用于生产重组AAV的组合物和方法技术

本文提供以高产率生产具有高效力的重组AAV衣壳的核酸构建体、宿主昆虫细胞及方法。宿主昆虫细胞及方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生产重组AAV的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求对2019年2月15日提交的美国临时申请62/806,317的优先权，其内容以全文引用的方式并入本文中。
[0003]序列表
[0004]本申请含有已以ASCII格式电子提交且以全文引用的方式并入本文中的序列表。2020年2月13日建立的所述ASCII副本名为025297_WO004_SL.txt且大小为47,056字节。
[0005]专利技术背景
[0006]腺相关病毒(AAV)是属于细小病毒科(Parvoviridae)和依赖性细小病毒(Dependoparvovirus)属的小型非包膜病毒。AAV由单链DNA基因组组成，该基因组包装至由三种衣壳蛋白(病毒蛋白(VP)1、VP2和VP3，大约1:1:10摩尔比)组装而成的衣壳中(Kondratov等人，Mol Ther.25(12):2661
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75(2017))。衣壳蛋白由单一衣壳(cap)基因编码并通过可变剪接和差异密码子使用来生成(同上)。VP1是最大的衣壳蛋白(81.6kD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.核酸构建体，其包含编码腺相关病毒(AAV)VP1、VP2和VP3蛋白的核苷酸序列，其中相对于野生型VP1和VP2蛋白，所述VP1蛋白和所述VP2蛋白包含两个或更多个在残基157、162、164、179、188、194、196、197、200和201(根据SEQ ID NO:1编号)处的突变。2.权利要求1的核酸构建体，其中所述VP1蛋白和所述VP2蛋白包含两个或更多个选自以下第一组的突变：S157A、T162S、Q164A、S179T、L188I、T194A、A196S、A197G、P200S和T201L。3.权利要求2的核酸构建体，其中所述VP1蛋白和所述VP2蛋白包含所述第一组中的所有突变。4.前述权利要求中任一项的核酸构建体，其中相对于野生型VP1蛋白，所述VP1蛋白进一步包含一个或多个在残基67、81、84、85和92(根据SEQ ID NO:1编号)处的突变。5.权利要求4的核酸构建体，其中所述VP1蛋白包含一个或多个选自以下第二组的突变：A67E、Q81R、K84D、A85S和R92K。6.权利要求5的核酸构建体，其中所述VP1蛋白包含所述第二组中的所有突变。7.前述权利要求中任一项的核酸构建体，其中除所述突变外，所述VP1蛋白和所述VP2蛋白分别与野生型AAV6的VP1蛋白和VP2蛋白相同。8.前述权利要求中任一项的核酸构建体，其中所述核苷酸序列还包含编码组装活化蛋白(AAP)的开放阅读框，其中相对于野生型AAP蛋白，所述AAP包含一个或多个在残基8、10、12、17、21和22(根据SEQ ID NO:10编号)处的突变。9.权利要求8的核酸构建体，其中所述AAP包含一个或多个选自以下第三组的AAP突变：P8Q、H10L、L12Q、Q17P、L21Q和L22V。10.权利要求9的核酸构建体，其中除所述AAP突变外，所述AAP与AAV6的野生型AAP相同。11.权利要求10的核酸构建体，其中所述VP1蛋白和所述VP2蛋白衍生自AAV6且相对于AAV6 VP1和VP2蛋白，包含突变S157A、T162S、Q164A、S179T、L188I、T194A、A196S、A197G、P200S和T201L。12.权利要求10的核酸构建体，其中所述构建体包含具有或不具有第一个氨基酸的SEQ ID NO:7的编码序列。13.核酸构建体，其包含编码腺相关病毒(AAV)VP1、VP2和VP3蛋白的核苷酸序列，其中相对于野生型VP1蛋白，所述VP1蛋白包含一个或多个在残基81、84、85和92(根据SEQ ID NO:1编号)处的突变。14.权利要求13的核酸构建体，其中所述VP1蛋白包含一个或多个选自下组的突变：Q81R、K84D、A85S和R92K。15.权利要求14的核酸构建体，其中所述VP1蛋白包含所述组中的所有突变。16.权利要求13至15中任一项的核酸构...

【专利技术属性】
技术研发人员：AJ康，RT苏罗斯基，AM沃德，
申请(专利权)人：桑格摩生物治疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：