结核分枝杆菌Rv0934抗原蛋白、其抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗原肽技术领域，具体涉及结核分枝杆菌Rv0934抗原蛋白、其抗原表位肽及其应用。本发明专利技术提供结核分枝杆菌Rv0934蛋白或其编码基因在制备用于预防或治疗结核分枝杆菌感染引起疾病的药物中的应用。本发明专利技术还提供一种结核分枝杆菌抗原表位肽，其包含第一抗原表位肽和第二抗原表位肽；第一抗原表位肽具有结核分枝杆菌Rv0934蛋白的第57

【技术实现步骤摘要】
结核分枝杆菌Rv0934抗原蛋白、其抗原表位肽及其应用


[0001]本专利技术涉及抗原肽
，具体涉及结核分枝杆菌Rv0934抗原蛋白、其抗原表位肽及其应用。

技术介绍

[0002]结核病（Tuberculosis, TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，M.tb）引起的一种人兽共患传染性疾病，随着耐药结核病以及HIV
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TB合并感染的出现，结核病的防治面临更大的挑战。
[0003]控制和预防传染病最有效的方法即接种疫苗。目前应用于人预防结核病的疫苗只有卡介苗（Bacillus Calmette Gu
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rin，BCG），它对于预防儿童严重性结核（例如结核性脑膜炎和粟粒性结核）有效，但对于青少年以及成年人结核几乎没有效果，而目前成人结核病占结核病总数的绝大部分。由于卡介苗为减毒活疫苗，因此对于免疫力低或者免疫系统不健全的人具有一定的危险性。此外，有研究证实由于BCG的接种，降低了结核菌素作为诊断试剂的敏感性，对目前临床诊断结核病造成一定的影响（Anon，1999，India journal of medical research 110, 14）。因此，研究一种安全且有效的结核病疫苗非常迫切。当前结核病新型疫苗的研究主要分为以下几种：1）活菌疫苗，主要包括重组BCG和结核分枝杆菌减毒活疫苗；2）亚单位疫苗，主要包括病毒载体疫苗、蛋白疫苗以及DNA疫苗等；3）灭活疫苗等。对于重组BCG以及亚单位疫苗的研发，最重要的即开发有效的结核分支杆菌抗原。目前，已经有Ag85B、Esat
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6、HspX等抗原被证实具有较强的免疫原性，可用于结核病疫苗的研究。然而，虽然有多种结核分枝杆菌的抗原用于结核新型疫苗的研究，但是亚单位疫苗的保护效果仍有待提高，因此，仍需要开发有效的结核分支杆菌抗原。
[0004]结核分枝杆菌通过呼吸道进入宿主后，寄生于肺泡巨噬细胞，属于胞内寄生菌，因此细胞免疫应答对于清除结核分枝杆菌具有重要作用（Lindestam Arlehamn C.S et al., 2014, Cold Spring Harb Perspect Med 4(7), a018465）。另外，Slight等发现增殖的抗原特异性B细胞定殖于保护性肉芽肿内，这些肉芽肿是高度特殊化的空间结构，可以控制Mtb的进一步感染（Slight et al., 2013, Journal of Clinical Investigation 123(2), 712
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726）。除此之外，最近的研究证实，来自潜伏感染者的抗体能促进噬菌体的成熟、炎症小体激活以及细胞内Mtb的巨噬细胞杀伤作用，这些研究证实体液免疫对于机体抗结核分枝杆菌也具有一定的作用( Lu et al., 2016, Cell 167(2), 433
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443)。
[0005]Rv0934是结核分枝杆菌无机磷酸盐摄取系统的磷酸盐结合亚基，分子量大小为38KDa，属于ABC （ATP结合盒）转运蛋白家族（Andersen AB et al.,1989, Infection and Immunity 57(8), 2481
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2488），基因全长1125bp，编码374个氨基酸。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的之一是提供结核分枝杆菌Rv0934抗原蛋白及其应用。本专利技术的另一目的是提供结核分枝杆菌Rv0934抗原蛋白的T细胞表位肽及其应用。
[0007]本专利技术在对结核分枝杆菌的潜在有效抗原蛋白的研究过程中发现，结核分枝杆菌Rv0934蛋白具有较高的免疫原性，能够刺激机体产生较强的Th
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1类免疫反应和体液免疫应答。通过对Rv0934蛋白结构和序列的进一步分析和验证发现，Rv0934蛋白的氨基酸序列的57
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135位和268
