用于免疫疗法的CD19组合物和方法技术

本发明专利技术提供用于癌症免疫疗法的生物回路系统、效应模块和组合物。还提供了用于在受试者中诱导抗癌免疫应答的方法。

CD19 composition and method for immunotherapy

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫疗法的CD19组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求提交于2017年3月3日名称为CompositionsandMethodsforImmunotherapy的美国临时专利申请号62/466,601和提交于2017年4月11日名称为AntiCD19compositionsandmethodsforimmunotherapy的美国临时专利申请号62/484,052的优先权，每个专利的内容以全文引用的方式并入本文。序列表本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表提供为创建于2018年3月2日名称为2095_1201PCT_SL.txt的文件，所述文件的大小为2,116,001字节。电子格式的序列表中的信息以全文引用的方式并入本文。
本专利技术涉及用于免疫疗法的组合物和方法。本专利技术中所提供的包括在癌症免疫疗法中使用的生物回路系统、效应模块(effectormodule)、刺激物应答元件(SRE)和免疫治疗剂的多肽、编码所述多肽的多核苷酸、含有所述多肽和/或多核苷酸的载体和细胞。在一个实施方案中，组合物包含调整蛋白稳定性的去稳定结构域(DD)。
技术介绍
癌症免疫疗法的目的在于通过复原肿瘤反应性免疫细胞(主要是T细胞)的杀肿瘤功能来消灭癌细胞。癌症免疫疗法的策略，包括最近的检查点阻断、过继性细胞转移(ACT)和可以增加抗肿瘤免疫效应细胞的癌症疫苗的开发，已经在若干肿瘤中产生了显著的结果。宿主抗肿瘤免疫和癌症免疫疗法的影响受到三个主要障碍的阻碍：1)由克隆删除(clonaldeletion)所致的肿瘤抗原特异性T细胞数少；2)肿瘤微环境中固有免疫细胞的活化不良和致耐受性抗原呈递细胞的积累；以及3)免疫抑制性肿瘤微环境的形成。特别地，由于在免疫抑制性肿瘤微环境中缺乏有效的抗肿瘤应答，所以在实体瘤中免疫治疗方案的治疗功效仍不令人满意。肿瘤细胞常常诱导免疫耐受或抑制，并且获得此类耐受是因为即使真正的外来肿瘤抗原也将变得耐受。此类耐受同样是活跃的并且显性的，因为癌症疫苗以及预活化的免疫效应细胞(例如，T细胞)的过继性转移受到肿瘤微环境(TME)中抑制因子的抑制。此外，施用工程化的T细胞可导致在靶/脱靶毒性以及细胞因子释放综合征(由TeyClin.Transl.Immunol.,2014,3:e1710.1038综述)。在不良事件的情况下，需要开发可以打开或关闭转基因免疫治疗剂表达的可调开关。例如，过继性细胞疗法可具有非常长并且无限期的半衰期。由于毒性可以是渐进的，所以需要安全开关来消除输注的细胞。可以以高灵活性调整转基因蛋白水平和表达窗的系统和方法可以增强治疗益处，并减少潜在的副作用。为了开发可针对疾病疗法、特别是癌症免疫疗法调控治疗剂，本专利技术提供了控制免疫治疗剂的表达的生物回路系统。所述生物回路系统包含刺激物和至少一个对刺激物有应答的效应模块。效应模块可包括结合刺激物并对刺激物有应答的刺激物应答元件(SRE)和可操作地连接至SRE的免疫治疗剂。在一个示例中，SRE是去稳定结构域(DD)，其在不存在其特异性配体的情况下去稳定并且可通过结合至其特异性配体而稳定。
技术实现思路
本专利技术提供用于免疫疗法的组合物和方法。所述组合物涉及在细胞中或在受试者中诱导抗癌免疫应答的可调系统和剂。可调系统和剂可以是包含至少一个对至少一种刺激物有应答的效应模块的生物回路系统。生物回路系统可以是但不限于去稳定结构域(DD)生物回路系统、二聚生物回路系统、受体生物回路系统和细胞生物回路系统。这些系统进一步教导于共同拥有的提交于2016年4月11日的美国临时专利申请号62/320,864、提交于2017年3月3日的美国临时专利申请号62/466,596以及国际公布WO2017/180587(每个专利的内容以全文引用的方式并入本文)。在一些实施方案中，用于诱导免疫应答的组合物可包含效应模块。