献2)KR 10
‑
1250557

技术实现思路

[0017]本专利技术的目的是提供新型DNA适体。特别是，新型DNA适体是显示癌症特异性结合的DNA适体。
[0018]本专利技术的另一个目的是提供一种使用显示癌症特异性结合的DNA适体诊断或治疗癌症的方法。
[0019]本专利技术旨在开发用于探测癌细胞的适体。利用Cell
‑
SELEX技术选择了特异性结合胰腺癌细胞膜的适体。具体地，在本专利技术中，使用从转移性胰腺癌组织分离的CMLu
‑
1细胞作为靶细胞和正常胰腺组织细胞HPNE作为对照，选择了特异性结合胰腺癌细胞的适体。
[0020]在一个方面，本专利技术提供了一种包含如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列的DNA适体。在另一方面，本专利技术提供一种DNA适体，其包含与如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少90％或95％同源性的核苷酸序列。在本专利技术的一个方面中，DNA适体可显示癌症特异性结合。在本专利技术的一个方面中，DNA适体可由如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成。
[0021]在另一方面，本专利技术提供了一种DNA适体，其包含与如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少90％或95％同源性的核苷酸序列。在本专利技术的一个方面中，DNA适体可由SEQ ID NO:4的核苷酸序列组成。
[0022]如本文所用，术语“具有至少90％同源性的核苷酸序列”是指包含一个或多个核苷酸的添加、删除或替换的核苷酸序列，其在核苷酸序列中相对于参考序列具有90％或以上但小于100％的同一性，并且显示出类似的癌症特异性结合。
[0023]在本专利技术的一个方面中，与如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少90％的同源性可指在SEQ ID NO:4的区域中具有不同于如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列的核苷酸序列，而不是对应于如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列的区域。
[0024]如本文所用，术语“DNA适体”是指短的单链寡核苷酸，其以高亲和力和特异性结合到相应的靶并具有独特的三维结构。通过迭代的体外选择和富集过程，可以从DNA适体库中
选择与特定靶点特异结合的DNA分子，即DNA适体。
[0025]在本专利技术的一个实施例中，根据序列相似性将通过Cell
‑
SELEX过程富集的DNA池的适体聚集到11个适体家族(SQ1到SQ11)。在这些家族中，SQ8已被确定为与胰腺癌源性转移癌细胞CMLu...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种DNA的适体，其特征在于，其包含与如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少90％同源性的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的适体，其特征在于，所述适体包含如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的适体，其特征在于，所述适体由如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成。4.如权利要求1所述的适体，其特征在于，所述适体包含与如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少90％同源性的核苷酸序列。5.如权利要求1所述的适体，其特征在于，所述适体由如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成。6.一种包含如权利要求1
‑
5任一项所述适体的用于靶向癌症组织的组合物。7.一种包含如权利要求1
‑
5任一项所述适体的用于诊断癌症的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：金润姬，许钧，崔先一，金仁厚，
申请(专利权)人：株式会社在鹏生物A，
类型：发明
国别省市：