用于可调整调控的CD40L组合物和方法技术

本公开提供了用于癌症免疫疗法的可调控生物回路系统、效应模块和组合物。还提供了用于诱导受试者中的抗癌免疫应答的方法。于诱导受试者中的抗癌免疫应答的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于可调整调控的CD40L组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年3月8日提交的美国临时申请号62/815,404；2019年4月18日提交的美国临时申请号62/835,554；以及2019年6月12日提交的美国临时申请号62/860,356的优先权和权益，所述临时申请中每一篇的内容以引用的方式整体并入本文。
[0003]对序列表的引用
[0004]本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表作为在2020年3月4日创建的名称为2095_1216PCT_ST25.txt的文件提供，所述文件的大小为10.8MB。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。

技术介绍

[0005]基因和细胞疗法正在彻底改变医学，并为以前难以治愈的疾患的治疗提供新的希望。然而，大多数当前技术不允许滴定靶蛋白诱导的时程(timing)或水平。这使得许多潜在基因和细胞疗法应用难以或不可能安全且有效地部署。
[0006]外源性和/或内源性基因控制不足是许多基因和细胞疗法环境中的关键问题。这种可调整性的缺乏也使得难以安全地表达具有狭窄或不确定治疗窗口的蛋白质或需要更多滴定或瞬时表达的那些蛋白质。
[0007]调控蛋白质表达或功能的一种途径是使用药物应答结构域(DRD)，也称为去稳定结构域(DD)。药物应答结构域是可附加至目标靶蛋白的小蛋白质结构域。在不存在DRD结合配体的情况下，DRD使附接的目标蛋白质变得不稳定，并且目标蛋白质被细胞的泛素
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蛋白酶体系统迅速降解。然而，当特定小分子DRD结合配体与DRD结合时，附接的目标蛋白质得以稳定化，并且实现蛋白质功能。
[0008]免疫系统在肿瘤控制中的作用(特别是T细胞介导的细胞毒性)是公认的。有越来越多的证据表明T细胞可在疾病的早期和晚期阶段在癌症患者中控制肿瘤生长和存活。然而，肿瘤特异性T细胞应答很难在癌症患者中装配和维持。
[0009]迄今为止受到极大关注的T细胞途径包括通过细胞毒性T淋巴细胞抗原
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4(CTLA
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4，CD152)和程序性死亡配体1(PD
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L1，也称为B7
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H1或CD274)进行信号传导。然而，最近，通过T细胞途径发出信号的其他分子(包括CD40配体(CD40L))，作为用于肿瘤控制的介体引起了人们的兴趣。
[0010]CD40L(也称为CD154、CD40配体、gp39或TBAM)是33kDa的II型膜糖蛋白(Swiss
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ProtAcc
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No P29965)。此外，存在更短的18kDa CD40L可溶性形式(也称为sCD40L或可溶性CD40L)。这些可溶性形式的CD40L是通过膜结合蛋白的蛋白水解加工产生的，但在没有更高阶寡聚化(例如三聚化)的情况下，可溶性物质的细胞活性较弱。CD40L结合并活化CD40。
[0011]CD40L是TNF分子家族的成员，其主要在活化的T细胞(包括Th0、Th1和Th2亚型)上表达，并且形成与此家族的其他成员相似的同源三聚体。进一步地，还发现CD40L在肥大细胞和活化的嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞上表达。CD40L结合至其在抗原呈递细胞(APC)上的受体CD40，这引起取决于靶细胞类型的许多作用。一般来说，CD40L起共刺激分子的作用
并且结合APC上的MHC分子引起的T细胞受体刺激作用诱导APC的活化。CD40L还可结合至B细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板、嗜中性粒细胞、树突细胞、内皮细胞和αSMC(平滑肌细胞)。CD40L与树突细胞上表达的CD40的结合可促进树突细胞(DC)许可。DC可通过抗原特异性T辅助细胞转化为功能状态，以活化细胞毒性CD8+ T细胞(称为DC许可的过程)。DC上的CD40接合导致DC刺激，如通过共刺激和MHC分子的表面表达；促炎性细胞因子产生(例如IL12和TNF)以及表位扩展，所有被认为有助于肿瘤根除和抗肿瘤作用的免疫应答所证明。
[0012]尽管过去十年在开发用于抗击癌症和其他疾病的策略方面取得了重大进展，但患有晚期、难治性和转移性疾病的患者的临床选择有限。化学疗法、放射和高剂量化学疗法已成为剂量限制。对于具有更好的治疗功效、更长的临床益处和改善的安全性特征的新的低毒性方法和治疗剂仍然存在大量未满足的需求，特别是对于患有晚期疾病或对现有治疗剂具有耐药性的癌症的那些患者而言更是如此。

