一种靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体。本发明专利技术还公开了抗甲型流感病毒的抗体的编码核酸、载体、宿主细胞。另外，本发明专利技术还公开了用于检测甲型流感病毒的免疫缀合物以及检测试剂盒。本发明专利技术的抗体能够识别H5N1以及H1N1 N1亚型的NA抗原，且具有抑制H5N1假病毒释放从而限制细胞间传播的作用。H5N1假病毒释放从而限制细胞间传播的作用。H5N1假病毒释放从而限制细胞间传播的作用。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体


[0001]本专利技术属于细胞免疫学、基因工程领域，涉及一种靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体。

技术介绍

[0002]流感是由呼吸道感染的流感病毒引起的疾病，常常在冬季发生。已知流感具有非常高的传染性，会影响所有年龄组的人、尤其是老年人。流感病毒是负链且被包膜的RNA(核糖核酸) 病毒，属于正黏液病毒(Orthomyxoviridae)科。流感病毒具有单链RNA的8 个节段，且被分类为甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)。甲型流感病毒根据它们主要的表面蛋白血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)进一步分成多种亚型。迄今为止，已鉴定出16种HA和9种NA(Cheung TK和Poon LL 2007，AnnNY Acad Sci.1102：1
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25)。流感病毒根据它们的类型而具有广泛的感染范围(包括 鸟、猪和人)，且流感病毒具有由分段的RNA组成的基因组。因为这一原因， 流感病毒可持续地突变和重组，从而产生新的遗传变异体。因为这一原因，难以获得抗流感病毒的长期免疫。当前使用的最有效的预防方法是抗每次预期要流行的特定流感病毒的疫苗。
[0003]通常使用蛋生产流感疫苗，但这是需要很长时间的低效率的方法。因此， 该方法具有难以每年在有限的时间范围内生产足够量的疫苗的问题。为了解决这一问题，在多家制药公司(GSK、Baxter等)中正积极进行对通过细胞培养生产疫苗的方法的研究。此外，当出现大范围流行的传染时，很难迅速开发出抗该大范围流行的流感病毒的疫苗。另外由于与具有抗性的突变病毒的出现相关的问题，抗病毒药物并不是完全可靠的。
[0004]为了解决这一问题，最近已积极开发了抗流感病毒的抗体以用于治疗目的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的一个特征是提供一种抗甲型流感病毒的抗体或其抗原结合部分。
[0006]本专利技术的另一个特征是提供包含能够预防或治疗甲型流感病毒感染的抗体或其抗原结合部分的药物。
[0007]本专利技术的另外的特征和优点部分将在以下说明中阐明，并且部分从该说明可显而易见，或者可以通过实施本专利技术而认识到。根据说明书和所附的权利要求书中特别指出的要素和组合，本专利技术的目的和其它优点将被实现和获得。
[0008]本专利技术的解决方案本专利技术提供了一种抗甲型流感病毒的抗体或其抗原结合部分，其包含：SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3中的至少一个。
[0009]优选地，所述抗体或其抗原结合部分包含：SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所
示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3。
[0010]进一步，所述重链可变区还包括重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；轻链可变区还包括轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中，重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9、10、11、12所示；轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.13、14、15、16所示。
[0011]本专利技术的抗体或其抗原结合部分，其包含：1）重链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；2）轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0012]自然产生的抗体结构单元通常包含四聚体。每个这样的四聚体都可由两对相同的多肽链组成，每对多肽链具有一条全长“轻”链( 如：约25000 道尔顿分子量(25kDa)) 和一条全长“重”链( 如：约50000～70000 道尔顿分子量(50～ 70kDa))。每条链的氨基末端部分通常包含大约100～110个或更多氨基酸的可变区，其通常负责抗原识别。每条链的羧基末端部分通常限定可能负责效应子功能的恒定区。人轻链通常被归类为K 和λ轻链。
[0013]重链通常被归类为μ，δ，γ，α 或ε，并分别限定抗体的同种型为IgM、IgD、IgG、IgA 和IgE。IgG 有几个亚类，包括但不限于：IgG1、IgG2、IgG3 和IgG4。IgM 有亚类，包括但不限于：IgM1 和IgM2。相似地，IgA 细分为亚类，包括但不限于：IgA1 和IgA2。在轻链和重链内，可变区和恒定区可通过约12 个或更多氨基酸的“J”区连接，且重链还包括约10个或更多氨基酸的“D”区。参见，例如Fundamental Immunology Ch.7(Paul,W.,ed.,2nd ed.Raven Press,N.Y.(1989))(为所有的目的通过援引将其全部内容并入)。每条轻链/ 重链对的可变区通常形成抗原结合位点。
[0014]可变区通常显示相同的基本结构，由三个超变区( 也称为互补决定区或CDR) 连接相对保守的框架区(FR)。通常，来自每一对的两条链的CDRs 由框架区对齐，其能结合特异性表位。从氨基端到羧基端，轻链和重链的可变区通常都包含FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3 和FR4 结构域。通常根据Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987and1991)) ；或Chothia&Lesk J.MoI.Biol.196:901
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917(1987) ；Chothia 等,Nature342:878
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883(1989)中的限定将氨基酸分配到每个结构域。
[0015]抗原结合部分的例子包括：Fab、Fab1、F(ab')2 和Fv 片段；双价抗体；线性抗体(Zapata 等,Protein Eng.8(10):1057
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1062[1995]) ；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合部分，称为“Fab”片段，每个片段都有一个单个抗原结合位点，和一个残余“Fc”片段，其名称反映了其易于结晶的性能。胃蛋白酶处理产生F(ab')2 片段，它具有两个抗原结合位点且还能够交联抗原。“Fv”是含有完整的抗原识别和结合位点的抗体片段。该区包括紧密、非共价结合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体。单个可变结构域( 或仅包含对抗原特异性的三个CDRs 的Fv 的一半) 能够识别和结合抗原。“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH 和VL 结构域，其中，这本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向甲型流感病毒N1亚型NA蛋白的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，其包含：SEQ ID NO.1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO.2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO.3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO.5所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO.6所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO.7所示的轻链可变区CDR3。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述重链可变区还包括重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4；轻链可变区还包括轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中，重链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.9、10、11、12所示；轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.13、14、15、16所示。3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗体或其抗原结合部分包含：1）重链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；2）轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。4.根据权利要求1
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3任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1
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3中任一项所述的抗体或其抗原结合部分的核酸序列。6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述编码重链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.17所示；编码轻链可变区的核酸序列如SEQ ID NO.18所示。7.一种表达载体，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖鹤，冯健男，沈倍奋，陈楠，陈国江，王晶，乔春霞，李新颖，刘成华，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：