一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法技术

本发明专利技术提供一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，包括：在人血浆样本中加入醋酸铵溶液沉淀血浆样本中的蛋白，再加入含有内标溶液的乙腈进行萃取，获得的样品溶液采用高效液相色谱质谱联用法进行测定，根据保留时间确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。本发明专利技术提供的一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，具有简便快速、分析通量高、灵敏度高、特异性强、精密度和准确度好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点，可用于临床上常用的抗肿瘤药物酪氨酸激酶抑制剂的血药浓度监测。氨酸激酶抑制剂的血药浓度监测。

【技术实现步骤摘要】
chromatography.B,Analytical technologies in the biomedical and life sciences,2019 Apr 15；1113:37
‑
44.)；Rafael Reis等人建立了定量方法用于检测血浆中阿法替尼、厄洛替尼、奥希替尼及克唑替尼等的浓度，前处理方法为蛋白沉淀(参见:Reis R,Labat L,Allard M,Boudou
‑
Rouquette P,Chapron J,Bellesoeur A,Thomas
‑
Schoemann A,Arrondeau J,Giraud F,Alexandre J,Vidal M,Goldwasser F,Blanchet B.Liquid chromatography
‑
tandem mass spectrometric assay for therapeutic drug monitoring of the EGFR inhibitors afatinib,erlotinib and osimertinib,the ALK inhibitor crizotinib and the VEGFR inhibitor nintedanib in human plasma from non
‑
small cell lung cancer patients.J Pharm Biomed Anal.2018 Sep 5；158:174
‑
183.)。这些检测标准不统一，方法不一致，而临床实际中不同的病人可能同时服用不同的靶向药物，可能需要不同的方法甚至不同的的仪器进行检测。不仅增加了工作量浪费了实验资源，增加了患者及医生等待血药浓度结果的时间。

