一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，获取包括乳清酸的代谢物作为样品，包括如下步骤：S1、使用提取液从样品中提取代谢物；S2、提供包含稳定同位素标记的内标溶液，所述内标溶液对应于样品中待检测的代谢物；S3、使代谢物和内标溶液离子化以产生离子；S4、多反应监测模式下在质谱图中获得一种或多种离子的质荷比；S5、在多反应监测模式下确定乳清酸的信号强度；S6、使用对应于以上代谢物的稳定同位素标记的内标溶液，检测和定量乳清酸的量。本发明专利技术操作简单，使用相同的前处理条件和仪器条件就能实现氨基酸、肉碱、溶血卵磷脂酰胆碱类、酮类、乳清酸的同时检测，缩减了检测工作步骤和时间，提高了检测效率。率。率。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法


[0001]本专利技术涉及一种代谢物的检测方法，尤其涉及一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法。

技术介绍

[0002]串联质谱方法由于其高灵敏性、高特异性及高通量等优点，被广泛应用于新生儿遗传代谢病筛查。目前常用串联质谱法测量和评估采集到滤纸片上的新生儿干血样中的氨基酸、游离肉碱及酰基肉碱的浓度，通过半定量法得到分析物的浓度分布，从而诊断30多种疾病。
[0003]然而，有些疾病仅依赖目前的检测指标很难区分，如尿素循环障碍中的氨甲酰磷酸合成酶(CPS)缺乏症和鸟氨酸氨甲酰转移酶缺乏症(OCT)都会引起瓜氨酸降低，以往对于瓜氨酸降低的新生儿，一般都会召回留取尿液进行乳清酸检测来鉴别诊断。若能在初筛时增加“乳清酸”这个新的标志物，既能避免新生儿留尿困难，又能在血片初筛时就能进行疾病的鉴别诊断，尽早得到治疗，以符合新生儿筛查的宗旨。
[0004]目前的常规新生儿筛查方法，仅包括常规的氨基酸和C0
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C18的游离和酰基肉碱，常常缺少对于C20
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/C22
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/C24
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/C26
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溶血卵磷脂酰胆碱(C20
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/C22
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/C24
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/C26
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LPC)和极长链酰基肉碱(C20
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/C22
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/C24
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/C26
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脂酰肉碱)的检测。其中C26
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LPC是X连锁肾上腺脑白质营养不良及其它过氧化物酶体病的标志物，其它几个化合物对过氧化物酶体病的诊断和分型判断等也具有一定的作用。
[0005]目前公布的关于新生儿筛查检测方法的专利中，仅对个别组分进行方法学建立，然而，关于常规的氨基酸、酰基肉碱、C20
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/C22
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/C24
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/C26
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溶血卵磷脂酰胆碱和乳清酸并没有统一的测试方法。例如，专利文献CN109164194A仅对C20
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/C22
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/C24
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/C26
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溶血卵磷脂酰胆碱进行了分析，并没有和常规的检测项目融合；专利文献CN110187012A和CN103278584B仅介绍了常规的氨基酸、酰基肉碱的检测方法。
[0006]因此，为了满足氨基酸代谢异常(包括尿素循环障碍)、有机酸代谢异常和脂肪酸氧化代谢异常以及过氧化酶体病四大类代谢障碍疾病的筛查检测需求，有必要对现有新生儿代谢物的筛查方法进行改进。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，操作简单，使用相同的前处理条件和仪器条件就能实现氨基酸、肉碱、溶血卵磷脂酰胆碱类、酮类、乳清酸五大类物质的同时检测，缩减了检测工作步骤和时间，提高了检测效率。
[0008]本专利技术为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，包括如下步骤：获取包括乳清酸的代谢物作为样品，其特征在于，包括如下步骤：S1、使用提取液从所述样品中提取所述代谢物；S2、提供包含已知量的一
种或多种稳定同位素标记的内标溶液，所述内标溶液对应于样品中待检测的代谢物；S3、使所述代谢物和所述内标溶液离子化以产生离子；S4、多反应监测模式下在质谱图中获得一种或多种离子的质荷比；以及S5、在多反应监测模式下确定乳清酸的信号强度；S6、使用对应于以上代谢物的稳定同位素标记的内标溶液，检测和定量乳清酸的量。
[0009]进一步地，所述代谢物包含氨基酸、游离和酰基肉碱、溶血卵磷脂酰胆碱、琥珀酰丙酮和极长碳链的酰基肉碱中的一种或多种。
[0010]进一步地，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸/异亮氨酸/羟基脯氨酸、蛋氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸和/或缬氨酸；
[0011]所述游离和酰基肉碱包括游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、丙二酰肉碱/3
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羟基
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异戊酰肉碱、异戊酰肉碱、异戊烯酰肉碱、戊二酰肉碱/3
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羟基
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己酰肉碱、己酰肉碱、己二酰肉碱、辛酰肉碱、辛烯酰肉碱、癸酰肉碱、癸烯酰肉碱、癸二烯酰肉碱、十二碳酰肉碱、十二碳烯酰肉碱、十四碳酰肉碱、十四碳烯酰肉碱、十四碳二烯酰肉碱、3
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羟基
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十四碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十六碳烯酰肉碱、3
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羟基
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十六碳酰肉碱、3
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羟基
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十六碳烯酰肉碱、十八碳酰肉碱、十八碳烯酰肉碱、十八碳二烯酰肉碱、3
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羟基
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十八碳酰肉碱和/或3
