一种同时测定氨基己酸注射液中二聚体、三聚体和己内酰胺的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定氨基己酸注射液中二聚体、三聚体和己内酰胺的方法。本发明专利技术方法包括如下步骤：采用HPLC对氨基己酸注射液中的氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺进行定性检测或定量检测；HPLC条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：212nm；柱温：25℃

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定氨基己酸注射液中二聚体、三聚体和己内酰胺的方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，尤其涉及一种利用HPLC法测定氨基己酸注射液中二聚体、三聚体和己内酰胺的药物分析方法。

技术介绍

[0002]氨基己酸，化学名称：6
‑
氨基己酸
[0003]分子式：C6H
13
NO2[0004]分子量：131.17
[0005]其结构式如下：
[0006][0007]氨基己酸是抗纤维蛋白溶解药。纤维蛋白原通过其分子结构中的赖氨酸结合部位特异性地与纤维蛋白结合，然后在激活物作用下变为纤溶酶，该酶能裂解纤维蛋白中精氨酸和赖氨酸肽链，形成纤维蛋白降解产物，使血凝块溶解。本品能定性阻抑纤溶酶原与纤维蛋白结合，防止其激活，从而抑制纤维蛋白溶解，高浓度(100mg/L)则直接抑制纤溶酶活力，达到止血效果。临床上常用于预防及治疗血纤维蛋白溶解亢进引起的各种出血。
[0008]氨基己酸自身结构中含有羧基和氨基，在药物制备及贮存过程中如遇高温，氨基己酸分子间的羧基和氨基会发生缩合反应，生成氨基己酸二聚体和氨基己酸三聚体杂质。同杂质产生机理如下：
[0009]氨基己酸二聚体：
[0010][0011]氨基己酸三聚体：
[0012][0013]己内酰胺：
[0014]氨基己酸原料由己内酰胺为起始物料合成而来，因此起始物料的残留也是氨基己酸注射液的杂质之一，该杂质在产品贮存过程中，也可能重新成环生成。
[0015][0016]根据ICHQ3B规定，氨基己酸每日最大剂量大于2g，上述三个杂质的鉴定限度均为0.10％。因此，亟需开发一种合理的色谱系统，制定出简单、灵敏度高的杂质检测方法，以便严格控制氨基己酸注射液的质量。

