胎粪代谢标志物及其筛选方法、应用技术

本发明专利技术涉及一种胎粪代谢标志物及其筛选方法、应用，该胎粪代谢标志物用于评价新生儿黄疸，该胎粪代谢标志物包括缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸与新生儿黄疸之间具有密切关联，通过检测这些代谢标志物能够可靠地判断新生儿黄疸的发生。这样，只需要通过对刚出生的新生儿所排泄的胎粪进行检测，就可以在第一时间判断新生儿是否容易发生黄疸，并及时进行相关的监测及干预，无需等到新生儿出生后两三天再进行判断，真正做到早发现、早干预、早治疗。早治疗。早治疗。

【技术实现步骤摘要】
胎粪代谢标志物及其筛选方法、应用


[0001]本申请涉及医学
，尤其涉及一种胎粪代谢标志物及其筛选方法、应用。

技术介绍

[0002]新生儿黄疸是一种比较常见的病症，其发生主要是由于体内胆红素代谢障碍而引起血清内胆红素浓度升高所致，表现为新生儿的皮肤、巩膜及黏膜黄染等现象，如胆红素值超标也称高胆红素血症。严重的高胆红素血症可导致胆红素脑病，该病如果未能及时发现并治疗可引发胆红素脑病及严重后遗症。
[0003]根据新生儿胆红素代谢特点，黄疸现象一般于新生儿出生后2～3天才出现，通过抽血检测可进一步准确判断胆红素高低。但这会导致对新生儿的黄疸诊断时间有所延迟，做不到第一时间发现并干预治疗。

