一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，特别是涉及一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸。本发明专利技术提供一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有吉西他滨亚磷酰胺单体基团。本发明专利技术将核苷药物吉西他滨设计合成为可用于固相合成的亚磷酰胺单体，使用固相合成技术实现吉西他滨对寡聚核苷酸上的定点精准功能化，制备获得的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸可以在核酸酶的作用下释放吉西他滨，对肿瘤细胞仍具有较高的细胞毒性，保留了吉西他滨的药物活性，具有良好的产业化前景。具有良好的产业化前景。

【技术实现步骤摘要】
一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸


[0001]本专利技术涉及药物化学领域，特别是涉及一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸。

技术介绍

[0002]吉西他滨是一种胞嘧啶核苷衍生物，进入人体后，由脱氧胞嘧啶激酶活化，由胞嘧啶核苷脱氨酶代谢。其作用机制为主要代谢物在细胞内掺入DNA，从而抑制DNA转录和复制，主要作用于G1/S期。吉西他滨除了掺入DNA以外，还能抑制核苷酸还原酶，导致细胞内脱氧核苷三磷酸酯减少；同时也能抑制脱氧胞嘧啶脱氨酶减少细胞内代谢物的降解，具有自我增效的作用。1997年吉西他滨被FDA批准成为治疗胰腺癌的一线化疗药物，作为胰腺癌化疗的金标准。目前，吉西他滨已被用于多种实体瘤的临床治疗。
[0003]寡聚核苷酸在分子生物学中正发挥着与来越重要的作用，其可以用于核酸序列检测的探针、单碱基多样性分析、反义寡聚核苷酸等，是一种非常有效的研究工具。使用功能分子对寡聚核苷酸进行功能化修饰，构建功能化的寡聚核苷酸是核苷酸领域近年来的研究热点。

