定量检测cTnT/NT-proBNP/D-dimer的试剂盒及其应用制造技术

本申请实施例属于荧光免疫层析技术领域，涉及一种定量检测cTnT/NT

【技术实现步骤摘要】
定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒及其应用


[0001]本申请涉及荧光免疫层析
，尤其涉及定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]胸痛是常见而又能危及生命的一种病症，造成胸痛的原因复杂多样，包括急性冠状动脉综合征(Acute Coronary Syndrome，ACS)、急性主动脉夹层(Acute Aortic Dissection,AAD)和急性肺栓塞(Acute Pulmonary Embolism,APE)等，其中ACS在这些严重危及生命的疾病中所占比例最高。近年来其发病率逐年增高，患者死亡风险也越来越高，如何快速、准确诊断和鉴别ACS及其他致死性胸痛的病因，成为急诊处理的难点和重点。所有因胸痛就诊的患者均需进行心电图检查，心电图是诊断缺血性胸痛的重要手段，首份心电图应在接诊患者10分钟内完成。但是，胸痛早期仅仅进行心电图检查还不足以对疾病的进一步确诊治疗提供更充分有力的证据，因为有胸痛等症状最后确诊为AMI(急性心肌梗死)的病例中约有50％的病例发病初期心电图没有典型的AMI表现，因此提高胸痛疾病的早期快速诊断率具有重大意义。
[0003]cTnT：cTn(心肌肌钙蛋白)存在于心肌细胞中，由cTnI(心肌肌钙蛋白I)、cTnT(心肌肌钙蛋白T)和cTnC(心肌肌钙蛋白C)三种亚单位组成。cTnT是心肌细胞特有的抗原，心肌细胞损伤后，血中出现cTnT时间最早、持续时间长，cTnT对心肌损伤具有很高的敏感度和特异性。研究发现，心肌肌钙蛋白T(cTnT)能够敏感的提示心肌损伤状态，具有高度的心肌特异性，可作为心肌损伤标志物，对于心肌损伤的高度敏感性及较长的窗口期可成为判定心肌损伤，特别是诊断急性心梗的“金标准”，可更快速“诊断”和“排除”AMI(急性心肌梗死)。(按照冠脉病变严重程度ACS又分为AMI和UAP(不稳定型心绞痛)。
[0004]NT
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proBNP：NP(利钠肽)家族是脊椎动物体内用于调节循环系统容量和渗透压的一大类物质。BNP(脑利钠肽)作为利钠肽家族的主要成员，主要由心肌细胞分泌。心肌细胞受到刺激后首先分泌pre
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proBNP，随后形成proBNP，proBNP在内切酶作用下裂解为有利钠、利尿、扩血管等生物活性的BNP(B型利钠肽，含32个氨基酸)和无生物活性的NT
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proBNP(N末端B型利钠肽原，含76个氨基酸)，BNP和NT
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proBNP两者血液水平具有一定相关性。在2015年国家标准《冠状动脉疾病和心力衰竭时心脏标志物检测与临床应用》中，两者均作为重要心脏标志物用于ACS的危险分层以及心力衰竭的早期发现、诊断和预后评估等中，并发挥了重要作用。并且两者中NT
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proBNP比BNP作为心脏标志物更具优点，具体表现在：1.体内半衰期更长(90～120min&gt；18～20min)；2.对早期和轻度心衰诊断率更高；3.浓度变化水平更能准确反映治疗效果；4.体外稳定性更好(72h&gt；4h)；5.检测试剂均采用同一来源抗体，其诊断结果的相关性更优。因此，对NT
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proBNP进行检测对心脏疾病的诊断具有重要意义。研究发现其浓度升高和心衰(急性心衰AHF、慢性心衰CHF)的严重程度具有高度一致性，NT
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proBNP可作为一个将发生HF的较强预示因子，患者疑似心衰(HF)时，可以首选进行N末端心房利钠肽(NT
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proBNP)检测，能有效地鉴别慢性阻塞性呼吸困难和心源性呼吸困难。
[0005]D
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dimer：D
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dimer是纤维蛋白降解产物(FDPs)的一种，专指纤维蛋白被分解后的片段，其结构保留有纤维蛋白单体中的γ链交错分子结构。D
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dimer的结构组成有三种形式：一种是两个180kDa的D结构域分子组成，一种是两个195kDa的D结构域分子组成，再一种是两个340kDa的D结构域分子和一个纤维蛋白原E结构域分子组成。此交错分子结构在纤维蛋白中才有，而在纤维蛋白原中没有。因此，D
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dimer可说是唯一由纤维蛋白分解后的产物。血液中D
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dimer升高暗示了两种含义：一是血中发生了纤维蛋白凝集；二是体内抗凝血机制已启动，已有纤维蛋白被切割分解。因此，D
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dimer升高或者阳性是体内存在凝血及纤溶活性增强的重要分子标志物。对D
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dimer进行检测，不仅对血栓栓塞性疾病、弥散性血管内凝血的早期诊断很有帮助；而且在心脑血管疾病(如心肌梗塞、心绞痛、高血压、冠心病、脑梗塞、脑出血等)等许多疾病的发生和发展过程中也具有重要意义：心脑血管疾病都有可能引起D
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dimer升高，结合临床表现和其他检查，选择恰当时机动态监测D
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dimer的变化，可为临床预防血栓形成，病情转归评估等提供有价值的信息，特别在胸痛早期对D
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dimer进行检测，对心脑血管疾病的预防、诊治、病情转归评估等方面具有重大意义。
[0006]目前，对于cTnT、NT
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proBNP和D
