一种SARS-COV-2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法技术

本发明专利技术提供了一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法


[0001]本专利技术属于生物制品
，具体涉及一种SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019，COVID
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19)，简称"新冠肺炎"，世界卫生组织命名为"2019冠状病毒病"，是指2019新型冠状病毒感染(SARS
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COV
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2)导致的肺炎。目前，SARS
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COV
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2已有四种变异株(分别是Alpha、Beta、Gamma和Delta)被WHO列为需关注毒株，其中Delta变异株传播最广，相较于最原始新冠毒株，其传染性提高约75％。
[0003]预防病毒感染的有效途径是接种疫苗。目前，上市的新冠疫苗主要分为以下几个种类：mRNA类，全病毒灭活疫苗，腺病毒载体疫苗以及重组蛋白亚单位疫苗。然而，这些疫苗多少存在一些不足，且随着疫苗接种慢慢凸显。具体表现在以下几个方面：(1)注射类疫苗(mRNA，重组蛋白等)，可以降低发病，但是无法刺激机体产生局部粘膜免疫，无法阻止感染，携带和传播；(2)制造工艺复杂(mRNA)、高生物安全等级厂房要求(灭活)、高成本等因素制约疫苗在发展中国家普及；(3)腺病毒载体类受预先存在载体抗体影响，无法进行多次(2次以上)免疫，而新冠疫苗需要持续接种。(4)对德尔塔变异株的效率逐渐下降。因此，综合考虑疫苗有效性，安全性，工艺成熟，成本可控，适合大规模普及接种的新型疫苗仍然是急需的。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体及相应疫苗株和制备方法，具有针对Delta变异株具有优异的免疫效果和较高的安全性。
[0005]本专利技术提供了一种新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，在新城疫病毒载体的基础上插入S2P蛋白基因和deltaRBD
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Fc融合蛋白基因；所述S2P蛋白是在原始新冠病毒株S蛋白基础上进行K986P和V987P突变得到；
[0006]所述S2P蛋白基因插入在新城疫病毒的基因P和M基因之间；
[0007]所述deltaRBD
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Fc融合蛋白基因插入在M基因和F基因之间。
[0008]优选的，所述S2P蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0009]优选的，所述deltaRBD
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Fc融合蛋白由N端到C端依次包括人血清白蛋白信号肽(HSA信号肽)、Delta毒株S蛋白的受体结合域RBD片段和人IgG Fc片端。
[0010]优选的，所述deltaRBD
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Fc融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
[0011]优选的，所述S2P蛋白基因或deltaRBD
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Fc融合蛋白基因的5'端依次添加转录终止信号、转录起始信号和kozak序列，所述S2P蛋白基因或deltaRBD
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Fc融合蛋白基因的3'端依次添加转录终止信号、转录起始信号。
[0012]优选的，所述新城疫病毒载体包括新城疫LaSota病毒株载体。
[0013]本专利技术提供了一种新冠病毒SARS
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COV
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2的二价新城疫病毒粒子或疫苗株，由所述新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体经病毒拯救获得。
[0014]本专利技术提供了所述二价重组新城疫病毒粒子或疫苗株的制备方法，包括以下步骤：
[0015]1)PCR扩增S2P蛋白基因、deltaRBD
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Fc融合蛋白基因和NDV载体基因序列；
[0016]2)将扩增的S2P蛋白基因片段插入NDV载体的P基因和M基因之间，将deltaRBD
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Fc融合蛋白基因片段插入载体的M基因和F基因，形成重组载体；
[0017]3)将所述重组载体与病毒拯救辅助质粒共转染BHK21
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T7细胞，经病毒拯救获得二价重组新城疫病毒粒子或疫苗株。
[0018]本专利技术提供了一种新冠病毒SARS
‑
COV
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2的二价新城疫病毒疫苗，包括所述二价新城疫病毒粒子或疫苗株。
[0019]本专利技术提供了所述重组二价新城疫病毒粒子或疫苗株在制备防控新冠肺炎的疫苗中的应用。
[0020]本专利技术提供了一种新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，在新城疫病毒载体的基础上插入S2P蛋白基因和deltaRBD
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Fc融合蛋白基因；所述新冠病毒S2P蛋白基因插入在新城疫病毒P基因和M基因之间；所述deltaRBD
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Fc融合蛋白基因插入在M基因和F基因之间。本专利技术利用病毒反向遗传学技术，将S2P蛋白基因和以融合蛋白形式Delta毒株RBD抗原插入新城疫病毒载体中，基于新城疫病毒在人体中安全性和病毒易复制获得特性，使制备的载体疫苗株具有较高的免疫安全性和容易生产特点；同时，将所述重组新城疫病毒载体拯救的疫苗株免疫动物，无论是经鼻腔接种亦或肌肉注射免疫途径，与单一S蛋白抗原免疫效果相比，均能显著提高疫苗株的免疫效果。本专利技术以人IgG Fc片段与Delta毒株RBD形成融合蛋白，与其他蛋白多肽(TBSV、Ferritin)形成的融合蛋白相比，具有更优异的免疫原性。
附图说明
[0021]图1为本专利技术构建的新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体结构示意图；
[0022]图2为用ELISA检测重组NDV载体病毒株感染Vero细胞后RBD的表达量结果；
[0023]图3为本专利技术采用候选疫苗株免疫动物程序示意图；
[0024]图4为免疫后血清IgG抗体滴度，其中图4a为新冠S蛋白IgG抗体滴度；图4b为NDV载体IgG抗体滴度；
[0025]图5为构建病毒株反转录PCR凝胶鉴定电泳图，泳道1：NDV
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S2P扩增片段，泳道2：NDV
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S2P
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P2A
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deltaRBD
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Fc扩增片段，泳道3
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4：NDV
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S2P
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deltaRBD
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Fc扩增片段，泳道5
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6：NDV
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S2P
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deltaRBD
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，其特征在于，在新城疫病毒载体的基础上插入S2P蛋白基因和deltaRBD
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Fc融合蛋白基因；所述S2P蛋白是在原始新冠病毒株S蛋白基础上进行K986P和V987P突变得到的；所述S2P蛋白基因插入新城疫病毒载体的P基因和M基因之间；所述deltaRBD
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Fc融合蛋白基因插入新城疫病毒载体M基因和F基因之间。2.根据权利要求1所述新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述S2P蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。3.根据权利要求1所述新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述deltaRBD
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Fc融合蛋白由N端到C端依次包括人血清白蛋白信号肽、新冠delta毒株S蛋白的受体结合域RBD片段和人IgG Fc片端。4.根据权利要求3所述新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，其特征在于，所述deltaRBD
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Fc融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。5.根据权利要求1所述新冠病毒SARS
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COV
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2的二价重组新城疫病毒载体，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：周孟云，毛水花，孙慧敏，陈瑞婷，宋家升，
申请(专利权)人：浙江迪福润丝生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：