包含糖基化AG85A蛋白的用于预防结核病的疫苗组合物及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种包含糖基化Ag85A蛋白的用于预防结核病的疫苗组合物、用于制备该蛋白质的载体、使用该载体的转化子以及通过使用该转化子生产糖基化Ag85A蛋白的方法。包含本发明专利技术的糖基化Ag85A蛋白的疫苗组合物具有诱导多功能T细胞增加的作用，该多功能T细胞同时分泌在抗结核病的保护作用方面很重要的IFN

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含糖基化AG85A蛋白的用于预防结核病的疫苗组合物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种包含糖基化Ag85A蛋白的用于预防结核病的疫苗组合物、用于制备该蛋白质的载体、使用该载体的转化子以及通过使用该转化子生产糖基化Ag85A蛋白的方法。
[0002]本申请要求于2019年1月28日向韩国知识产权局提交的韩国专利申请号10
‑
2019
‑
0010431的优先权和权益，并且该申请的说明书和附图中公开的所有内容均并入本申请中。

技术介绍

[0003]结核病是世界卫生组织(WHO)管理的三大传染病之一，由微生物学家罗伯特
·
科赫(Robert Koch)于1882年发现，是一种由结核分枝杆菌引起的致命疾病，发病率和死亡率都很高。全世界约有6000万患者感染了活动性结核，估计每年约有5000万至1亿新感染结核病，每年至少有900万新发结核病病例，已知每年有150万人死于结核病。结核病发病率为每10万人中146人发病，结核病死亡率为每10万人中49人死亡，是单一传染病中最常见的死因，表明结核病仍然是世界范围内严重的健康问题。
[0004]同时，关于制备预防如上所述的结核病的疫苗，医疗行业对动物蛋白质的大规模生产的需求是开发用于生产各种复杂蛋白质或肽的混合表达系统。宿主生物包括从细菌到真核生物(例如酵母、昆虫、哺乳动物和植物细胞)的所有生物。然而，细菌可以产生相对大量的蛋白质，但在很多情况下会形成不溶性包涵体，并且在翻译后修饰过程中存在局限性。相比之下，真核细胞表达系统也可能由于不同的翻译后过程而产生与最初预期的蛋白质不同的蛋白质，但该系统可以会将糖与蛋白质结合，并可以进行翻译后过程。植物生产系统目前在商业上用于合成外源蛋白质，植物细胞的翻译后修饰与在动物细胞中进行的非常相似，可以准确地生产多亚基蛋白质。对于植物来源的动物蛋白质，氨基酸残基以与原始蛋白质相同的方式糖基化。然而，尽管植物细胞分泌途径中的N
‑
连接糖基化过程显示出比动物表达系统中产生的糖基化形式更多样，但在许多情况下仍保持糖蛋白活性。
[0005]对于目前尝试使用植物开发的疫苗，在致病性疾病的情况下，执行细菌和病毒粘膜感染所必需的粘附功能的蛋白质、显示细菌毒性的毒素蛋白质以及构成病毒结构的蛋白质通常用作抗原，在非致病性疾病的情况下，产生引起疾病的物质和成因物质的主要酶用作抗原。根据迄今为止进行的研究结果，由于有报道称植物来源的重组抗原蛋白具有与动物来源的疫苗相同的功能，因此需要对该重组抗原蛋白进行各种深入的研究。

