一种用于现场检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的CRISPR核酸检测试剂盒、方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种用于现场检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的CRISPR核酸检测试剂盒、方法和应用，其采用用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的CRISPR核酸检测试纸，CRISPR核酸检测试纸是基于消线法的侧向流试纸，利用CRIPSR‑Cas13a系统对金黄色葡萄球菌pvl毒力基因进行检测；CRISPR‑Cas13a系统包括crRNA，或其与Cas13a蛋白形成的复合体；crRNA包括用于与Cas13a蛋白结合的锚定序列和靶向金黄色葡萄球菌pvl毒力基因靶点序列的向导序列；金黄色葡萄球菌pvl毒力基因靶点序列位于金黄色葡萄球菌pvl毒力基因组第1659‑1686位；试纸包括应用于金黄色葡萄球菌pvl毒力基因核酸的消线法试纸。本发明专利技术的CRISPR核酸检测试纸可通过CRISPR‑Cas13a系统实现对金黄色葡萄球菌pvl毒力基因核酸的高灵敏、高特异、便捷检测，灵敏度达到1copies/μL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子诊断，具体涉及一种用于现场检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的crispr核酸检测试剂盒、方法和应用。

技术介绍

1、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,s.aureus)是导致医院获得性和社区获得性感染的主要病原体。在其毒力因子库中，杀白细胞素(panton-valentineleucocidin，pvl)这种毒素与严重皮肤感染、化脓性软组织感染、坏死性筋膜炎和坏死性肺炎等严重疾病密切相关。感染pvl阳性金黄色葡萄球菌的患者通常表现出更严重的症状，并面临更严重的预后,感染的死亡风险要高得多。目前，金葡菌毒力因子的检测主要是通过检测已知毒力基因和测定毒素活性两方面来进行，主要方法有：(1)免疫学方法：利用抗原抗体反应来检测毒力因子，血清学检测方法如双凝胶免疫扩散法、微载玻片法、胶乳颗粒凝集法等，这些方法局限性在于只得到半定量的结果，并且结果具有主观性。(2)分子学方法：利用聚合酶链反应pcr法(金标准)鉴定其毒力基因。此种方法的局限性在于需要专业的检测人员和专用设备，且灵敏度较低。此外还有酶联免疫吸附试验(elisa本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，包括用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的CRISPR-Cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；

2.根据权利要求1所述的用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，其特征在于：所述crRNA的核苷酸序列为序列2。

3.根据权利要求1或2所述的用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，其特征在于：所述RAA扩增引物由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成。

4.根据权利要求1-3中任一所述的用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，其特征在于：所述CRISPR-Ca...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，包括用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的crispr-cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；

2.根据权利要求1所述的用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，其特征在于：所述crrna的核苷酸序列为序列2。

3.根据权利要求1或2所述的用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，其特征在于：所述raa扩增引物由序列4所示的单链dna分子和序列5所示的单链dna分子组成。

4.根据权利要求1-3中任一所述的用于检测金黄色葡萄球菌pvl毒力基因的试剂盒，其特征在于：所述crispr-cas13a系统还包括a4)rna聚合酶。

【专利技术属性】
技术研发人员：王菁，靳力，韩尧，孙岩松，李浩，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：