技术实现思路

[0013]本公开提供了展现出小分子依赖性稳定性的新型蛋白质结构域。此类蛋白质结构域被称为药物应答结构域(DRD)。DRD在不存在其结合配体的情况下具有去稳定作用并且导致与DRD融合的目标有效载荷或蛋白质(POI)(本文可互换使用)的降解，而在其结合配体存在的情况下，可操作连接的DRD和有效载荷可得以稳定化，并且其稳定性是剂量依赖性的。
[0014]本文提供了包含效应模块的组合物。效应模块可包含与一种或多种有效载荷可操作连接的刺激应答元件(SRE)。在各种实施方案中，SRE包含药物应答结构域(DRD)，或基本上由药物应答结构域(DRD)组成，或由药物应答结构域(DRD)组成。如本文所用，SRE也可被称为DRD或DD。
[0015]本文举例说明的组合物包括但不限于包含效应模块的组合物，所述效应模块包含可操作地连接至第一有效载荷的刺激应答元件(SRE)，其中所述第一有效载荷包含人CD40L(SEQ ID NO:3820)或相对于SEQ ID NO:3820包含一个或多个选自Y170G、Y172G、H224G、G226F、G226H、G226W或G227F的突变的突变型CD40L，所述有效载荷附接有、附加有所述SRE或者与所述SRE缔合。上面例示的组合物可包含DRD，其中所述DRD完整或部分地包含ER、ecDHFR、FKBP、PDE5或hDHFR蛋白，其中所述DRD进一步包含位于所述ER、ecDHFR、FKBP、PDE5或hDHFR蛋白的氨基酸序列中的一个或多个突变。
[0016]本文所述的示例性CD40L有效载荷可相对于SEQ ID NO:3820包含一个或多个突变，如但不限于Y170G、Y172G、H224G、G226F、G226H、G226W或G227F。所述第一有效载荷可完整或部分地包含人CD40L(SEQ ID NO:3820)。在一些实施方案中，所述第一有效载荷可以是完整CD40L(SEQ ID NO:3820)。包含完整CD40L的有效载荷的非限制性实例可以是CD40L(H224G，G226F)(SEQ ID NO:6598)；CD40L(H224G，G226H)(SEQ ID NO:6600)；CD40L(Y172G，G226F)(SEQ ID NO:6602)；CD40L(Y170G，H224G，G226W)(SEQ ID NO:6604)；或CD40L(H125G，G227F)(SEQ ID NO:6606)。
[0017]本文描述的SRE可对至少一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含效应模块的组合物，所述效应模块包含可操作地连接至第一有效载荷的刺激应答元件(SRE)，其中所述第一有效载荷包含人CD40L(SEQ ID NO:3820)或相对于SEQ ID NO:3820包含一个或多个选自Y170G、Y172G、H224G、G226F、G226H、G226W或G227F的突变的突变型CD40L。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述SRE完整或部分地包含选自ER、ecDHFR、FKBP、PDE5或hDHFR蛋白的DRD，其中所述DRD进一步包含位于所述ER、ecDHFR、FKBP、PDE5或hDHFR蛋白的氨基酸序列中的一个或多个突变。3.如权利要求2所述的组合物，其中所述DRD源自ER蛋白，并且其中所述DRD具有包含SEQ ID NO:633、637、641、642、644、646、648、650、652、654、656、658、660、662、664、666、668、670、672、674、676、678、680、682、684、686、688、690、692、694、696、698、700、702、704、706、708、710、712、714、716、718、720、722、724或726的氨基酸序列。4.如权利要求2所述的组合物，其中所述DRD源自ecDHFR蛋白，并且其中所述DRD具有包含SEQ ID NO:253、255、264、267、269、6554、6556、6558、6560、6562、6564、6566、6568、6570、6572、6574、6576、6578、6580、6582、6584、6586、6588或6590的氨基酸序列。5.如权利要求2所述的组合物，其中所述DRD源自FKBP蛋白，并且其中所述DRD具有包含SEQ ID NO:270、271、272、274、277、285或286的氨基酸序列。6.如权利要求2所述的组合物，其中所述DRD源自PDE5蛋白，并且其中所述DRD具有包含SEQ ID NO:294、296、298、300、302、306、308、313、315、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、375、378、381、384、387、389、391、394、397、400、403、406、409、412、415、417、420、422、424、426、428、430、432、434、436、438、440、442、444、446、448、450、452、454、456、458、460、462、464、466、468、470、472、474、476、478、480、482、484、486、488、490、492、494、496、498、500、502、504、506、508、510、512、514、516、518、520、522、524、526、528、530、532、534、536、538、540、542、544、546、548、550、552、554、556、558、560、563、565、567、569、571、573