技术实现思路

[0004]本申请公开了一种胎粪代谢标志物及其筛选方法、应用，通过研究发现胎粪代谢标志物与黄疸发生之间的关联性，为新生儿黄疸的早期预测提供可靠证据，以解决现有的黄疸诊断技术存在诊断及干预时间延迟的问题。
[0005]第一个方面，本申请提供给一种胎粪代谢标志物，用于评价新生儿黄疸，所述胎粪代谢标志物包括缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
[0006]进一步地，所述胎粪代谢标志物还包括蛋氨酸和苯丙氨酸。
[0007]第二个方面，本申请提供一种如第一个方面所述胎粪代谢标志物的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：
[0008]样品采集：分别采集黄疸组和对照组的胎粪，所述黄疸组为患有黄疸的新生儿、所述对照组为正常的新生儿；
[0009]样品处理：对所述胎粪进行前处理，得到待分析样品；
[0010]样品测试：对所述待分析样品进行非靶向代谢组学分析测试，得到测试结果；
[0011]代谢标志物筛选：对测试结果进行数据处理与分析，确定所述黄疸组与所述对照组之间的差异代谢物，并根据所述差异代谢物确定所述胎粪代谢标志物。
[0012]进一步地，所述样品处理的步骤包括：
[0013]冷冻干燥采集的所述胎粪；
[0014]称取冷冻干燥后的所述胎粪，加入含有氯磺丙脲的提取液，混合均匀后在室温下超声25min～35min；其中，所述提取液为乙腈与水按照体积比1:1的混合液体，所述氯磺丙脲在所述提取液中的浓度为5μmol/L，所述胎粪与所述提取液的固液比为30mg:600μL～800μL；
[0015]对浸有所述胎粪的所述提取液进行第一次离心，得到第一上清液，使用所述第一上清液作为所述待分析样品；其中，离心时间为15min～20min、离心转速为12000r/min～14000r/min。
[0016]进一步地，所述样品处理的步骤还包括：
[0017]向所述第一上清液中再次加入所述提取液进行第二次离心，得到第二上清液，使用所述第二上清液作为待分析样品；其中，离心时间为25min～30min、离心转速为18000r/min～19000r/min。
[0018]进一步地，所述样品测试的步骤为：使用超高效液相色谱
‑
四级杆飞行时间质谱仪对所述待分析样品进行非靶向代谢组学分析；
[0019]使用所述超高效液相色谱的条件包括：流动相A为含0.01wt％甲酸的水，流动相B为含0.01wt％甲酸的乙腈，流速为0.3mL/min，使用C18色谱柱作为分离柱，色谱分离梯度是1～12min时所述流动相B由体积比为2％上升至98％、保持2min后所述流动相B相的体积比逐渐下降至2％，总洗脱时间为16min；
[0020]使用所述四级杆飞行时间质谱仪的条件包括：离子采集范围的质荷比为100～800，采集模式为正离子模式ESI+和负离子模式ESI
‑
，毛细管电压均为3.5kV，进样锥电压均为20V；雾化气压均为35psi，碰撞气和干燥气均为氮气，流速分别为50L/h和9L/min，干燥器温度均为350℃。
[0021]进一步地，使用所述超高效液相色谱
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四级杆飞行时间质谱仪对所述待分析样品进行非靶向代谢组学分析的进样步骤为：将所述待分析样品中的每一个都吸取10μL进行混合作为质控样品，将所述待分析样品采用乱序进样检测且每间隔十个所述待分析样品插入一个所述质控样品。
[0022]进一步地，所述代谢标志物筛选的步骤为：对所述测试结果进行正交最小二乘判别分析，得到OPLS
‑
DA模型，根据所述OPLS
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DA模型确定所述黄疸组与所述对照组之间的所述差异代谢物，再根据对所述差异代谢物的分析从中筛选出所述胎粪代谢标志物。
[0023]第三个方面，本申请提供一种如第一个方面所述的胎粪代谢标志物在制备新生儿黄疸检测试剂盒中的应用。
[0024]第四个方面，本申请提供一种新生儿黄疸诊断试剂盒，所述试剂盒用于检测新生儿胎便中的缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。
[0025]进一步地，所述试剂盒用于检测新生儿胎便中的缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸以及蛋氨酸和苯丙氨酸。
[0026]与现有技术相比，本申请具有如下有益效果：
[0027]本申请专利技术人研究发现，肠道代谢产物中的支链氨基酸——缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸与新生儿黄疸之间具有密切关联，通过检测这些代谢标志物能够可靠地判断新生儿黄疸的发生。这样，只需要通过对刚出生的新生儿所排泄的胎粪(也即新生儿出生后的第一次排便)进行检测，就可以在第一时间预判新生儿是否容易发生黄疸，并及时进行相关的监测、干预及治疗，无需等到新生儿出生后两三天再进行判断，真正做到早发现、早干预、早治疗。不仅如此，由于是利用新生儿胎粪进行检测，无需对新生儿采血，既可以降低操作难度、又可以避免因采血而给新生儿带来的疼痛感。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领
域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0029]图1是本申请实施例中黄疸组对对照组的OPLS
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DA模型的置换检验结果图；
[0030]图2是本申请实施例中黄疸组对对照组的OPLS
‑
DA模型得分散点图；
[0031]图3是申请实施例中黄疸组对对照组的Z
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score图；
[0032]图4是本申请实施例中黄疸组对对照组的差异代谢物火山图；
[0033]图5是本申请实施例中黄疸组对对照组的差异代谢物相关系数热图；
[0034]图6是本申请实施例中黄疸组对对照组的差异代谢物相关系数热图(标记出负相关区域)；
[0035]图7是本申请实施例中黄疸组对对照组的差异代谢物的代谢通路图；
[0036]图8是本申请实施例中黄疸组的重点差异代谢物ROC曲线图。
具体实施方式
[0037]下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胎粪代谢标志物，用于评价新生儿黄疸，其特征在于，所述胎粪代谢标志物包括缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。2.根据权利要求1所述的胎粪代谢标志物，其特征在于，所述胎粪代谢标志物还包括蛋氨酸和苯丙氨酸。3.一种如权利要求1或2任一项所述胎粪代谢标志物的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：样品采集：分别采集黄疸组和对照组的胎粪，所述黄疸组为患有黄疸的新生儿、所述对照组为正常的新生儿；样品处理：对所述胎粪进行前处理，得到待分析样品；样品测试：对所述待分析样品进行非靶向代谢组学分析测试，得到测试结果；代谢标志物筛选：对测试结果进行数据处理与分析，确定所述黄疸组与所述对照组之间的差异代谢物，并根据所述差异代谢物确定所述胎粪代谢标志物。4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述样品处理的步骤包括：冷冻干燥采集的所述胎粪；称取冷冻干燥后的所述胎粪，加入含有氯磺丙脲的提取液，混合均匀后在室温下超声25min～35min；其中，所述提取液为乙腈与水按照体积比1:1的混合液体，所述氯磺丙脲在所述提取液中的浓度为5μmol/L，所述胎粪与所述提取液的固液比为30mg:600μL～800μL；对浸有所述胎粪的所述提取液进行第一次离心，得到第一上清液，使用所述第一上清液作为所述待分析样品；其中，离心时间为15min～20min、离心转速为12000r/min～14000r/min。5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述样品处理的步骤还包括：向所述第一上清液中再次加入所述提取液进行第二次离心，得到第二上清液，使用所述第二上清液作为待分析样品；其中，离心时间为25min～30min、离心转速为18000r/min～19000r/min。6.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述样品测试的步骤为：使用超高效液相色谱
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【专利技术属性】
技术研发人员：曾淑娟，丘惠娴，王章星，王明帮，黄循斌，唐细生，史林东，郭凯平，刘婷，
申请(专利权)人：深圳市龙岗中心医院深圳市龙岗中心医院集团，深圳市第九人民医院，深圳市龙岗中心医院针灸研究所，
类型：发明
国别省市：