技术实现思路

[0004]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，用于解决现有技术中的问题。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有吉西他滨亚磷酰胺单体基团。
[0006]在本专利技术一些实施方式中，所述核酸适配体片段修饰有一个或多个吉西他滨亚磷酰胺单体基团，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5/>’
端和/或修饰于核酸适配体片段的3
’
端和/或添加于核酸适配体片段的中间。
[0007]在本专利技术一些实施方式中，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二脂键连接。
[0008]在本专利技术一些实施方式中，修饰于核酸适配体片段的5
’
端的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0009][0010]添加于核酸适配体片段的中间的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0011][0012]修饰于核酸适配体片段的3
’
端的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：
[0013][0014]在本专利技术一些实施方式中，所述核酸适配体片段的多核苷酸序列包括如SEQ ID NO.5～8其中之一所示的序列。
[0015]在本专利技术一些实施方式中，所述吉西他滨修饰的寡聚核苷酸的多核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1～4其中之一所示的序列。
[0016]本专利技术另一方面提供上述的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸的制备方法，包括：
[0017]将吉西他滨亚磷酰胺单体通过固相合成法与核酸适配体片段连接。
[0018]在本专利技术一些实施方式中，固相合成法的反应温度为15～35℃，反应时间为1～20分钟，空气湿度为30％～70％。
[0019]在本专利技术一些实施方式中，所述吉西他滨亚磷酰胺单体的化学结构式如下所示：
[0020][0021]本专利技术另一方面提供上述的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸在制备药物中的用途。
附图说明
[0022]图1显示为本专利技术实施例2中吉西他滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0023]图2显示为本专利技术实施例2中吉西他滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0024]图3显示为本专利技术实施例2中吉西他滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0025]图4显示为本专利技术实施例2中吉西他滨修饰的寡聚核苷酸质谱鉴定结果示意图。
[0026]图5显示为本专利技术实施例3中吉西他滨修饰的寡聚核苷酸对于癌细胞抑制实验结果示意图。
[0027]图6显示为本专利技术实施例4中吉西他滨修饰的寡聚核苷酸用于癌细胞的特异性识
别实验结果示意图。
具体实施方式
[0028]为了使本专利技术的专利技术目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容容易地了解本申请专利技术的其他优点及功效。
[0029]本专利技术专利技术人经过大量实践研究后意外地发现，修饰有吉西他滨的寡聚核苷酸不仅可以保持吉西他滨原有的药物活性，还可以增加药物的靶向性、减少毒副作用并提高生物利用度，在此基础上完成了本专利技术。
[0030]本专利技术第一方面提供一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有吉西他滨亚磷酰胺单体基团。吉西他滨修饰的寡聚核苷酸通常可以由吉西他滨亚磷酰胺单体通过固相合成法制备获得，制备获得的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸可以包括由吉西他滨亚磷酰胺单体所对应形成的吉西他滨亚磷酰胺单体基团、以及与吉西他滨亚磷酰胺单体基团连接的核酸适配体片段。
[0031]本专利技术所提供的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸中，可以包括吉西他滨亚磷酰胺单体基团。吉西他滨亚磷酰胺单体基团的具体结构通常与所使用的吉西他滨亚磷酰胺单体是相对应的。在本专利技术一具体实施例中，所使用的吉西他滨亚磷酰胺单体的化学结构式如下所示：
[0032][0033]本专利技术所提供的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸中，吉西他滨亚磷酰胺单体基团可以修饰于核酸适配体片段的各个位置，例如，吉西他滨亚磷酰胺单体基团可以修饰于核酸适配体片段的5
’
端，也可以修饰于核酸适配体片段的3
’
端，也可以添加于核酸适配体片段的中间。核酸适配体片段可以修饰有一个或多个吉西他滨亚磷酰胺单体基团，例如，含60个碱基的寡聚核苷酸序列可以修饰有1-10个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个吉西他滨亚磷酰胺单体基团。当核酸适配体片段修饰有多个吉西他滨亚磷酰胺单体基团时，各吉西他滨亚磷酰胺单体基团之间可以是非连续的，或至少部分的吉西他滨亚磷酰胺单体基团之间可以是连续的。
[0034]本专利技术所提供的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸中，如上所述，吉西他滨修饰的寡聚核苷酸通常可以由吉西他滨亚磷酰胺单体通过固相合成法制备获得，所以在形成的吉西他滨修饰的寡聚核苷酸中，吉西他滨亚磷酰胺单体所形成的吉西他滨亚磷酰胺单体基团与(被修饰的)核酸适配体片段之间可以通过磷酸二脂键连接。具体来说，吉西他滨亚磷酰胺单体中的三价磷基团可以与核酸适配体片段的5
’
端的羟基基团偶联，从而可以形成磷酸二
脂键，而吉西他滨亚磷酰胺单体中的脱去保护(例如，DMT保护)的羟基基团可以与核酸适配体片段的3
’
端的亚磷酰胺基团偶联，从而可以形成磷酸二脂键，而吉西他滨亚磷酰胺单体中的脱去保护(例如，DMT保护)的羟基基团可以与吉西他滨亚磷酰胺单体中的亚磷酰胺基团反应，从而可以形成磷酸二脂键。
[0035]在本专利技术一具体实施例中，当吉西他滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5
’
端时，所形成的基团的化学结构式可以如下所示：
[0036]在本专利技术一具体实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，包括核酸适配体片段，所述核酸适配体片段修饰有吉西他滨亚磷酰胺单体基团。2.如权利要求1所述的一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，所述核酸适配体片段修饰有一个或多个吉西他滨亚磷酰胺单体基团，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团修饰于核酸适配体片段的5
’
端和/或修饰于核酸适配体片段的3
’
端和/或添加于核酸适配体片段的中间。3.如权利要求2所述的一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，所述吉西他滨亚磷酰胺单体基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二脂键连接。4.如权利要求2所述的一种吉西他滨修饰的寡聚核苷酸，其特征在于，修饰于核酸适配体片段的5
’
端的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：添加于核酸适配体片段的中间的吉西他滨亚磷酰胺单体基团的化学结构式如下所示：修饰于核酸适配体片段的3
’

【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，王雪强，何嘉轩，彭天欢，司马颖钰，符婷，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：