新型DNA适配体及其用途制造技术

本公开涉及新型DNA适配体及其用途。具体地，本公开涉及使用Cell

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型DNA适配体及其用途


[0001]本公开涉及新型DNA适配体(DNAaptamer)。具体而言，本公开涉及使用Cell
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SELEX从癌症DNA文库中选择与癌细胞特异性结合的DNA适配体。本公开还涉及包含靶向癌组织、诊断癌症或治疗癌症的新型DNA适配体的组合物。本公开基于国立癌症中心(National Cancer Center，NCC)的原始研究项目和来自中小企业和初创企业部的TIPS计划(Tech Incubator Program for Startup)的一部分进行的研究。
[0002][项目编号：NCC
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1210080，标题：使用Cell
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SELEX识别胰腺癌特异性转移因子][0003][项目编号：NCC
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1410270，标题：通过建立适配体
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抗体偶联平台开发新型抗癌药物][0004][项目编号：S2562351，标题：使用适配体
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抗体
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药物偶联物开发胰腺癌治疗药物]
技术介绍

[0005]适配体是指具有独特三维结构的单链DNA或RNA寡核苷酸，并以类似于抗体的方式与目标分子特异性结合。一般来说，适配体在浓度低至纳摩尔(nmol)到皮摩尔(pmol)时依旧具有高亲和力。
[0006]由于两者都具有靶标特异结合特性，通常将适配体与抗体进行比较。与抗体相比，适配体易于通过化学合成产生，而无需使用细胞或动物的生物学过程，在高温下相对稳定，并且由于其体积小，在接近靶标方面具有优势。此外，适配体在作为治疗剂的潜力方面优于抗体，因为它们在化学合成过程中易于修饰，并且不具有免疫原性和无毒性。然而，适配体的缺点是它们的半衰期短，因为它们在体内易被核酸酶降解。这种缺点可以通过各种化学修饰来克服。
[0007]癌症需要在早期发现和治疗。具体地，胰腺癌是一种预后最差的癌症，其1年死亡率是所有癌症中最高的。胰腺癌的2年生存率约为10％，5年生存率仅为8％或更低。在过去二十年中，几乎所有癌症的5年生存率都大幅上升，但胰腺癌的结果非常不佳，从1997年报道的3％上升到2016年的仅约8％。
[0008]实际上，只有20％左右的胰腺癌患者被认为是可手术的，即使在这种情况下，只有当肿瘤大小小于等于1cm且没有淋巴结转移或远端转移时，手术后的存活率才可能高达90％或更高。然而，大多数患者在确诊时已经无法进行手术。当肿瘤无法手术时，患者通常依赖化疗或放疗。但是，由于目前还没有明确的标准化治疗方法，早期发现胰腺癌对于提高生存率非常重要。
[0009]胰腺癌几乎没有早期症状，当患者意识到症状时，大多数情况下，癌症已经发展到晚期。因此，胰腺癌的早期诊断非常困难。目前，实践中几乎没有适用于胰腺癌的早期检测标志物。
[0010]早期胰腺癌通常定义为大小小于2cm且局限于胰腺且无浸润或淋巴结转移的肿瘤。然而，即使胰腺癌的大小小于2cm(早期胰腺癌的阈值)，也有多达50％的此类病例发现了转移。即使在II期(根据肿瘤大小、淋巴结转移和远端转移进行胰腺癌分期时分类为早期
胰腺癌)，在连接肠系膜上静脉或门静脉的区域也常见浸润，以及少量细胞的早期转移。在这种情况下，肿瘤是不能切除的。在考虑到扫描未发现远端转移且确定肿瘤局限于胰腺而对肿瘤进行手术的情况下，手术后不久发现远端转移并不罕见。在这种情况下，即使手术，复发的风险也很高，由于没有疗效显著的抗癌剂，中位生存期仅为6～12个月。鉴于上述情况，有必要检测尚未发展为实质性远端转移或少量细胞早期转移的早期胰腺癌，至少是为了早期手术切除(胰腺癌唯一的治愈性治疗方法)。
[0011]在开发靶向细胞表面蛋白的探针时，细胞表面蛋白的胞外结构域可以以重组蛋白的形式分离和纯化，然后用作抗原来开发抗体或选择适配体。选择适配体的筛选过程通常称为SELEX(通过指数富集的配体系统进化，systematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术。这种技术通常使用分离的重组蛋白。然而，在分离过程中，细胞表面蛋白质的三维结构可能会发生改变，如果蛋白质的三维结构对与靶蛋白的结合至关重要，则可能导致所选的适配体实际上无法结合细胞表面上的靶蛋白。
[0012]可通过使用Cell
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SELEX方法克服此类限制，与传统的SELEX技术不同，该方法涉及使用活细胞特异性地选择适配体细胞膜。
[0013]在本公开中，使用Cell
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SELEX方法在胰腺癌细胞上选择对胰腺癌具有高结合亲和力的DNA适配体，然后对所选适配体进行进一步研究，以提高细胞和组织的靶向效率以及血清稳定性。已经发现，所选择的适配体可以特异性地结合胰腺癌以及结肠癌、肝癌、肺癌、脑瘤、口腔癌、卵巢癌和乳腺癌各种癌症。