在一些实施方案中，效应模块可包含可操作地连接至至少一个有效载荷的刺激物应答元件(SRE)。在一个方面中，有效载荷可为免疫治疗剂。在一些实施方案中，免疫治疗剂可选自但不限于嵌合抗原受体(CAR)和抗体。在一个方面中，组合物的SRE可对至少一种刺激物有应答或与至少一种刺激物相互作用。在一些实施方案中，SRE可包含去稳定结构域(DD)。DD可来源于亲本蛋白或来源于与亲本蛋白相比具有一个、两个、三个或更多个氨基酸突变的突变蛋白。在一些实施方案中，亲本蛋白可选自但不限于：人蛋白FKBP，其包含氨基酸序列SEQIDNO.3；人DHFR(hDHFR)，其包含氨基酸序列SEQIDNO.2；大肠杆菌DHFR，其包含氨基酸序列SEQIDNO.1；PDE5，其包含氨基酸序列SEQIDNO.4；PPARγ，其包含氨基酸序列SEQIDNO.5；CA2，其包含氨基酸序列SEQIDNO.6；或NQO2，其包含氨基酸序列SEQIDNO.7。在一个方面中，亲本蛋白为hDHFR，并且DD包含突变蛋白。突变蛋白可包含单突变并且可选自但不限于：hDHFR(I17V)、hDHFR(F59S)、hDHFR(N65D)、hDHFR(K81R)、hDHFR(A107V)、hDHFR(Y122I)、hDHFR(N127Y)、hDHFR(M140I)、hDHFR(K185E)、hDHFR(N186D)和hDHFR(M140I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；N127Y)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；I17V)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；K185E)。在一些实施方案中，突变蛋白可包含两个突变并且可选自但不限于：hDHFR(C7R、Y163C)、hDHFR(A10V、H88Y)、hDHFR(Q36K、Y122I)、hDHFR(M53T、R138I)、hDHFR(T57A、I72A)、hDHFR(E63G、I176F)、hDHFR(G21T、Y122I)、hDHFR(L74N、Y122I)、hDHFR(V75F、Y122I)、hDHFR(L94A、T147A)、DHFR(V121A、Y22I)、hDHFR(Y122I、A125F)、hDHFR(H131R、E144G)、hDHFR(T137R、F143L)、hDHFR(Y178H、E18IG)和hDHFR(Y183H、K185E)、hDHFR(E162G、I176F)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；I17V、Y122I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I、M140I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；N127Y、Y122I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；E162G、I176F)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；H131R、E144G)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I、A125F)。在一些实施方案中，突变体可包含三个突变，并且突变体可选自：hDHFR(V9A、S93R、P150L)、hDHFR(I8V、K133E、Y163C)、hDHFR(L23S、V121A、Y15本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于在细胞或受试者中诱导免疫应答的组合物，其包含第一效应模块，所述效应模块包含可操作地连接至至少一种免疫治疗剂的第一刺激物应答元件(SRE)。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170303 US 62/466,601;20170411 US 62/484,0521.一种用于在细胞或受试者中诱导免疫应答的组合物，其包含第一效应模块，所述效应模块包含可操作地连接至至少一种免疫治疗剂的第一刺激物应答元件(SRE)。


