本申请实施例属于体外诊断技术领域，涉及一种定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，包括PTH检测卡、稀释液和芯片，检测卡用于检测血液样本，包括检测试纸和卡壳，其中，检测试纸包括PVC底板，PVC底板上依次固定样品垫、第一结合垫、第二结合垫、包被膜以及吸水垫，卡壳用于放置检测试纸，包被膜上相互间隔平行设有检测线和质控线，检测线中设有链霉亲和素，质控线上设有鸡IgY抗体，稀释液为磷酸盐缓冲液，用于与血液样本进行混匀后加到检测卡上，芯片用于预先配置曲线数据，使得检测卡根据曲线数据读取血液样本的检测结果。本申请还涉及一种定量检测全段甲状旁腺激素的试检测方法。本申请提供的技术方案能够提高分辨率和检测灵敏度，同时增大检测范围。增大检测范围。增大检测范围。
【技术实现步骤摘要】
一种定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒及检测方法
[0001]本申请涉及体外诊断
，更具体地，涉及一种定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒及检测方法。
技术介绍
[0002]甲状旁腺激素(Parathyroid hormone，PTH)在甲状旁腺内合成，并分泌到血液中，是由甲状旁腺主细胞分泌的单链多肽类激素。PTH的主要功能是升高血钙、降低血磷、以及维持骨代谢。PTH分泌失调，会造成高钙血症、低钙血症的发生。而高钙血症可导致心律不齐、呼吸肌运动无力，急性肾损伤和肾性糖尿病性尿崩症等。低钙血症引起痉挛，惊厥，骨骼发育不良，精神异常。PTH水平也可作为终末期肾脏疾病(ESRD)患者的骨组织学替代物，能为持续临床管理提供至关重要的指导，尤其是对带有维生素D固醇的继发性甲状旁腺机能亢进症的治疗。因此临床上测定甲状旁腺激素对高钙血症和低钙血症及其原因鉴别上具有一定的价值，同时对甲状旁腺疾病，慢性肾功能不全继发性甲状旁腺功能亢进症，和骨软化症的诊断及血液透析的监测都有重要意义。
[0003]目前，检测甲状旁腺激素主要的方法有化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay,CLIA)、胶体金免疫层析法以及酶联免疫吸附法等。
[0004]其中，化学发光免疫分析法检测灵敏度高，检测结果相对准确，但操作繁琐，需要在特定温度中进行，仪器设备构成复杂，对操作人员的能力要求较高。检测血液样本时，样本要求必须是血清或者血浆，不如直接检测全血方便。
[0005]胶体金免疫层析法虽然操作简单，收集样本便捷，但由于是通过胶体金颗粒的聚集显色，检测灵敏度不高，如果样本浓度过低，而显色不明显，容易出现假阴性结果，且胶体金免疫层析只能进行定性或半定量检测。
[0006]酶联免疫吸附法，该方法灵敏度相对胶体金免疫层析法高，但步骤繁琐，需要加样洗涤等重复步骤，测试时间长，且检测血液样本也需要是血清或者血浆，不能直接检测全血。
技术实现思路
[0007]本申请实施例所要解决的技术问题是相关技术中检测血液中甲状旁腺激素的检测方法检测灵敏度低、检测时间长以及检测结果不准确的技术问题。
[0008]为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：
[0009]PTH检测卡、稀释液和芯片；
[0010]所述检测卡用于检测血液样本，包括检测试纸和卡壳，其中，所述检测试纸包括PVC底板，所述PVC底板上依次固定样品垫、第一结合垫、第二结合垫、包被膜以及吸水垫；所述卡壳用于放置所述检测试纸；所述包被膜上相互间隔平行设有检测线和质控线，所述检测线中设有链霉亲和素，所述质控线上设有鸡IgY抗体；
[0011]所述稀释液为磷酸盐缓冲液，用于与所述血液样本进行混匀后加到所述检测卡上；
[0012]所述芯片预先配置有曲线数据，使得所述检测卡根据所述曲线数据读取血液样本的检测结果。
[0013]进一步的，所述样品垫采用如下方法制备：
[0014]将原始样片垫放入预配制的样品垫处理液进行浸润处理；
[0015]将浸润处理后的所述原始样品垫放置于晾架上进行干燥，获得所述样品垫。
[0016]进一步的，所述样品垫处理液采用如下方法配制：
[0017]按照预设配方将2％g/mL牛血清白蛋白和0.5％mL/mL表面活性剂溶解于0.2M所述稀释液中，得到所述样品垫处理液。
[0018]进一步的，所述第一结合垫采用如下方法制备：
[0019]使用荧光微球分别对第一人PTH抗体和羊抗鸡IgY进行标记，得到荧光微球
‑
第一抗PTH抗体复合物和荧光微球
‑
羊抗鸡IgY复合物；
[0020]将所述荧光微球
‑
第一人PTH抗体复合物和所述荧光微球
‑
羊抗鸡IgY复合物按照体积比1:1混合均匀，得到荧光微球抗体标记物；
[0021]将所述荧光微球抗体标记物，通过喷金划膜仪按照第一预设喷量喷到空白结合垫上，得到第一结合垫，并进行干燥。
[0022]进一步的，所述荧光微球的配方为固含量为1％的100μL荧光微球，所述第一人PTH抗体的重量为60μg，所述羊抗鸡IgY的重量为70μg。
[0023]进一步的，所述第一预设喷量为3.0μL/cm。
[0024]进一步的，所述第二结合垫采用如下方法制备：
[0025]分别配制生物素溶液和第二人PTH抗体溶液；
