【技术实现步骤摘要】
一种包含重叠开放阅读框的基因的表达盒及其在昆虫细胞中的应用
[0001]本专利技术属于基因工程
,更具体地,涉及一种包含重叠开放阅读框的基因的表达盒及其在昆虫细胞中的应用。
技术介绍
[0002]目前已发现哺乳动物基因组中存在包含部分重叠或完全重叠的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)的基因,而重叠开放阅读框在病毒基因组中尤为常见,包含重叠开放阅读框的重叠基因的表达调控相比非重叠基因复杂很多,往往要借助内含子或多个启动子来进行调控。
[0003]腺相关病毒(adeno
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associated virus,AAV),也称腺伴随病毒,属于微小病毒科依赖病毒属,是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒,需要辅助病毒(通常为腺病毒)参与复制。重组腺相关病毒(rAAV)由于具有宿主范围广、免疫原性低、安全性高、可介导外源基因在动物体内长期稳定表达等特点,是目前基因治疗领域最具应用前景的载体之一。随着第一种重组腺相关病毒(rAAV)介导的基因治疗药物的批准,对大规模AAV载体制造技术的需求不断增加(Yla
‑
Herttuala S.,2012,Mol Ther,20:1831
‑
1832)。
[0004]腺相关病毒基因组中cap基因编码病毒VP衣壳蛋白,其包含3个重叠的开放阅读框,分别编码VP1、VP2、VP3三种类型的亚基来自野生型病毒的AAV中VP1、VP2和VP3的化学计量比约为1:1:10;rep基因编码Rep78、 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于在昆虫细胞中表达包含重叠开放阅读框的基因的表达盒,其特征在于,包含从5
’
至3
’
的、可操作连接的:能够在昆虫细胞中驱动转录的启动子;人工构建序列;仅缺少第一个翻译起始密码子的重叠开放阅读框;其中,所述人工构建序列包含在昆虫细胞中有剪接活性的天然的或经过人工改造的第一内含子和第二内含子,所述第一内含子和所述第二内含子共用5
’
部分或3
’
部分,所述人工构建序列中不含翻译起始密码子;在转录后加工过程中,通过所述第一内含子和所述第二内含子的选择性剪接作用,能够在所述人工构建序列中形成翻译起始密码子AUG,从而实现调控所述重叠开放阅读框中不同蛋白编码基因的翻译表达。2.根据权利要求1所述的表达盒,其特征在于:所述第一内含子或所述第二内含子位于ATG中的任意相邻两个核苷酸之间。3.根据权利要求2所述的表达盒,其特征在于,所述人工构建序列包含从5
’
至3
’
的、可操作连接的:所述第一内含子的5
’
部分、腺嘌呤核苷酸、所述第二内含子的5
’
部分、共用3
’
部分、胸腺嘧啶核苷酸和鸟嘌呤核苷酸;或者所述人工构建序列包含从5
’
至3
’
的、可操作连接的:所述第一内含子的5
’
部分、腺嘌呤核苷酸、胸腺嘧啶核苷酸、所述第二内含子的5
’
部分、共用3
’
部分和鸟嘌呤核苷酸。4.根据权利要求1所述的表达盒,其特征在于:所述第一内含子和所述第二内含子的5
’
端核苷酸均为GTNN,所述第一内含子和所述第二内含子的3
’
端核苷酸为NNAG,其中N为A、T、C、G四种核苷酸中的任意一种。5.根据权利要求1所述的表达盒,其特征在于:所述包含重叠开放阅读框的基因为AAV的cap基因或AAV的rep基因。6.根据权利要求1所述的表达盒,其特征在于:所述启动子为polh启动子或p10启动子。7.根据权利要求6所述的表达盒,其特征在于:所述包含重叠开放阅读框的基因为AAV的cap基因,所述启动子为p10启动子。8.根据权利要求6所述的表达盒,其特征在于:所述包含重叠开放阅读框的基因为AAV的rep基因,所述启动子为polh启动子...
【专利技术属性】
技术研发人员:ꢀ七四专利代理机构,
申请(专利权)人:武汉枢密脑科学技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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