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373位两个区域为T细胞表位集中区，将其串联形成融合表位肽后，具有较Rv0934抗原蛋白更强的免疫原性，可以作为潜在的疫苗抗原。
[0008]具体地，本专利技术提供以下技术方案：第一方面，本专利技术提供结核分枝杆菌Rv0934蛋白或其编码基因在制备用于预防或治疗结核分枝杆菌感染或结核分枝杆菌感染引起疾病的药物或用于诊断结核分枝杆菌感染或结核分枝杆菌感染引起疾病的试剂中的应用。
[0009]以上所述的应用中，所述药物包括疫苗、抗体或抗血清。
[0010]其中，所述疫苗包括亚单位疫苗、重组BCG疫苗。所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体、人源化抗体、嵌合抗体、双特异抗体或多特异抗体。
[0011]以上所述的结核分枝杆菌感染引起疾病包括结核病。
[0012]以上所述的结核分枝杆菌的Rv0934蛋白及其编码基因的序列可通过公开的数据库或通过测序获得。对于结核分枝杆菌H37Rv， Rv0934基因（又名PstS1基因）的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其编码的Rv0934蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。不同结核分枝杆菌菌株的Rv0934蛋白或其编码基因可能存在少量序列差异，因此，上述如SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的、来源于结核分枝杆菌的蛋白，以及这些蛋白的编码基因也在本专利技术的保护范围内。
[0013]第二方面，本专利技术提供一种结核分枝杆菌抗原表位肽，其包含第一抗原表位肽和/或第二抗原表位肽；所述第一抗原表位肽具有结核分枝杆菌Rv0934蛋白的第57
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135位氨基酸序列；所述第二抗原表位肽具有结核分枝杆菌Rv0934蛋白的第268
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373位氨基酸序列。
[0014]以上所述的结核分枝杆菌抗原表位肽优选包含所述第一抗原表位肽和所述第二抗原表位肽；其中，第一抗原表位肽和第二抗原表位肽直接顺次相连或通过连接肽相连。
[0015]以上所述的直接顺次相连为不通过连接肽将第一抗原表位肽和第二抗原表位肽连接。
[0016]以上所述的连接肽可由柔性氨基酸（甘氨酸或丝氨酸）组成。
[0017]优选地，第一抗原表位肽和第二抗原表位肽按照N端至C端的方向直接顺次相连。
[0018]作为本专利技术的优选方案，所述抗原表位肽具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。
[0019]以上所述的结核分枝杆菌抗原表位肽具有较强的免疫原性，能够刺激机体产生较强的Th
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1类免疫反应以及很好的体液免疫应答。
[0020]第三方面，本专利技术提供一种核酸分子，其编码以上所述的结核分枝杆菌抗原表位肽。
[0021]上述核酸分子的核苷酸序列可根据以上所述的结核分枝杆菌抗原表位肽的氨基酸序列确定，基于密码子的兼并性，该核酸分子的核苷酸序列可以有多种，所有能够编码产生以上所述的结核分枝杆菌抗原表位肽的核酸分子均在本专利技术的保护范围内。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.结核分枝杆菌Rv0934蛋白或其编码基因在制备用于预防或治疗结核分枝杆菌感染或结核分枝杆菌感染引起疾病的药物或用于诊断结核分枝杆菌感染或结核分枝杆菌感染引起疾病的试剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括疫苗、抗体或抗血清。3.一种结核分枝杆菌抗原表位肽，其特征在于，其包含第一抗原表位肽和/或第二抗原表位肽；所述第一抗原表位肽具有结核分枝杆菌Rv0934蛋白的第57
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135位氨基酸序列；所述第二抗原表位肽具有结核分枝杆菌Rv0934蛋白的第268
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373位氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的结核分枝杆菌抗原表位肽，其特征在于，所述结核分枝杆菌抗原表位肽包含所述第一抗原表位肽和所述第二抗原表位肽；所述第一抗原表位肽和所述第二抗原表位肽直接顺次相连或通过连接肽相连。5.根据权利要求3所述的结核分枝杆菌抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽具有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。6.一种核酸分子，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：万康林，刘海灿，范雪亭，李马超，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：