2.如权利要求1所述的组合物，其中所述至少一种治疗剂选自嵌合抗原受体(CAR)和抗体。


3.如权利要求2所述的组合物，其中所述第一SRE对至少一种刺激物有应答或与至少一种刺激物相互作用。


4.如权利要求3所述的组合物，其中所述第一SRE为去稳定结构域(DD)。


5.如权利要求4所述的组合物，其中所述DD来源于亲本蛋白或与所述亲本蛋白相比具有一个、两个、三个或更多个氨基酸突变的突变蛋白，其中所述亲本蛋白选自：
(a)包含氨基酸序列SEQIDNO.3的人蛋白FKBP，
(b)包含氨基酸序列SEQIDNO.1的人DHFR(hDHFR)，
(c)包含氨基酸序列SEQIDNO.2的大肠杆菌DHFR(ecDHFR)，
(d)包含氨基酸序列SEQIDNO.4的PDE5，
(e)包含氨基酸序列SEQIDNO.5的PPARγ，
(f)包含氨基酸序列SEQIDNO.6的CA2，和
(g)包含氨基酸序列SEQIDNO.7的NQO2。


6.如权利要求5所述的组合物，其中所述亲本蛋白为hDHFR，并且所述DD包含具有以下的突变蛋白：
(a)选自以下的单突变：hDHFR(I17V)、hDHFR(F59S)、hDHFR(N65D)、hDHFR(K81R)、hDHFR(A107V)、hDHFR(Y122I)、hDHFR(N127Y)、hDHFR(M140I)、hDHFR(K185E)、hDHFR(N186D)、hDHFR(M140I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；N127Y)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；I17V)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；K185E)；
(b)选自以下的双突变：hDHFR(C7R、Y163C)、hDHFR(A10V、H88Y)、hDHFR(Q36K、Y122I)、hDHFR(M53T、R138I)、hDHFR(T57A、I72A)、hDHFR(E63G、I176F)、hDHFR(G21T、Y122I)、hDHFR(L74N、Y122I)、hDHFR(V75F、Y122I)、hDHFR(L94A、T147A)、DHFR(V121A、Y22I)、hDHFR(Y122I、A125F)、hDHFR(H131R、E144G)、hDHFR(T137R、F143L)、hDHFR(Y178H、E18IG)、hDHFR(Y183H、K185E)、hDHFR(E162G、I176F)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；I17V、Y122I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I、M140I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；N127Y、Y122I)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；E162G、I176F)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；H131R、E144G)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I、A125F)；
(c)选自以下的三突变：hDHFR(V9A、S93R、P150L)、hDHFR(I8V、K133E、Y163C)、hDHFR(L23S、V121A、Y157C)、hDHFR(K19E、F89L、E181G)、hDHFR(Q36F、N65F、Y122I)、hDHFR(G54R、M140V、S168C)、hDHFR(V110A、V136M、K177R)、hDHFR(Q36F、Y122I、A125F)、hDHFR(N49D、F59S、D153G)、hDHFR(G21E、I72V、I176T)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；Q36F、Y122I、A125F)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；Y122I、H131R、E144G)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；E31D、F32M、V116I)和hDHFR(WT的氨基酸2-187；Q36F、N65F、Y122I)；或
(d)选自以下的四突变或更高突变：hDHFR(V2A、R33G、Q36R、L100P、K185R)、hDHFR(WT的氨基酸2-187；D22S、F32M、R33S、Q36S、N65S)、hDHFR(I17N、L98S、K99R、M112T、E151G、E162G、E172G)、hDHFR(G16S、I17V、F89L、D96G、K123E、M140V、D146G、K156R)、hDHFR(K81R、K99R、L100P、E102G、N108D、K123R、H128R、D142G、F180L、K185E)、hDHFR(R138G、D142G、F143S、K156R、K158E、E162G、V166A、K177E、Y178C、K185E、N186S)、hDHFR(N14S、P24S、F35L、M53T、K56E、R92G、S93G、N127S、H128Y、F135L、F143S、L159P、L160P、E173A、F180L)、hDHFR(F35L、R37G、N65A、L68S、K69E、R71G、L80P、K99G、G117D、L132P、I139V、M140I、D142G、D146G、E173G、D187G)、hDHFR(L28P、N30H、M38V、V44A、L68S、N73G、R78G、A97T、K99R、A107T、K109R、D111N、L134P、F135V、T147A、I152V、K158R、E172G、V182A、E184R)、hDHFR(V2A、I17V、N30D、E31G、Q36R、F59S、K69E、I72T、H88Y、F89L、N108D、K109E、V110A、I115V、Y122D、L132P、F135S、M140V、E144G、T147A、Y157C、V170A、K174R、N186S)、hDHFR(L100P、E102G、Q103R、P104S、E105G、N108D、V113A、W114R、Y122C、M126I、N127R、H128Y、L132P、F135P、I139T、F148S、F149L、I152V、D153A、D169G、V170A、I176A、K177R、V182A、K185R、N186S)和hDHFR(A10T、Q13R、N14S、N20D、P24S、N30S、M38T、T40A、K47R、N49S、K56R、I61T、K64R、K69R、I72A、R78G、E82G、F89L、D96G、N108D、M112V、W114R、Y122D、K123E、I139V、Q141R、D142G、F148L、E151G、E155G、Y157R、Q171R、Y183C、E184G、K185del、D187N)。


