一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶质控品的制备方法技术

本发明专利技术属于生物制品技术领域，公开了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶质控品的制备方法，具体公开了一种GPDA质控品稳定剂，包括以下成分：物质A、EDTA、BSA、保护剂和防腐剂，所述物质A为双甘肽、N，N

【技术实现步骤摘要】
一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶质控品的制备方法


[0001]本专利技术属于生物制品
，具体涉及一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶质控品的制备方法。

技术介绍

[0002]甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(Glycyl proline dipeptidyl aminopeptidas，GPDA)是一种肽键水解酶，该酶能水解肽链N
‑
末端的甘氨酰脯氨酸残基，在人体血清、唾液腺、颌下腺及各种结缔组织中均有发现。在肝胆疾病中，原发性肝癌病人血清GPAD平均活性多在对照参考值的2倍以上，继发性肝癌病人血清GPDA活性均值在对照参考值3倍以上，急性肝炎时不管有无黄疸，血清GPDA仅轻度升高，且恢复正常的时间快。慢性肝炎或肝硬变时异常率低于急性肝炎患者。酒精性肝炎时的酶活性和异常率高于肝硬变者。药物性肝损害或原发性肝汁性肝硬变引起肝内胆汁郁积的病人，其血清GPDA明显升高，阳性率也显著高于其它肝病。临床上检测人血清GPDA活性可用于肝胆疾病的辅助诊断。
[0003]GPDA在临床上属于生化检测项目，现临床上主要采用市售的检测试剂盒用适用的生化分析仪检测GPDA的活性。GPDA质控品在试剂出厂检验，检验室内、室间质量控制，日常仪器状态、试剂质量监测等过程都是必不可以的。根据GPDA的发现相关报道，其他哺乳动物的组织中也含有丰富的GPDA，如各种动物的血清、鼠肝、鼠肾、猪肾等，其中，人源性样本公认为是最佳的质控品来源，但在实际应用中血清样本不易大量获取，有生物安全性风险，且不易长期保存；Hopsu
‑
Havu等(1968)通过自消化增溶、硫酸铵沉淀、DEAE纤维素层析等过程从猪肾组织匀浆中获得纯度较高的GPDA，并对其自身的特性进行分析，但所得到GPDA活性较低，且其制备过程复杂，不适合用以批量生产制备质控品；现有利用基因工程菌制备GPDA质控品，工艺要求高，常规生化实验室不易实现。目前市售的GPDA质控品大多制备成冻干粉，使用前需进行复溶，且复溶后的GPDA质控品的稳定性较差，不利于重复使用。

