多肽FFDP及其在卵母细胞体外培养的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽FFDP及其在卵母细胞体外培养的应用，该多肽FFDP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验发现，该多肽FFDP可以应用在PCOS疾病影响卵母细胞发育中，特别是应用在PCOS卵母细胞体外成熟培养方面，或者应用在改善卵母细胞体外成熟培养时的减数分裂缺陷方面。方面。方面。

【技术实现步骤摘要】
多肽FFDP及其在卵母细胞体外培养的应用


[0001]本专利技术属于辅助生殖
，具体涉及一种生物活性多肽FFDP及其应用。

技术介绍

[0002]生育障碍问题愈发凸显，临床门诊发现求助于辅助生殖技术（assisted reproduction technology, ART）的患者数量急剧增加。尽管ART是不孕不育人群的福音，然而其总体成功率始终徘徊于40%；在多囊卵巢综合征、卵巢过度刺激综合征、卵巢次级低反应等患者中则更低。多囊卵巢综合征（PCOS）是以高雄激素血症、无排卵或稀发排卵、以及可能伴发的多囊样卵巢为基本特征的内分泌紊乱疾病，是临床上排卵障碍性不孕的主要原因。目前PCOS治疗首要进行生活方式改善，对有生育要求者则予以三线治疗流程即：不孕的一线治疗: 氯米芬促排卵，不孕的二线治疗: 外源的促性腺激素或者腹腔镜下卵巢手术，不孕的三线治疗: IVF，但在治疗过程中PCOS患者常会出现妊娠率较低、流产率较高的现象，随着医疗技术的飞速发展，IVF已成为育龄期PCOS患者解决生育问题的有效手段。然而，不可忽视的现实却是，在临床辅助生殖实践中， PCOS患者在接受IVF治疗时存在周期取消率高、卵巢刺激时间长、可获得的卵子数多但质量较低等问题，如何解决上述问题，提高PCOS患者临床妊娠率是当今辅助生育
的热点，更是难点。
[0003]临床治疗中，卵子和胚胎质量、胚胎着床率以及临床妊娠率一直都是生殖医学医师关注的焦点，其中卵子质量更是妊娠成功的起始指标。与正常卵巢来源的卵子相比，PCOS患者正常形态的卵子数明显减少，卵母细胞成熟度降低。Qiao等报道PCOS患者的获卵率下降, 卵母细胞发育潜能降低，卵子质量受损, 受精率和周期妊娠率下降。Sun报道多囊卵巢患者卵母细胞纺锤体排列异常，第一极体呈现碎片化或者异常状态。另有研究报道高雄激素血症的孕妇可以通过卵母细胞的表观遗传学改变影响子代的糖代谢水平。对于部分难治性PCOS患者，目前有未成熟卵母细胞体外成熟技术（IVM）可使用，但所培养卵母细胞的发育潜能较体内成熟的卵母细胞低，易出现非整倍体配子，致使流产率或后代发育缺陷增加，临床实际应用仍存在局限。PCOS卵母细胞质量下降以及排卵障碍的分子机制研究至今仍不完善。因此，切实提高PCOS患者卵子质量，增加PCOS患者妊娠率是临床IVF研究的巨大挑战。
[0004]近年来，卵母细胞生长成熟的微环境被视为可反映排卵前卵母细胞发育情况的生物学窗口，其中卵泡液由血浆渗出物和卵巢分泌物组成、富含细胞因子与代谢产物等，卵泡发生微环境的改变导致卵母细胞发育潜能下降。卵母细胞的发育潜能是在卵泡发育过程中逐步获得的，包括卵母细胞能够恢复并完成第一次减数分裂以及受精后能正常发育并产生健康子代。卵泡液在临床上相对容易获取，已有许多研究致力于分析卵泡液成分来评估卵母细胞质量。
[0005]文献报道卵泡液中的各类类固醇激素、垂体激素、细胞因子和生长因子均与卵母细胞生长发育、受精率和早期胚胎发育潜能相关。例如：PCOS患者卵泡液中表皮生长因子（EGF）的表达高于正常排卵者，推测EGF通过EGFR信号通路参与卵泡发育和卵母细胞减数分裂，从而影响PCOS患者卵母细胞的发育；卵母细胞来源的生长分化因子GDF9和骨形成蛋白
BMP15通过卵丘
‑
卵母细胞的双向信号对话参与PCOS患者卵泡发育障碍的病理过程。另外不得不提的是卵泡液中小分子多肽对于PCOS患者卵母细胞发育潜能的影响：在PCOS小鼠模型中，持续高表达的CNP/NPR2多肽参与调控高雄激素引起的卵母细胞成熟和排卵障碍。多肽作为蛋白合成、加工、降解的产物，间接反映了生物体蛋白质的代谢情况，在诸多疾病筛查、诊断、治疗中所起的作用不可小觑。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种生物活性多肽FFDP。
[0007]本专利技术的另一目的是提供一种该生物活性多肽FFDP的用途。
