一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法，所述检测方法包括：对待测结合雌激素片溶液与甾体杂质标准对照液进行高效液相色谱分析，根据分析结果利用外标法计算得到所述结合雌激素片中游离甾体杂质含量；所述游离甾体杂质包括雌酮、马烯雌酮或17α

【技术实现步骤摘要】
一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法


[0001]本专利技术属于药物分析领域，涉及一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法，具体涉及一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的高效液相色谱检测方法。

技术介绍

[0002]结合雌激素片是一种雌激素类药物，主要是用来治疗女性更年期综合症。绝经期的女性由于缺乏雌激素，容易出现血管舒缩症状，有血管舒缩症状时，会表现为有潮热和轰热出汗，每天可能会发作数次，严重影响到患者的工作和生活。通过服用结合雌激素片可以适当的补充一些雌激素，有利于缓解这种血管舒缩症状。
[0003]结合雌激素片中含有从孕母马尿液中提取的雌激素混合物，为水溶性雌激素硫酸钠盐混合物。雌激素硫酸钠盐降解会产生一些游离甾体杂质，主要包括雌酮、马烯雌酮和17α
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二氢马烯雌酮。现有的测定结合雌激素片含量的方法中，往往无法对非游离雌激素及游离的雌激素杂质进行区分，导致含量检测不准确。因此，有必要开发一种准确测定结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法。目前药物中游离甾体杂质含量的检测方法均为气相色谱法，且操作复杂，步骤繁多，其重复性与精密度均不理想，不适用于结合雌激素片剂，具有一定的应用局限性。
[0004]因此如何实现快速、高效、简便，经济地测定结合雌激素片中游离甾体杂质的含量成为了本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法，具体提供一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的高效液相色谱检测方法。
[0006]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法，所述检测方法包括：对待测结合雌激素片溶液与甾体杂质标准对照液进行高效液相色谱分析，根据分析结果利用外标法计算得到所述结合雌激素片中游离甾体杂质含量；
[0008]所述游离甾体杂质包括雌酮、马烯雌酮或17α
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二氢马烯雌酮中的任意一种或至少两种的组合。
[0009]本专利技术提供的方法适用于对结合雌激素片中雌酮、马烯雌酮或17α
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二氢马烯雌酮中任意一种单杂质组分进行检测，也适用于对雌酮和马烯雌酮的组合、马烯雌酮与17α
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二氢马烯雌酮的组合、雌酮与17α
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二氢马烯雌酮的组合进行检测，也适用于同时对雌酮、马烯雌酮和17α
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二氢马烯雌酮进行检测。
[0010]本专利技术提供的检测方法专属性好、精密度高、准确度高、分析快速、操作简便，对具有重要的应用价值。
[0011]优选地，所述待测结合雌激素片溶液的制备方法包括：利用稀释液对待测结合雌
激素片进行溶解，离心，收集上清液，即得。
[0012]所述甾体杂质标准对照液的制备方法包括：利用稀释液对甾体杂质标准品进行溶解，稀释，即得。
[0013]优选地，所述离心的转速为2000
‑
20000rpm，例如2000rpm、3000rpm、4000rpm、5000rpm、6000rpm、7000rpm、8000rpm、9000rpm、10000rpm、12000rpm、14000rpm、16000rpm、18000rpm、20000rpm等。
[0014]优选地，所述待测结合雌激素片溶液中结合雌激素的浓度为0.11
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0.13mg/mL，例如0.11mg/mL、0.112mg/mL、0.114mg/mL、0.116mg/mL、0.118mg/mL、0.12mg/mL、0.122mg/mL、0.124mg/mL、0.126mg/mL、0.128mg/mL、0.13mg/mL等，所述甾体杂质标准对照液中甾体杂质的浓度为1.4
‑
1.7μg/mL，例如1.4μg/mL、1.42μg/mL、1.45μg/mL、1.47μg/mL、1.5μg/mL、1.52μg/mL、1.55μg/mL、1.57μg/mL、1.6μg/mL、1.62μg/mL、1.65μg/mL、1.67μg/mL、1.7μg/mL等。
[0015]优选地，所述稀释液包括80％
‑
95％甲醇水溶液，例如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％等，所述80％
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95％为甲醇在溶液中的体积百分含量。
[0016]优选地，所述高效液相色谱分析中使用的色谱柱为八烷基键合硅胶色谱柱。
[0017]优选地，所述色谱柱的规格为4.6mm
×
250mm，5μm。
[0018]优选地，所述高效液相色谱分析中使用的流动相包括A相和B相，所述A相为30％的乙腈水溶液，所述B相为95％的乙腈水溶液。所述30％和95％是指乙腈在溶液中的体积百分含量。
[0019]优选地，所述高效液相色谱分析中采用梯度洗脱方式。
[0020]优选地，所述梯度洗脱的程序为：
[0021]在0min，A相的体积占比为100％，B相的体积占比为0％；后匀速变化至第30min，A相的体积占比为70
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80％，B相的体积占比为20
‑
30％；后匀速变化至第33min，A相的体积占比为5
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15％，B相的体积占比为85
‑
95％；在33
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37min内，恒定A相的体积占比为5
‑
15％，B相的体积占比为85
‑
95％；后匀速变化至第40min，A相的体积占比为100％，B相的体积占比为0％；最后在40
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45min内，恒定A相的体积占比为100％，B相的体积占比为0％。
[0022]上述70
‑
80％中的具体数值例如70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％等。
[0023]上述20
‑
30％中的具体数值例如20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％等。
[0024]上述5
‑
15％中的具体数值例如5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％等。
[0025]上述85
‑
95％中的具体数值例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％等。
[0026]优选地，所述高效液相色谱分析中的流速为1.4
‑
1.6mL/min，例如1.4mL/min、1.42mL/min、1.45mL/min、1.47mL/min、1.5mL/min、1.52mL/min、1.55mL/min、1.57mL/min、1.6mL/min等。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结合雌激素片中游离甾体杂质含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：对待测结合雌激素片溶液与甾体杂质标准对照液进行高效液相色谱分析，根据分析结果利用外标法计算得到所述结合雌激素片中游离甾体杂质含量；所述游离甾体杂质包括雌酮、马烯雌酮或17α
‑
二氢马烯雌酮中的任意一种或至少两种的组合。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测结合雌激素片溶液的制备方法包括：利用稀释液对待测结合雌激素片进行溶解，离心，收集上清液，即得；所述甾体杂质标准对照液的制备方法包括：利用稀释液对甾体杂质标准品进行溶解，稀释，即得；优选地，所述离心的转速为2000
‑
20000rpm。3.如权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述待测结合雌激素片溶液中结合雌激素的浓度为0.11
‑
0.13mg/mL，所述甾体杂质标准对照液中甾体杂质的浓度为1.4
‑
1.7μg/mL。4.如权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液包括80％
‑
95％甲醇水溶液。5.如权利要求1
‑
4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析中使用的色谱柱为八烷基键合硅胶色谱柱。6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为4.6mm
×
250mm，5μm。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡顾兵，郭晓烽，袁建成，朱智鹏，胡成松，
申请(专利权)人：南通联亚药业有限公司，
类型：发明
国别省市：