[0026]将所述生物素溶液和所述第二人PTH抗体溶液按照体积比1:10混合均匀，形成第二人PTH抗体
‑
生物素复合物；
[0027]将所述第二人PTH抗体
‑
生物素复合物，通过喷金划膜仪按照第二预设喷量喷到空白结合垫上，得到第二结合垫，并进行干燥。
[0028]进一步的，所述生物素溶液为10mg/mL N
‑
羟基磺酸基琥珀生物素的无水DMSO溶液，所述第二人PTH抗体溶液为3mg/mL第二人PTH抗体的硼酸盐缓冲溶液。
[0029]进一步的，所述第二预设喷量为2.0μL/cm。
[0030]进一步的，所述包被膜采用如下方法制备：
[0031]按照预设体积裁剪硝酸纤维素膜；
[0032]配制链霉亲和素工作包被液作为检测线包被工作液，配制鸡IgY抗体工作包被液作为质控线包被工作液；
[0033]通过喷金划膜仪将检测线包被工作液和质控线包被工作液分别喷到裁剪后的所述硝酸纤维素膜上，形成检测线和质控线；
[0034]将划膜后的硝酸纤维素膜进行干燥，得到所述包被膜。
[0035]进一步的，所述检测线和所述质控线的距离为5
±
0.5mm；所述质控线与所述硝酸纤维素膜下缘的距离为10
±
0.5mm，所述检测线与所述硝酸纤维素膜上缘的距离为10
±
0.5mm。
[0036]进一步的，所述吸水垫采用如下方法制备：
[0037]准备H
‑
1吸水纸，将所述吸水纸的大小裁剪成(23
±
1)mm
×
(300
±
10)mm，获得所述吸水垫。
[0038]进一步的，所述芯片采用如下方法配置曲线数据：
[0039]取不同浓度的PTH校准品，分别加入至所述稀释液中，得到检测样品；
[0040]对所述检测样品进行检测，根据检测信号和对应的检测浓度生成所述检测样品的曲线数据；
[0041]根据所述曲线数据生成对应的ID文件；
[0042]根据所述ID文件通过编程器制备出芯片。
[0043]为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种定量检测全段甲状旁腺激素的检测方法，使用如上所述的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：
[0044]将所述芯片放置于荧光免疫分析仪中，读取本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，包括：PTH检测卡、稀释液和芯片；所述检测卡用于检测血液样本，包括检测试纸和卡壳，其中，所述检测试纸包括PVC底板，所述PVC底板上依次固定样品垫、第一结合垫、第二结合垫、包被膜以及吸水垫；所述卡壳用于放置所述检测试纸；所述包被膜上相互间隔平行设有检测线和质控线，所述检测线中设有链霉亲和素，所述质控线上设有鸡IgY抗体；所述稀释液为磷酸盐缓冲液，用于与所述血液样本进行混匀后加到所述检测卡上；所述芯片预先配置有曲线数据，使得所述检测卡根据所述曲线数据读取血液样本的检测结果。2.根据权利要求1所述的定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用如下方法制备：将原始样片垫放入预配制的样品垫处理液进行浸润处理；将浸润处理后的所述原始样品垫放置于晾架上进行干燥，获得所述样品垫。3.根据权利要求2所述的定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，所述样品垫处理液采用如下方法配制：按照预设配方将2％g/mL牛血清白蛋白和0.5％mL/mL表面活性剂溶解于0.2M所述稀释液中，得到所述样品垫处理液。4.根据权利要求1所述的定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，所述第一结合垫采用如下方法制备：使用荧光微球分别对第一人PTH抗体和羊抗鸡IgY进行标记，得到荧光微球
‑
第一抗PTH抗体复合物和荧光微球
‑
羊抗鸡IgY复合物；将所述荧光微球
‑
第一人PTH抗体复合物和所述荧光微球
‑
羊抗鸡IgY复合物按照体积比1:1混合均匀，得到荧光微球抗体标记物；将所述荧光微球抗体标记物，通过喷金划膜仪按照第一预设喷量喷到空白结合垫上，得到第一结合垫，并进行干燥。5.根据权利要求4所述的定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球的配方为固含量为1％的100μL荧光微球，所述第一人PTH抗体的重量为60μg，所述羊抗鸡IgY的重量为70μg。6.根据权利要求5所述的定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，所述第一预设喷量为3.0μL/cm。7.根据权利要求1所述的定量检测全段甲状旁腺激素的试剂盒，其特征在于，所述第二结合垫采用如下方法制备：分别配制生物素溶液和第二人PTH抗体溶液；将所述生物素溶液和所述第二人PTH抗体溶液按照体积比1:10混合均匀，形成第二人PTH抗体
‑
生物素复合物；将所述第二人PTH抗体
‑
生物素复...
【专利技术属性】
技术研发人员：石磊，邓成刚，黎文娟，陈魏穗，谢丽娟，
申请(专利权)人：广州达泰生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。