[0008]本专利技术的目的可以通过以下措施达到：一种生物活性多肽FFDP，其氨基酸序列为：Ala Leu Gly Ile Leu Gly Gly Leu Gly Thr Ala Ala，具体如SEQ ID NO. 1所示。
[0009]本专利技术以卵泡液多肽为切入点，筛选并研究出了能够改善PCOS模型小鼠卵母细胞质量及发育能力的多肽FFDP。实验发现，该多肽FFDP可以应用在PCOS疾病影响卵母细胞发育中，为改善PCOS患者临床妊娠结局提供新思路。
[0010]本专利技术的多肽FFDP可以应用在卵母细胞体外成熟培养方面，特别应用在PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养方面。
[0011]本专利技术的多肽FFDP可以应用在制备卵母细胞体外成熟培养试剂中，特别应用在制备PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养试剂中。
[0012]本专利技术的多肽FFDP可以应用在改善PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养时的减数分裂缺陷方面，特别是改善PCOS模型小鼠卵母细胞体外成熟培养时的减数分裂缺陷方面。
[0013]本专利技术的多肽FFDP可以应用在制备卵母细胞体外成熟培养过程中改善卵母细胞减数分裂缺陷的试剂中。
[0014]本专利技术提供了一种卵母细胞体外成熟培养试剂，特别是PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养试剂，它包含本专利技术的生物活性多肽FFDP。
[0015]本专利技术提供了一种在卵母细胞体外成熟培养过程中改善卵母细胞减数分裂缺陷的试剂，特别是PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养过程中改善卵母细胞减数分裂缺陷的试剂，它包含本专利技术的生物活性多肽FFDP。
[0016]在卵母细胞体外成熟培养试剂和改善卵母细胞减数分裂缺陷的试剂中，本专利技术的多肽FFDP的使用剂量或浓度可以根据实际需要进行适当的调整。
[0017]本专利技术提供了一种PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养的方法，即在卵母细胞体外成熟培养的过程中，使用本专利技术的多肽FFDP。一种更为具体的方法为：将本专利技术的多肽FFDP或者含有FFDP的培养试剂，与卵母细胞在体外共同进行成熟培养本专利技术提供了一种在PCOS疾病卵母细胞体外成熟培养过程中改善卵母细胞减数分裂缺陷的方法，特别是在PCOS模型卵母细胞体外成熟培养过程中改善卵母细胞减数分裂缺陷的方法，即在卵母细胞体外成熟培养的过程中，使用本专利技术的多肽FFDP。一种更为具体的方法为：在卵母细胞体外成熟培养的过程中，加入多肽FFDP或含有多肽FFDP的培养试剂进行共培养。
[0018]本专利技术的多肽FFDP，是一条在PCOS患者卵泡液中低表达的多肽，它是我们利用多
肽组学在PCOS患者与对照组卵泡液中筛选获得的差异性多肽 FFDP（ALGILGGLGTAA），目前尚无其相关功能报道。
[0019]通过生物信息学分析及实验结果显示：
①
多肽FFDP来源于RAGE蛋白，该区域同样存在于小鼠、大鼠等RAGE蛋白上，在哺乳动物中高度保守；
②ꢀ
protparam在线分析发现，FFDP肽分子量为1013.2Da，半衰期为4.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物活性多肽FFDP，其特征在于它的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。2.权利要求1所述的生物活性多肽FFDP在制备卵母细胞体外成熟培养试剂方面的应用。3.权利要求1所述的生物活性多肽FFDP在制备PCOS卵母细胞体外成熟培养过程中改善卵母细胞减数分裂缺陷的试剂方面的应用。4.一种卵母细胞体外成熟培养试剂，其特征在于它包含权利要求1所述的生物活性多肽FFDP。5.一种在卵母细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯晓静，凌钟慧，张萍萍，郭亚萍，季晨博，沈嵘，
申请(专利权)人：南京市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：