[0014][现有技术文献][0015](专利文献1)KR 10
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1458947
[0016](专利文献2)KR 10
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1250557
[0017]专利技术简述
[0018]本公开的一个目的是提供新型DNA适配体。具体而言，新型DNA适配体是表现出癌症特异性结合的DNA适配体。
[0019]本公开的另一个目的是提供一种使用表现出癌症特异性结合的DNA适配体诊断或治疗癌症的方法。
[0020]本公开的目的是开发能够探测癌细胞的适配体。利用Cell
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SELEX技术选择了特异性结合胰腺癌细胞膜的适配体。具体而言，在本公开中，使用从转移性胰腺癌组织分离的CMLu
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1细胞作为靶细胞、正常胰腺组织细胞HPNE作为对照，选择了特异性结合胰腺癌细胞的适配体。
[0021]在一方面，本公开提供了包含如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列的DNA适配体。在另一方面，本公开提供了包含与如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少90％或95％同源性的核苷酸序列的DNA适配体。在本公开的一个方面，DNA适配体可能表现出癌症的特异性结合。在本公开的一个方面，DNA适配体可由如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列组成。
[0022]在另一方面，本公开提供了一种DNA适配体，其由与如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少90％或95％同源性的核苷酸序列组成。在本公开的一个方面，DNA适配体可由如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列组成。
[0023]本文所使用的“具有至少90％同源性的核苷酸序列”是指包含一至多个核苷酸的添加、缺失或取代以与参考序列具有大于等于90％但小于100％的核苷酸序列同一性的核
苷酸序列，并表现出类似的癌症特异性结合。
[0024]在本公开的一个方面，与如SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列具有至少90％的同源性可指在SEQ ID NO:4的一个区域，而不是在与SEQ ID NO:6的核苷酸序列相对应的区域中与SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种DNA适配体，所述DNA适配体包含与如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列具有至少90％的同源性的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的DNA适配体，所述DNA适配体包含如SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的DNA适配体，其中，所述适配体已被修饰为对DNA酶具有抗性。4.如权利要求3所述的DNA适配体，其中，所述修饰是将一个或多个核苷酸中的糖基2'碳上的
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OH基团替换为
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Me(甲基)、
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OMe、
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NH2、
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F(氟)、
‑
O
‑2‑
甲氧基乙基
‑
O
‑
丙基、
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O
‑2‑
甲硫基乙基、
‑
O
‑3‑
氨基丙基、
‑
O
‑3‑
二甲基氨基丙基、
‑
O
‑
N
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甲基乙酰胺基或
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O
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二甲基酰胺氧基乙基。5.如权利要求3所述的DNA适配体，其中，在SEQ ID NO:6的至少10％的核苷酸中存在所述修饰。6.如权利要求3所述的DNA适配体，其中，所述DNA适配体具有如SEQ ID NO:8、12或14所示的核苷酸序列。7.如权利要求1所述的DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：金润姬，许钧，崔先一，金仁厚，
申请(专利权)人：株式会社在鹏生物A，
类型：发明
国别省市：