技术实现思路

[0006]技术问题
[0007]作为通过用糖基化Ag85A抗原蛋白和非糖基化Ag85A抗原蛋白对小鼠进行免疫的免疫反应、对抗结核病的保护功效等进行的实验的结果，本专利技术人实验证实了在植物细胞中表达并被糖基化Ag85A，比非糖基化Ag85A具有更好的抗结核病的保护作用，从而完成了
本专利技术。
[0008]因此，本专利技术的一个目的是提供一种用于预防结核病的疫苗组合物，其包含糖基化Ag85A蛋白，该蛋白包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。
[0009]然而，本专利技术要解决的技术问题不限于上述问题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解未提及的其他问题。
[0010]技术方案
[0011]为实现上述本专利技术的目的，本专利技术提供了一种用于预防结核病的疫苗组合物，其包含糖基化Ag85A蛋白，该蛋白包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。
[0012]作为本专利技术的一个示例性实施方式，糖基化Ag85A蛋白可以诱导对被结核分枝杆菌感染的肺组织的损伤的抑制。
[0013]作为本专利技术的另一个示例性实施方式，糖基化Ag85A蛋白可以诱导肺中结核分枝杆菌数量的减少。
[0014]作为本专利技术的另一个示例性实施方式，糖基化Ag85A蛋白可以诱导CD4
+
CD44
+
T细胞的增加，该CD4
+
CD44
+
T细胞同时分泌两种或更多种选自由IFN
‑
γ(干扰素
‑
γ)、TNF
‑
α(肿瘤坏死因子
‑
α)和IL
‑
2(白介素
‑
2)组成的组中的细胞因子。
[0015]作为本专利技术的又一个示例性实施方式，糖基化Ag85A蛋白可以诱导CD8
+
CD44
+
T细胞增加，该CD8
+
CD44
+
T细胞同时分泌两种或更多种选自由IFN
‑
γ(干扰素
‑
γ)、TNF
‑
α(肿瘤坏死因子
‑
α)和IL
‑
2(白介素
‑
2)组成的组中的细胞因子。
[0016]进一步地，本专利技术提供了一种用于表达预防结核病疫苗的载体，包括：编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的糖基化Ag85A蛋白的基因；以及编码纤维素结合模块3(以下简称CBM3)的基因，其包含SEQ ID NO:2的碱基序列。
[0017]此外，本专利技术提供了一种用于表达预防结核病疫苗的载体，包括：编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的糖基化Ag85A蛋白的基因；编码纤维素结合模块3(CBM3)的基因，包含SEQ ID NO：2的碱基序列；和编码BiP信号肽的基因，其包含SEQ ID NO:3的碱基序列。
[0018]此外，本专利技术提供了一种用于表达预防结核病疫苗的载体，包括：编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的糖基化Ag85A蛋白的基因；编码纤维素结合模块3(CBM3)的基因，其包含SEQ ID NO：2的碱基序列；以及编码HDEL肽的基因，其包含SEQ ID NO:4的碱基序列。
[0019]作为本专利技术的一个示例性实施方式，载体还可以包括被肠激酶识别和切割的序列，其包含SEQ ID NO：5的碱基序列。
[0020]作为本专利技术的另一个示例性实施方式，载体还可以包括编码连接肽的基因，其包含SEQ ID:6的碱基序列。
[0021]此外，本专利技术提供了一种用于制备预防结核病疫苗的转化子，该转化子用载体转化。
[0022]作为本专利技术的示例性实施方式，转化子可以是植物。
[0023]作为本专利技术的另一个示例性实施方式，植物可以是一种或多种选自由拟南芥、大豆、烟草、茄子、辣椒、马铃薯、番茄、大白菜、萝卜、卷心菜、生菜、桃、梨、草莓、西瓜、韩国香瓜、黄瓜、胡萝卜和芹菜组成的组中的双子叶植物；或一种或多种选自由水稻、大麦、小麦、黑麦、玉米、甘蔗、燕麦和洋葱组成的组中的单子叶植物。
[0024]此外，本专利技术提供了一种生产用于预防结核病的疫苗组合物的方法，该方法包括：
(a)培养转化子；和
[0025](b)从转化子或培养液中分离和纯化糖基化Ag85A蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1. 一种用于预防结核病的疫苗组合物，其包含含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的糖基化Ag85A蛋白。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中糖基化Ag85A蛋白诱导对结核分枝杆菌感染的肺组织的损伤的抑制。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中糖基化Ag85A蛋白诱导肺中结核分枝杆菌数量的减少。4. 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中糖基化Ag85A蛋白诱导CD4
+
CD44
+
T细胞的增加，所述CD4
+
CD44
+
T细胞同时分泌两种或更多种选自由IFN
‑
γ(干扰素
‑
γ)、TNF
‑
α(肿瘤坏死因子
‑ꢀ
α) 和 IL
‑
2（白介素
‑
2）组成的组中的细胞因子。5. 根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中糖基化Ag85A蛋白诱导CD8
+
CD44
+
T细胞的增加，所述CD8
+
CD44
+
T细胞同时分泌两种或更多种选自由IFN
‑
γ(干扰素
‑
γ)、TNF
‑
α(肿瘤坏死因子
‑ꢀ
α) 和 IL
‑
2（白介素
‑
2）组成的组中的细胞因子。6. 一种用于表达预防结核病疫苗的载体，包括：编码包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的糖基化Ag85A蛋白的基因；和编码纤维素结合模块3(CBM3)的基因，其包含SEQ ID NO：2的碱基序列。7. 一种用于表达预防结核病疫苗的载体，包括： 编码包含SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇直，孙恩珠，慎城宰，金洪敏，赵宽九，吴明烈，
申请(专利权)人：延世大学校产学协力团丘拉提斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：