技术实现思路

[0004]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种GPDA质控品稳定剂。
[0005]本专利技术第二方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的GPDA质控品稳定剂在制备化学试剂中的应用。
[0006]本专利技术的第三方面的目的，在于提供在于提供一种GPDA质控品的制备方法。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供一种GPDA质控品稳定剂，包括以下成分：物质A、EDTA、BSA、保护剂和防腐剂。
[0009]优选地，所述物质A为双甘肽、N，N
‑
二羟乙基甘氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸和N
‑
三(羟甲基)甲基
‑3‑
氨基丙磺酸中的一种或几种。
[0010]优选地，所述GPDA质控品稳定剂包括10～50g/L物质A，1～5g/L EDTA，10～100g/L BSA，10～150g/L保护剂和0.1～10g/L防腐剂。
[0011]进一步优选地，所述GPDA质控品稳定剂包括10～25g/L物质A、1～2.5g/L EDTA、10～25g/L BSA，10～25g/L保护剂和0.2～0.9g/L防腐剂。
[0012]更进一步优选地，所述GPDA质控品稳定剂包括13～20g/L物质A、1～2g/L EDTA、10～20g/L BSA，10～20g/L保护剂和0.2～0.5g/L防腐剂。
[0013]优选地，所述保护剂为乙二醇、甘油、甘露醇、蔗糖和海藻糖中的一种或几种。
[0014]优选地，所述防腐剂为叠氮化钠、甲基异噻唑啉酮、咪唑啉基脲和2
‑
氯乙酰胺中的一种或几种。
[0015]本专利技术的第二个方面，提供本专利技术第一方面的GPDA质控品稳定剂在制备化学试剂中的应用。
[0016]优选地，所述化学试剂为通用试剂、分析试剂、仪器分析试剂、体外诊断试剂、生化试剂和无机离子显色试剂中的一种或多种。
[0017]进一步优选地，所述化学试剂为标准品、质控品和/或参考品。
[0018]更进一步优选地，所述化学试剂为GPDA质控品。
[0019]本专利技术的第三个方面，提供一种GPDA质控品的制备方法，包括以下步骤：
[0020]S1.肾脏组织与提取液混合研磨，抽提；
[0021]S2.提纯；
[0022]S3.加入本专利技术第一方面的GPDA质控品稳定剂，即得到GPDA质控品。
[0023]优选地，所述肾脏组织来源于哺乳动物肾脏组织。
[0024]进一步优选地，所述肾脏组织来源于猪肾脏组织。
[0025]优选地，对所述猪肾脏组织进行清洗。
[0026]进一步优选地，所述清洗包括如下步骤：去除猪肾脏组织上的脂肪和结缔组织，用预冷的生理盐水清洗。
[0027]优选地，所述提取液包括物质A、EDTA和防腐剂。
[0028]优选地，所述提取液包括10～22g/L物质A、0.5～2.5g/L EDTA和0.1～0.7g/L防腐剂。
[0029]进一步优选地，所述提取液包括10～20g/L物质A、1～2.5g/L EDTA和0.2～0.7g/L防腐剂。
[0030]更进一步优选地，所述提取物液包括13～20g/L物质A、1～2g/L EDTA和0.2～0.5g/L防腐剂。
[0031]优选地，所述物质A为双甘肽、N，N
‑
二羟乙基甘氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸和N
‑
三(羟甲基)甲基
‑3‑
氨基丙磺酸中的一种或几种。
[0032]优选地，所述防腐剂为叠氮化钠、甲基异噻唑啉酮、咪唑啉基脲和2
‑
氯乙酰胺中的一种或几种。
[0033]优选地，所述肾脏组织与提取液的质量体积比为1:(2～5)。
[0034]进一步优选地，所述肾脏组织与提取液的质量体积比为1:(2～4)。
[0035]更进一步优选地，所述肾脏组织与提取液的质量体积比为1:(2～3)。
[0036]优选地，所述提取液与肾脏组织混合前对所述提取液进行预冷处理。
[0037]优选地，所述研磨的条件为：8000～15000r/min，10～20s/次，每次间隔20～30s，连续研磨3～6次。
[0038]进一步优选地，所述研磨的条件为：9000～12000r/min，10～15s/次，每次间隔20～25s，连续研磨4～5次。
[0039]优选地，所述抽提时间为1～3h。
[0040]进一步优选地，所述抽提时间为1～2h。
[0041]优选地，所述抽提在冰浴条件下进行。
[0042]优选地，所述提纯包括粗滤，去油脂，离心和微滤。
[0043]进一步优选地，所述粗滤为多层纱布过滤。
[0044]进一步优选地，所述去油脂包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定剂，包括以下成分：物质A、EDTA、BSA、保护剂和防腐剂，所述物质A为双甘肽、N，N
‑
二羟乙基甘氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸和N
‑
三(羟甲基)甲基
‑3‑
氨基丙磺酸中的一种或几种。2.根据权利要求1所述的稳定剂，其特征在于，所述稳定剂包括10～50g/L物质A，1～5g/L EDTA，10～100g/L BSA，10～150g/L保护剂和0.1～10g/L防腐剂。3.根据权利要求2所述的稳定剂，其特征在于，所述保护剂为乙二醇、甘油、甘露醇、蔗糖和海藻糖中的一种或几种；所述防腐剂优选为叠氮化钠、甲基异噻唑啉酮、咪唑啉基脲和2
‑
氯乙酰胺中的一种或几种。4.权利要求1～3中任一项所述的稳定剂在制备化学试剂中的应用；所述化学试剂优选为通用试剂、分析试剂、仪器分析试剂、体外诊断试剂、生化试剂和无机离子显色试剂中的一种或多种。5.一种GPDA质控品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：S1.肾...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢丽娟，石磊，邓成刚，李淑惠，黎文娟，
申请(专利权)人：广州达泰生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：