人源抗新冠病毒中和性抗体D2及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人源抗新冠病毒中和性抗体D2及其应用。本发明专利技术利用噬菌体抗体库技术，成功获得一株特异性针对新型冠状病毒表面抗原的人源中和性抗体D2；且其在体外具有阻止新型冠状病毒感染敏感细胞的中和功能，在宿主中表达量高，对抗原亲和力高。利用上述方法获得的人源中和性抗新型冠状病毒表面抗原基因工程抗体可变区基因、Fab抗体基因以及上述每个抗体基因特征下的全抗体基因，可以在原核细胞、酵母细胞、真核细胞及任何重组系统中表达和生产此抗体或以此为基础的改建后的含有此抗体基因的任何其他基因，获得具有中和新型冠状病毒感染的抗体产物，制成临床上用于预防和治疗新型冠状病毒肺炎的特异性抗体药物。新型冠状病毒肺炎的特异性抗体药物。

【技术实现步骤摘要】
人源抗新冠病毒中和性抗体D2及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及人源抗新冠病毒中和性抗体D2及其应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒SARS
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CoV
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2属于β属冠状病毒，是一种单股正链RNA病毒，可导致人类病毒性肺炎或肺部感染。冠状病毒基因组依次编码棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白。其中刺突蛋白（Spike）是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，含有两个亚基S1和S2，其中S1主要包含受体结合区（RBD），负责识别细胞的受体。新冠病毒刺突蛋白与人血管紧张素转化酶2（ACE2）互作来感染人的呼吸道上皮细胞。由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型（SARS
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2）感染引起的新型冠状病毒肺炎，对人类健康构成了严重威胁，同时新冠病毒基因不断突变，新的变异株不断出现（如Dalta、Omicron）。迄今为止，可以发现以下特点：1）新冠病毒感染和其他呼吸道病毒感染一样，是反复感染的；存在大量的无症状感染者；2）突变株的不断出现，SARS
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2刺突蛋白（S）上的突变可对SARS
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2的感染性、致病性产生较大影响，尤其是德尔塔毒株。3）尽管多种疫苗已上市，但仍应该研究更多的应对策略以期扼制SARS
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CoV
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2传播。全球多个研究团队及药物研发企业广泛合作开展多方面的针对新冠预防和治疗药物研发。<br/>
技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供人源抗新冠病毒中和性抗体D2及其应用。
[0004]为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供人源抗新冠病毒中和性抗体D2，其轻链及重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如下：抗体D2的轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。
[0005]第二方面，本专利技术提供编码抗体D2的核酸分子。其中，编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3和4所示。
[0006]第三方面，本专利技术提供含有上述核酸分子的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组DNA、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、工程菌或转基因细胞系。
[0007]第四方面，本专利技术提供抗体D2经改造得到的单链抗体或全抗体。
[0008]第五方面，本专利技术提供用于预防或治疗由新冠病毒感染以及由其感染所致相关疾病的药物，其有效成分为抗体D2或抗体D2经改造得到的单链抗体或全抗体。
[0009]第六方面，本专利技术提供一种新冠病毒检测试剂，其包含抗体D2或抗体D2经改造得到的单链抗体或全抗体。
[0010]第七方面，本专利技术提供抗体D2或抗体D2经改造得到的单链抗体或全抗的以下任一应用：1）用于制备预防或治疗由新冠病毒感染以及由其感染所致相关疾病的药物；2）用于制备新冠病毒检测试剂或试剂盒；3）用于预防或治疗由新冠病毒感染以及由其感染所致相关疾病；4）用于检测新冠病毒。
[0011]所述新冠病毒包括但不限于SARS
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2野生株、Delta变体、Beta变体、Alpha变体、Omicron变体。
[0012]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：本专利技术利用噬菌体抗体库技术，成功获得一株特异性针对新型冠状病毒表面抗原的人源中和性抗体D2；且其在体外具有阻止新型冠状病毒感染敏感细胞的中和功能，在宿主中表达量高，对抗原亲和力高。利用上述方法获得的人源中和性抗新型冠状病毒表面抗原基因工程抗体可变区基因、Fab抗体基因以及上述每个抗体基因特征下的全抗体基因，可以在原核细胞、酵母细胞、真核细胞及任何重组系统中表达和生产此抗体或以此为基础的改建后的含有此抗体基因的任何其他基因，获得具有中和新型冠状病毒感染的抗体产物，制成临床上用于预防和治疗新型冠状病毒肺炎的特异性抗体药物。
附图说明
[0013]图1为本专利技术较佳实施例中18株单克隆细菌裂解液中Fab抗体结合活性。
[0014]图2为本专利技术较佳实施例中人源中和性抗体D2的SDS
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PAGE纯化胶图。
[0015]图3为本专利技术较佳实施例中抗体D2与变异株抗原结合活性验证。
具体实施方式
[0016]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册（Sambrook J &amp; Russell DW，Molecular Cloning: a Laboratory Manual，2001），或按照制造厂商说明书建议的条件。
[0017]实施例1 人源抗新冠病毒中和性抗体D2的制备及功能一、材料1. 样本、载体：新冠病毒抗体阳性血清及淋巴细胞：由武汉市疾病预防控制中心、山东省疾病预防控制中心提供。菌株为XLI
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Blue（美国Stratagene），载体为pComb3H(40kb)，由美国Scripps研究所惠赠。
[0018]2. 抗原：新型冠状病毒野生株S1蛋白和RBD蛋白，新型冠状病毒Delta变体S1蛋白和RBD蛋白，Beta变体S1蛋白，Alpha变体S1蛋白由东抗生物有限公司提供，新型冠状病毒Omicron变体S1蛋白和RBD蛋白由北京义翘神州科技股份有限公司惠赠。
[0019]二、方法1. 人源抗新冠病毒表面抗原抗体库的构建与筛选1.1 噬菌体抗体库的构建
用淋巴细胞分离液（美国Sigma）从具有高滴度乙肝病毒抗体的疫苗注射者的抗凝血液中分离淋巴细胞，用RNeasy Mini Kit (德国QIAGEN) 提取总细胞RNA，用Oligo
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dT引物将提取的RNA采用Invitrogen公司的第一链合成试剂盒(SuperScriptTM
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First
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Strand Synthesis System for RT
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PCR. Cat No.18080
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051)逆转录成cDNA，用一组扩增人源抗体IgG1重链Fd及轻链Kappa（κ链）和Lambda（λ链）引物，对人源轻链和重链Fab基因进行PCR扩增。PCR条件为： 94℃ 1min，52℃ 1 min，72℃ 1 min，35个循环。建库方法基本按文献进行（Barbas, C. FⅢ., Kang, A. S., and larner, R. A. Assembly of combinatorial antibody libraries on phage surface: the gene
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site. Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1991;88(18): 7978
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7982）。
[0020]1.2 噬菌体抗体库的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人源抗新冠病毒中和性抗体D2，其特征在于，其轻链及重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如下：轻链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为TSNIGDNF、DDA和STWDNSLNVVL；重链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别为GFTFEDYA、IDWNSGVI和AKDVYSESGSGSYYDY。2.根据权利要求1所述的中和性抗体，其特征在于，其轻链和重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。3.编码权利要求1或2所述中和性抗体的核酸分子。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于，编码轻链可变区和重链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:3和4所示。5.含有权利要求3或4所述核酸分子的生物材料，所述生物材料为表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体、...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁米芳，孙丽娜，殷强玲，李德新，王世文，芜为，李川，李建东，李阿茜，黄晓霞，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，
类型：发明
国别省市：