技术实现思路

[0017]本专利技术的目的是提供一种同时测定氨基己酸注射液中二聚体、三聚体和己内酰胺的方法，该方法利用HPLC法进行测定，操作简单，灵敏度高。
[0018]具体而言，所述二聚体为氨基己酸二聚体，简写为AJJ
‑
IM
‑
A，其结构式如式Ⅰ所示，分子式为C
12
H
24
N2O3，分子量为244.33；
[0019][0020]所述二聚体为氨基己酸二聚体，简写为AJJ
‑
IM
‑
B，其结构式如式Ⅱ所示，分子式为C
18
H
35
N3O4，分子量为357.49；
[0021][0022]所述己内酰胺，结构式如式Ⅲ所示，分子式为C6H
11
NO，分子量为113.16；
[0023][0024]本专利技术提供的同时测定氨基己酸注射液中氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺的方法，包括如下步骤：
[0025]采用HPLC对氨基己酸注射液中的氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺进行定性检测或定量检测；
[0026]所述HPLC的检测条件如下：
[0027]色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
[0028]检测波长：212nm；
[0029]柱温：25℃
±
5℃；
[0030]流速：1.0ml/min
±
0.2ml/min；
[0031]进样体积：20μl；
[0032]流动相A：由体积比为90:10的0.08mol/L乙酸铵溶液和质量浓度为1％乙酸溶液组
成；
[0033]流动相B：由体积比为90:10的乙腈和质量浓度为1％乙酸溶液组成；
[0034]洗脱程序如下：0～10min，流动相A的体积分数为93％；10～25min，流动相的体积分数由93％下降至85％；25～26min，流动相的体积分数由85％上升至93％；26～35min，流动相A的体积分数保持为93％。
[0035]上述的测定方法中，所述色谱柱的规格可为150mm
×
4.6mm，3～5μm(如3μm或5μm)；所述色谱柱具体可为下述1)
‑
3)中的任一种：
[0036]1)Welch Ultimate LP
‑
C18，规格为150mm
×
4.6mm，5μm；
[0037]2)YMC Hydrosphere C18，规格为150mm
×
4.6mm，3μm；
[0038]3)Ultimate LP
‑
C18，规格为150mm
×
4.6mm，5μm。
[0039]上述的测定方法中，所述定性检测的步骤如下：
[0040](1)分别以氨基己酸二聚体的标准物质、氨基己酸三聚体的标准物质和己内酰胺的标准物质为对照品，以水为溶剂，配制含氨基己酸二聚体对照品、氨基己酸三聚体对照品和己内酰胺对照品的溶液；将所述对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0041](2)以待测的氨基己酸注射液为供试品，以水为溶剂，配制供试品溶液；将所述供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0042](3)若步骤(2)中供试品的色谱图中出现与步骤(1)中所述氨基己酸二聚体对照品、氨基己酸三聚体对照品和己内酰胺对照品的保留时间一致的色谱峰出现，则待测样品中含有氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺。
[0043]定性检测步骤中，步骤(1)中所述氨基己酸二聚体对照品在所述对照品溶液中的浓度0.00015～0.01mg/mL；
[0044]步骤(1)中所述氨基己酸三聚体对照品在所述对照品溶液中的浓度为0.0001～0.01mg/mL；
[0045]步骤(1)中所述己内酰胺对照品在所述对照品溶液中的浓度为0.00005～0.01mg/mL。
[0046]定性检测步骤中，步骤(2)中所述供试品溶液中氨基己酸的浓度为0.5～10mg/mL。
[0047]上述的测定方法中，所述定量检测的步骤如下：
[0048](1)分别以氨基己酸二聚体的标准物质、氨基己酸三聚体的标准物质和己内酰胺的标准物质为对照品，以水为溶剂，配制含氨基己酸二聚体对照品、氨基己酸三聚体对照品和己内酰胺对照品的溶液；所述配制步骤中，每种标准物质分别配制两份对照品溶液；对照品溶液的浓度记为C
对照1
和C
对照2
；将所述两份对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，所述两份对照品溶液的峰面积记为A
对照1
和A
对照2
；
[0049](2)以待测的氨基己酸注射液为供试品，以水为溶剂，配制供试品溶液；将所述供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，所述供试品溶液的峰面积记为A
样品
；
[0050](3)按照如下公式(1)和公式(2)计算待测样品中氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺的含量；
[0051][本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时测定氨基己酸注射液中氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺的方法，包括如下步骤：采用HPLC对氨基己酸注射液中的氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺进行定性检测或定量检测；所述HPLC的检测条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：212nm；柱温：25℃
±
5℃；流速：1.0mL/min
±
0.2mL/min；进样体积：20μL；流动相A：由体积比为90:10的0.08mol/L乙酸铵溶液和质量浓度为1％乙酸溶液组成；流动相B：由体积比为90:10的乙腈和质量浓度为1％乙酸溶液组成；洗脱程序：0～10min，流动相A的体积分数为93％；10～25min，流动相的体积分数由93％下降至85％；25～26min，流动相的体积分数由85％上升至93％；26～35min，流动相A的体积分数保持为93％。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述色谱柱的规格为150mm
×
4.6mm，3～5μm。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述定性检测的步骤如下：(1)分别以氨基己酸二聚体的标准物质、氨基己酸三聚体的标准物质和己内酰胺的标准物质为对照品，以水为溶剂，配制含氨基己酸二聚体对照品、氨基己酸三聚体对照品和己内酰胺对照品的溶液；将所述对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；(2)以待测的氨基己酸注射液为供试品，以水为溶剂，配制供试品溶液；将所述供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；(3)若步骤(2)中供试品的色谱图中出现与步骤(1)中所述氨基己酸二聚体对照品、氨基己酸三聚体对照品和己内酰胺对照品的保留时间一致的色谱峰出现，则待测样品中含有氨基己酸二聚体、氨基己酸三聚体和己内酰胺。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤(1)中所述氨基己酸二聚体的标准物质在所述对照品溶液中的浓度为0.00015～0.01mg/mL；步骤(1)中所述氨基己酸三聚体的标准物质在所述对照品溶液中的浓度为0.0001～0.01mg/mL；步骤(1)中所述己内酰胺的标准物质在所述对照品溶液中的浓度为0.00005～0.01mg/mL。5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中所述供试品溶液中氨基己酸的浓度为0.5～10mg/mL。6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述定量检测的步骤如下：(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：利虔，张执交，刘延奎，康彦龙，方胜，孙志国，张宪美，
申请(专利权)人：北京百奥药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：