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羟基
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十八碳烯酰肉碱；
[0012]所述极长碳链的酰基肉碱包括C20
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脂酰肉碱、C22
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脂酰肉碱、C24
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脂酰肉碱和/或C26
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脂酰肉碱；
[0013]所述溶血卵磷脂酰胆碱包括C20
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LPC、C22
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LPC、C24
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LPC和/或C26
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LPC。
[0014]进一步地，所述提取液由甲醇、水和羧酸组成，所述甲醇的体积含量为50％
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100％，羧酸浓度为0.05
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1mol/L，溶剂为水，所述羧酸选自甲酸、乙酸和草酸中的一种或其组合。
[0015]进一步地，所述样品为体液样品或血液样品。
[0016]进一步地，所述样品为干燥的血液样品。
[0017]进一步地，所述步骤S3通过将提取的代谢物和内标溶液制成的标准品通过液相系统输送至质谱仪的离子源进行离子化，所述步骤S4使用三重四极杆质谱仪或高分辨率质谱仪获取一种或多种离子的质荷比，所述步骤S5通过选择至少一种精确的质荷比离子确定乳清酸的信号强度。
[0018]进一步地，所述液相系统所用的流动相溶液由乙腈、水和饱和一元羧酸组成，所述乙腈的体积含量为50％
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100％，所述饱和一元羧酸浓度为0.05
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1mol/L，溶剂为水，所述饱和一元羧酸为甲酸、乙酸、丙酸或丁酸。
[0019]进一步地，所述内标溶液为对应于以下一种或多种稳定同位素标记的内标准品：丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、丙二酰肉碱、异戊酰肉碱、戊二酰肉碱、己酰肉碱、辛酰肉碱、癸酰肉碱、癸烯酰肉碱、十二碳酰肉碱、十四碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十八碳酰肉碱、C26
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脂酰肉碱、C26
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，获取包括乳清酸的代谢物作为样品，其特征在于，包括如下步骤：S1、使用提取液从所述样品中提取所述代谢物；S2、提供包含已知量的一种或多种稳定同位素标记的内标溶液，所述内标溶液对应于样品中待检测的代谢物；S3、使所述代谢物和所述内标溶液离子化以产生离子；S4、多反应监测模式下在质谱图中获得一种或多种离子的质荷比；以及S5、在多反应监测模式下确定乳清酸的信号强度；S6、使用对应于以上代谢物的稳定同位素标记的内标溶液，检测和定量乳清酸的量。2.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述代谢物包含氨基酸、游离和酰基肉碱、溶血卵磷脂酰胆碱、琥珀酰丙酮和极长碳链的酰基肉碱中的一种或多种。3.如权利要求2所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸/异亮氨酸/羟基脯氨酸、蛋氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸和/或缬氨酸；所述游离和酰基肉碱包括游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、丙二酰肉碱/3
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羟基
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异戊酰肉碱、异戊酰肉碱、异戊烯酰肉碱、戊二酰肉碱/3
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羟基
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己酰肉碱、己酰肉碱、己二酰肉碱、辛酰肉碱、辛烯酰肉碱、癸酰肉碱、癸烯酰肉碱、癸二烯酰肉碱、十二碳酰肉碱、十二碳烯酰肉碱、十四碳酰肉碱、十四碳烯酰肉碱、十四碳二烯酰肉碱、3
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羟基
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十四碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十六碳烯酰肉碱、3
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羟基
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十六碳酰肉碱、3
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羟基
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十六碳烯酰肉碱、十八碳酰肉碱、十八碳烯酰肉碱、十八碳二烯酰肉碱、3
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羟基
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十八碳酰肉碱和/或3
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羟基
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十八碳烯酰肉碱；所述极长碳链的酰基肉碱包括C20
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脂酰肉碱、C22
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脂酰肉碱、C24
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脂酰肉碱和/或C26
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脂酰肉碱；所述溶血卵磷脂酰胆碱包括C20
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LPC、C22
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LPC、C24
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LPC和/或C26
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LPC。4.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述提取液由甲醇、水和羧酸组成，所述甲醇的体积含量为50％
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100％，羧酸浓度为0.05
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1mol/L，溶剂为水，所述羧酸选自甲酸、乙酸和草酸中的一种或其组合。5.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述样品为体液样品或血液样品。6.如权利要求5所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述样品为干燥的血液样品。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊静静，陈武炼，强维，王培娟，
申请(专利权)人：上海义准生物有限公司，
类型：发明
国别省市：