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dimer的检测方法有酶联免疫法、荧光免疫检测法、化学发光法、免疫比浊法以及胶体金免疫层析法等，但其检测产品和方法主要局限于对其中一项或者两项进行检测，对这三项进行同时检测的方法极少，从而不利于更加快速、全面、特异地对各种心脏疾病特别是ACS的发生、发展以及全程进行预警和诊治。因此，结合临床反馈和过去技术的缺陷本申请提供一种更简便、快速能够对cTnT、NT
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proBNP和D
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dimer胸痛三联同时进行检测的快速检测试剂盒。可实现及时快速对急性胸痛患者cTnT、NT
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proBNP、D
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dimer的联合检测，为胸痛患者为心源性还是非心源性胸痛提供鉴别依据，从而有效做到及时有针对性治疗，提高患者生存率。
[0007]1、对于cTnI、NT
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proBNP和D
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dimer的检测方法有酶联免疫法、荧光免疫检测法、化学发光法、免疫比浊法以及胶体金免疫层析法等，但其检测产品和方法主要局限于对其中一项或者两项进行检测，对这三项进行同时检测的方法极少。
[0008]2、大部分心肌损伤都采用肌钙蛋白I/T(cardiac troponin I/cardiac troponin T，cTnT/T)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase
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MB，CK
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MB)、肌红蛋白(myoglobin，MYO)，这三项联合检测，虽然很重要，但从诊本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测卡，所述检测卡包括卡壳和试纸卡，所述试纸卡包括PVC底板，所述PVC底板上设置有依次搭接的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸；其中，所述结合垫上吸附有稀土Eu3+荧光微球标记的抗心肌肌钙蛋白T抗体、稀土Eu3+荧光微球标记的抗N末端心房利钠肽抗体、稀土Eu3+荧光微球标记的抗D
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二聚体抗体以及稀土Eu3+荧光微球标记的羊抗鸡IgY抗体；所述硝酸纤维素膜上依次设有第一检测线、第二检测线、第三检测线和质控线，其中，所述第一检测线处包被有D
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dimer单克隆抗体，所述第二检测线处包被有cTnT单克隆抗体，所述第三检测线处包被有NT
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proBNP单克隆抗体以及所述质控线处包被有鸡IgY抗体。2.根据权利要求1所述的定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒，其特征在于，所述样品垫采用如下步骤制得：将玻璃纤维膜浸泡于处理液中进行浸润处理；将浸润处理后的所述玻璃纤维膜进行烘干处理，获得所述样品垫。3.根据权利要求2所述的定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒，其特征在于，所述处理液包括1.0％的Triton X
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100，2.5％的牛血清蛋白以及0.15M的Tris缓冲液。4.根据权利要求1所述的定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒，其特征在于，所述结合垫采用如下步骤制得：通过稀土Eu3+荧光微球分别标记抗心肌肌钙蛋白T抗体、抗N末端心房利钠肽抗体、抗D
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二聚体抗体以及羊抗鸡IgY抗体，分别获得抗心肌肌钙蛋白T抗体
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荧光微球偶联复合物、抗N末端心房利钠肽抗体
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荧光微球偶联复合物、抗D
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二聚体抗体
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荧光微球偶联复合物以及羊抗鸡IgY抗体
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荧光微球偶联复合物；将所述抗心肌肌钙蛋白T抗体
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荧光微球偶联复合物、所述抗N末端心房利钠肽抗体
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荧光微球偶联复合物、所述抗D
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二聚体抗体
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荧光微球偶联复合物以及所述羊抗鸡IgY抗体
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荧光微球偶联复合物均匀混合，获得荧光标记混合液；通过非接触式微定量喷头将所述荧光标记混合液喷到目标玻璃纤维膜上，获得所述结合垫。5.根据权利要求4所述的定量检测cTnT/NT
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proBNP/D
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dimer的试剂盒，其特征在于，所述标记抗心肌肌钙蛋白T抗体、抗N末端心房利钠肽抗体、抗D
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二聚体抗体以及羊抗鸡IgY抗体的稀土Eu3+荧光微球为醛基化后的稀土Eu3+荧光微球，其中，所述稀土Eu3+荧光微球的醛基化方法包括：使用20mM，pH9.5的碳酸盐缓冲液，并采用离心法对稀土荧光纳米微球进行洗涤，获得洗涤后的稀土荧光纳米微球；将洗涤后的稀土荧光纳米...

【专利技术属性】
技术研发人员：石磊，黎文娟，邓成刚，谢丽娟，陈魏穗，
申请(专利权)人：广州达泰生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：