技术实现思路

[0005]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，结合药物特征性二级碎片例子分析，同时对人血浆中吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、达可替尼、埃克替尼、奥希替尼、克唑替尼、阿来替尼、色瑞替尼、曲美替尼、达拉菲尼、安罗替尼的浓度进行分析，该方法检测时间短、灵敏度高、定量准确。
[0006]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，包括：在人血浆样本中加入醋酸铵溶液沉淀血浆样本中的蛋白，再加入含有内标溶液的乙腈进行萃取，获得的样品溶液采用高效液相色谱质谱联用(HPLC
‑
MS/MS)法进行测定，根据保留时间确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。
[0007]优选地，所述12种酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼(CAS号为184475
‑
35
‑
2)、厄洛替尼(CAS号为183321
‑
74
‑
6)、阿法替尼(CAS号为850140
‑
72
‑
6)、达可替尼(CAS号为1110813
‑
31
‑
4)、埃克替尼(CAS号为610798
‑
31
‑
7)、奥希替尼(CAS号为1421373
‑
65
‑
0)、克唑替尼(CAS号为877399
‑
52
‑
5)、阿来替尼(CAS号为1256580
‑
46
‑
7)、色瑞替尼(CAS号为1032900
‑
25
‑
6)、曲美替尼(CAS号为871700
‑
17
‑
3)、达拉菲尼(CAS号为1195765
‑
45
‑
7)、安罗替尼(CAS号为1058156
‑
90
‑
3)。
[0008]优选地，所述人血浆样本中加入醋酸铵溶液后要漩涡振荡15
‑
45s，优选为30s。
[0009]优选地，所述醋酸铵溶液为浓度1
‑
10mol/L的醋酸铵的水溶液。更优选地，所述醋酸铵溶液为浓度5mol/L的醋酸铵的水溶液。
[0010]优选地，所述醋酸铵溶液与人血浆样本加入的体积之比为0.9
‑
1.1:1，优选为1:1。
[0011]优选地，所述内标溶液为伏立康唑的甲醇溶液。所述伏立康唑的CAS号为137234
‑
62
‑
9。所述伏立康唑对12种酪氨酸激酶抑制剂无干扰。
[0012]更优选地，所述内标溶液的浓度为1mg/mL。
[0013]优选地，所述含有内标溶液的乙腈中内标的浓度为10
‑
15ng/mL，优选为12ng/mL。
[0014]优选地，所述乙腈与人血浆样本加入的体积之比为1.9
‑
2.1:1，优选为2:1。
[0015]优选地，所述萃取是先漩涡振荡后离心，取上清液。
[0016]更优选地，所述漩涡振荡的时间为2
‑
4min，优选为3min。
[0017]更优选地，所述离心的时间为9
‑
11分钟，所述离心的温度为3
‑
5℃，所述离心的转速为10000
‑
15000g/min。
[0018]进一步优选地，所述离心的时间为10分钟，所述离心的温度为4℃，所述离心的转速为12000g/min。
[0019]更优选地，所述上清液的取液量为90
‑
110μL，优选为100μL。
[0020]优选地，所述样品溶液采用高效液相色谱质谱联用法进行测定，包括以下步骤：
[0021]1)配制标准溶液：在空白血浆样本中加入醋酸铵溶液沉淀血浆样本中的蛋白，加入药物溶液和含有内标溶液的乙腈进行萃取，获得标准溶液；
[0022]2)样品检测：采用高效液相色谱质谱联用法分别检测样品溶液和步骤1)中的标准溶液，将获得的样品溶液的液相色谱图，与标准溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间指认出共有特征峰定性，再根据共有特征峰的色谱峰面积通过内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。
[0023]更优选地，步骤1)中，所述药物溶液为12种酪氨酸激酶抑制剂标准品的储备液，采用的溶剂为体积比3
‑
5:1的甲醇与二甲基亚砜。
[0024]进一步优选地，所述溶剂为体积比4:1的甲醇与二甲基亚砜。
[0025]更优选地，步骤1)中，所述药物溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂的浓度均为1mg/mL。
[0026]更优选地，步骤1)中，所述内标溶液为伏立康唑的甲醇溶液。
[0027]更优选地，步骤1)中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，包括：在人血浆样本中加入醋酸铵溶液沉淀血浆样本中的蛋白，再加入含有内标溶液的乙腈进行萃取，获得的样品溶液采用高效液相色谱质谱联用法进行测定，根据保留时间确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。2.根据权利要求1所述的一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于，所述12种酪氨酸激酶抑制剂包括吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、达可替尼、埃克替尼、奥希替尼、克唑替尼、阿来替尼、色瑞替尼、曲美替尼、达拉菲尼、安罗替尼。3.根据权利要求1所述的一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于，所述醋酸铵溶液沉淀血浆样本中的蛋白，包括以下条件中的任一项或多项：A1)所述人血浆样本中加入醋酸铵溶液后要漩涡振荡15
‑
45s；A2)所述醋酸铵溶液为浓度1
‑
10mol/L的醋酸铵的水溶液；A3)所述醋酸铵溶液与人血浆样本加入的体积之比为0.9
‑
1.1:1。4.根据权利要求1所述的一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于，所述加入含有内标溶液的乙腈进行萃取，包括以下条件中的任一项或多项：B1)所述内标溶液为伏立康唑的甲醇溶液；B2)所述含有内标溶液的乙腈中内标的浓度为10
‑
15ng/mL；B3)所述乙腈与人血浆样本加入的体积之比为1.9
‑
2.1:1；B4)所述萃取是先漩涡振荡后离心，取上清液；所述漩涡振荡的时间为2
‑
4min；所述离心的时间为9
‑
11分钟，所述离心的温度为3
‑
5℃，所述离心的转速为10000
‑
15000g/min。5.根据权利要求1所述的一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于，所述样品溶液采用高效液相色谱质谱联用法进行测定，包括以下步骤：1)配制标准溶液：在空白血浆样本中加入醋酸铵溶液沉淀血浆样本中的蛋白，加入药物溶液和含有内标溶液的乙腈进行萃取，获得标准溶液；2)样品检测：采用高效液相色谱质谱联用法分别检测样品溶液和步骤1)中的标准溶液，将获得的样品溶液的液相色谱图，与标准溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间指认出共有特征峰定性，再根据共有特征峰的色谱峰面积通过内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中12种酪氨酸激酶抑制剂的浓度。6.根据权利要求5所述的一种同时测定人血浆中十二种酪氨酸激酶抑制剂浓度的方法，其特征在于，步骤1)中，包括以下条件中的任一项或多项：C1)所述药物溶液为12种酪氨酸激酶抑制剂标准品的储备液，采用的溶剂为体积比3
‑
5:1的甲醇与二甲基亚砜；C2)所述内标溶液为伏立康唑的甲醇溶液；C3)所述空白血浆样本加入醋酸铵溶液后要漩涡振荡15
‑
45s；C4)所述醋酸铵溶液为浓度1
‑
10mol/L的醋酸铵的水溶液；C5)所述醋酸铵溶液与空白血浆样本加入的体积之比为0.9

【专利技术属性】
技术研发人员：范国荣，
申请(专利权)人：范国荣，
类型：发明
国别省市：