一种基于Cas蛋白的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种基于Cas蛋白的检测方法，包括以下步骤：S1、根据目的基因设计合成PCR扩增引物；并根据PCR扩增引物合成crRNA；S2、采用PCR扩增引物对目的基因进行PCR扩增，得到扩增产物；后用Cas蛋白、crRNA和荧光探针体系检测扩增产物；所述目的基因为骨髓增殖性肿瘤患者的突变体细胞基因。本检测技术最高可检测JAK2 V617F突变占比0.01%的混合gDNA，远高于临床所需的灵敏度；

【技术实现步骤摘要】
一种基于Cas蛋白的检测方法


[0001]本专利技术涉及一种用于基于Cas蛋白的检测JAK2 V617F突变的方法。

技术介绍

[0002]骨髓增殖性肿瘤(Myeloproliferative neoplasms，MPNs)是一类造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病，其特征是一系或者多系骨髓细胞克隆性增殖而细胞形态和功能相对正常，临床有一种或多种血细胞增生，常伴有脾大、出血倾向、骨髓纤维化和血栓形成等表现。经典MPNs主要包括真性红细胞增多症(polycythemia vera，PV)、原发性血小板增多症(essential thrombocythemia，ET)、原发性骨髓纤维化(primary myelofibrosis，PMF)等
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3]。经典MPNs的年发病率为0.5
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6.5/100000，但是JAK2 V617F的携带率远高于经典MPNs的发病率
[4,5]。JAK2 V617F是经典MPNs最具特征性的突变基因[3]，在PV，ET和PMF中，JAK2 V617F突变率分别为95％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于Cas蛋白的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、根据目的基因设计合成PCR扩增引物；并根据目的基因合成crRNA；S2、采用PCR扩增引物对目的基因进行PCR扩增，得到扩增产物；后用Cas蛋白、crRNA和荧光探针体系检测扩增产物；所述目的基因为骨髓增殖性肿瘤患者的突变体细胞基因。2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述crRNA的序列如SEQ ID NO.5
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7所示，所述目的基因的序列如SEQ ID NO.15所示。3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述目的基因直接从外周血提取。4.一种crRNA，其特征在于，crRNA的序列如SEQ ID...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁德生，陈妙妙，邬玲仟，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：