7.如权利要求6所述的组合物，其中所述刺激物选自由甲氧苄啶(TMP)和甲氨蝶呤(MTX)组成的组。


8.如权利要求2所述的组合物，其中所述免疫治疗剂为嵌合抗原受体(CAR)。


9.如权利要求8所述的组合物，其中所述嵌合抗原受体(CAR)包含：
(a)细胞外靶部分；
(b)跨膜结构域；
(c)细胞内信号传导结构域；和
(d)任选地，一个或多个共刺激结构域。


10.如权利要求9所述的组合物，其中所述CAR为标准CAR、分裂CAR、关闭开关CAR、打开开关CAR、第一代CAR、第二代CAR、第三代CAR或第四代CAR。


11.如权利要求9所述的组合物，其中所述细胞外靶部分识别癌细胞表面上的靶分子，其中所述癌细胞表面上的所述靶分子选自癌症抗原、质膜脂质、受体和膜结合的糖蛋白。


12.如权利要求9-11中任一项所述的组合物，其中所述细胞外靶部分选自以下中的任一者：
i.IgNAR，
ii.Fab片段，
iii.Fab'片段，
iv.F(ab)'2片段，
v.F(ab)'3片段，
vi.Fv，
vii.单链可变片段(scFv)，
viii.双-scFv、(scFv)2，
ix.微抗体，
x.双功能抗体，
xi.三功能抗体，
xii.四功能抗体，
xiii.内抗体，
xiv.二硫键稳定的Fv蛋白(dsFv)，
xv.单抗体，
xvi.纳米抗体，和
xvii.来源于特异性结合至感兴趣的蛋白、配体、受体、受体片段或肽适配体中任一者的抗体的抗原结合区。


13.如权利要求12所述的组合物，其中所述细胞外靶部分为来源于特异性结合CD19抗原的抗体的scFv。


14.如权利要求13所述的组合物，其中所述scFv为选自包含以下的片段的CD19scFv：
(a)具有独立地选自由SEQIDNO:49-80组成的组的氨基酸序列的重链可变区以及具有独立地选自由SEQIDNO:81-122中任一者组成的组的氨基酸序列的轻链可变区；或
...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·苏瑞，M·J·布里斯金，B·多林斯克，K·G·埃尔佩克，D·J·李，S·F·海勒，M·L·奥尔斯，D·孙，N·科米德，A·库尔卡尼，V·巴拉克里什南，T·埃塞尔，
申请(专利权)人：黑曜石疗法公司，
类型：发明
国别省市：美国;US