、575、577、579、581、583、585、587、589、591、593、595、597、599、601、603、605、607、609、611、613、615、617、619、621、623、625、627、629、631、6406、6408、6410、6412、6414、6416、6418、6420、6422、6424、6426、6428、6430、6432、6434、6436、6438、6440、6442、6444、6446、6448、6450、6452、6454、6456、6458、6460、6462、6464、6466、6468、6470、6472、6474、6476、6478、6480、6482、6484、6486、6488、6490、6492、6494、6496、6498、6500、6502、6504、6506、6508、6510、6512、6514、6516、6518、6520、6522、6524、6526、6528或6530的氨基酸序列。7.如权利要求2所述的组合物，其中所述DRD源自hDHFR蛋白，并且其中所述DRD具有包含SEQ ID NO:78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、149、151、153、155、157、159、161、163、165、166、168、170、172、174、176、179、181、183、187、189、191、193、195、197、201、203、205、207、209、210、212、214、216、218、221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251或6552的氨基酸序列。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的组合物，其中所述DRD对至少一种刺激物有应答或与
至少一种刺激物相互作用。9.如权利要求8所述的组合物，其中所述刺激物是小分子。10.如权利要求1所述的组合物，其中所述SRE包含第二有效载荷，其中所述第二有效载荷是嵌合抗原受体(CAR)。11.如权利要求10所述的组合物，其中所述第二有效载荷包含CD19 CAR。12.如权利要求11所述的组合物，其中所述SRE包含SEQ ID NO:6539的氨基酸序列。13.一种效应模块，所述效应模块包含可操作地连接至第一有效载荷的药物应答元件(DRD)，其中所述DRD完整或部分地包含ER、ecDHFR、FKBP、PDE5或hDHFR蛋白，其中所述DRD进一步包含位于所述ER、ecDHFR、FKBP、PDE5或hDHFR蛋白的氨基酸序列中的一个或多个突变，并且其中所述第一有效载荷完整或部分地包含人CD40L(SEQ ID NO:3820)或其人CD40L突变体。14.如权利要求13所述的效应模块，其中所述效应模块包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:6546或SEQ ID NO:6550或SEQ ID NO:6620或SEQ ID NO:6622或SEQ ID NO:6624或SEQ ID NO:6626或SEQ ID NO:6628或SEQ ID NO:6630或SEQ ID NO:6632或SEQ ID NO:6634或SEQ ID NO:6636或SEQ ID NO:6638或SEQ ID NO:6640或SEQ ID NO:6642或SEQ ID NO:6644或SEQ ID NO:6646或SEQ ID NO:6648或SEQ ID NO:6650或SEQ ID NO:6652或SEQ ID NO:6654或SEQ ID NO:6656或SEQ ID NO:6658或SEQ ID NO:6660或SEQ ID NO:6662或SEQ ID NO:6664或SEQ ID NO:6666或SEQ ID NO:6668或SEQ ID NO:6670或SEQ ID NO:6672。15.如权利要求13所述的效应模块，其中所述第一有效载荷是突变型CD40L。16.如权利要求13所述的效应模块，其中所述DRD包含SEQ ID NO:253、255、264、267、269、6554、6556、6558、6560、6562、6564、6566、6568、6570、6572、6574、6576、6578、6580、6582、6584、6586、6588或6590的氨基酸序列。17.如权利要求13所述的效应模块，其中所述DRD包含SEQ ID NO:633、637、641、642、644、646、648、650、652、654、656、658、660、662、664、666、668、670、672、674、676、678、680、682、684、686、688、690、692、694、696、698、700、702、704、706、708、710、712、714、716、718、720、722、724或726的氨基酸序列。18.如权利要求13所述的效应模块，其中所述DRD包含SEQ ID NO:270、271、272、274、277、285或286的氨基酸序列。19.如权利要求13所述的效应模块，其中所述DRD包含SEQ ID NO:294、296、298、300、302、306、308、313、315、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、375、378、381、384、387、389、391、3...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：黑曜石疗法公司，
类型：发明
国别省市：