一种分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其杂质的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其杂质的分析方法，属于分析化学领域，本发明专利技术以五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，以水

【技术实现步骤摘要】
一种分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其杂质的分析方法


[0001]本专利技术属于分析化学领域，具体涉及分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其特定杂质的分析方法。

技术介绍

[0002]磷酸奥司他韦是神经氨酸酶抑制剂，可以竞争性的与流感病毒神经氨酸酶的活动位点结合，通过干扰病毒从被感染的宿主细胞中释放，从而减少甲型和乙型流感的传播，被广泛用于甲型和乙型流感的预防和治疗。
[0003](1S，5R，6S)
‑5‑
(戊基
‑3‑
基氧基)
‑7‑
氧杂双环[4.1.0]庚
‑3‑
烯
‑3‑
羧酸乙酯是合成磷酸奥司他韦的重要中间体，其分子式为：C
14
H
22
O4，分子量为：254.33；结构式如下所示：
[0004][0005]杂质0103为磷酸奥司他韦中间体原料产物，分子式为C
14
H
22
O5，分子量为270.33，结构式如下所示：
[0006][0007]杂质0104为磷酸奥司他韦中间体原料产物，分子式为C
15
H
24
O7S，分子量为348.41，结构式如下所示：
[0008][0009]杂质0105为磷酸奥司他韦中间体原料产物，分子式为C
15
H
26
O7S，分子量为350.43，结构式如下所示：
[0010][0011]杂质0109为磷酸奥司他韦中间体工艺杂质，分子式为C
13
H
20
O4，分子量为240.30，结构式如下所示：
[0012][0013]杂质0111为磷酸奥司他韦中间体非对映异构体杂质，分子式为C
14
H
22
O4，分子量为254.33，结构式如下所示：
[0014][0015]杂质0112为磷酸奥司他韦中间体非对映异构体杂质，与杂质0111为对映异构体结构，在液相普通色谱条件下出峰重合，分子式为C
14
H
22
O4，分子量为254.33，结构式如下所示：
[0016][0017]杂质0114为磷酸奥司他韦中间体工艺杂质，与磷酸奥司他韦中间体化学性质相似，在普通液相色谱条件下与磷酸奥司他韦中间体出峰分离度较差，分子式为C
14
H
22
O4，分子量为254.33，结构式如下所示：
[0018][0019]杂质0114现有技术中未见对上述中间体及杂质进行分离的检测方法。

技术实现思路

[0020]为解决上述问题，本专利技术提供一种能够有效分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其特定杂质的分析方法，该方法检测灵敏度高，采用五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以水
‑
高氯酸为流动相A，以乙腈
‑
甲醇为流动相B，采用梯度洗脱，对磷酸奥司他韦中间体及其特定杂质进行分离与检测，具体包括以下步骤：
[0021]a、制备系统测试液：取磷酸奥司他韦中间体及各杂质适量，用溶剂(乙腈
‑
水(30∶70))溶解并稀释，得到磷酸奥司他韦中间体浓度为0.5mg/ml～2mg/ml，优选为1.0mg/ml，各杂质均为2μg/ml的系统测试液(杂质限度不得过0.2％，2μg/ml按照供试品浓度1mg/ml计算得到)；
[0022]b、采用反相高效液相色谱进行检测，具体检测条件如下：
[0023]柱温为20～50℃，色谱柱固定相：用五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，以水
‑
高氯酸为流动相A，以乙腈
‑
甲醇为流动相B，采用梯度洗脱。
[0024]所述流动相A中水与高氯酸的体积比为100∶0.11～100∶0.09，所述流动相B中乙腈与甲醇的体积比为78∶22～82∶18。
[0025]进一步的，步骤b中，色谱柱的规格：内径为4.0～5.0mm长度为100～250mm，填料粒径为2～5μm。
[0026]优选的，步骤b中，色谱柱的规格：内径4.6mm，长度150mm，填料粒径为5μm。
[0027]进一步的，步骤b中，色谱柱以五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂，优选Phenomenex Kinetex PFP
[0028]进一步的，步骤b中，所述水
‑
高氯酸的体积比为100∶0.1，所述乙腈与甲醇的体积比为80∶20。
[0029]进一步的，步骤b中，检测波长为205～210nm，优选207nm。
[0030]进一步的，步骤b中，进样量为1～100μl，优选10μl。
[0031]进一步的，步骤b中，流速为1.0～1.5ml/min，优选1.0ml/min。
[0032]进一步的，步骤b中，柱温为20～50℃，优选25℃。
[0033]从0min～65min时间内，流动相A占流动相的体积比为80％～50％，流动相B占流动相的体积比为20％～50％。
[0034]进一步，所述梯度洗脱程序如下：
[0035][0036]有益效果：
[0037](1)本专利技术采用五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，以水
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高氯酸为流动相A，以乙腈
‑
甲醇为流动相B的反相高效液相色谱法分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其特定杂质，能有效分离磷酸奥司他韦中间体中各杂质；而其他色谱条件的HPLC结果显示，磷酸奥司他韦中间体及其特定杂质不能有效分离。
[0038](2)一般磷酸奥司他韦中间体包括的杂质为0103、0104、0105、0109、0111、0112、0114，本专利技术的检测方法可能很好的对磷酸奥司他韦中间体的特定杂质进行检测与控制。
[0039](3)本专利技术对检测过程中反相液相色谱操作参数进行了优化选择，使检测时间短，同时保证检测的特异性、准确度和灵敏度。
附图说明
[0040]图1为实施例1中对系统测试液的检测图谱；
[0041]图2为实施例2中对系统测试液的检测图谱；
[0042]图3为实施例3中对系统测试液的检测图谱；
[0043]图4为实施例4中对系统测试液的检测图谱；
[0044]图5为实施例5中对系统测试液的检测图谱；
[0045]图6～图12为实施例5中对杂质定位溶液的检测图谱；
[0046]图13为实施例6中对空白溶液的检测图谱；
[0047]图14为实施例6中对系统测试液的检测图谱；
[0048]图15为实施例7中对检测限溶液的检测图谱；
[0049]图16为实施例7中对定量限溶液的检测图谱；
具体实施方式
[0050]以下通过具体实施例对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离与检测磷酸奥司他韦中间体及其杂质的分析方法，其特征在于：用五氟苯基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以水
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高氯酸为流动相A，以乙腈
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甲醇为流动相B，采用梯度洗脱，对磷酸奥司他韦中间体及其杂质进行分离与检测。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述流动相A中水与高氯酸的体积比为100∶0.11～100∶0.09，所述流动相B中乙腈与甲醇的体积比为78∶22～82∶18；色谱柱柱温为25～50℃、进样量为1～100μl、检测波长为205～210nm、流速为1.0～1.5ml/ml。3.根据权利要求1或2所述的分析方法，其特征在于，所述水与高氯酸的体积比为100∶0.1，所述乙腈与甲醇的体积比为80∶20；色谱柱柱温为25℃、进样量为10μl、检测波长为207nm、流速为1.0ml/ml。4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王刚，罗林，王静，何美菁，吴雯，郭辉，
申请(专利权)人：苏州正济药业有限公司，
类型：发明
国别省市：