【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫疗法领域，具体涉及新型冠状病毒奥密克戎系列变异株ii-key t细胞多肽及其应用。
技术介绍
1、由冠状病毒sars-cov-2引起的新型冠状病毒感染(coronavirus disease 2019，covid-19)具有极高的传染性。covid-19疫苗(简称新型冠状病毒疫苗)主要依靠体液免疫，即产生中和抗体来防止病毒感染，但中和抗体通常仅维持3-6个月；此外，由于病毒不断变异，特别是刺突蛋白(spike，s蛋白)的氨基酸突变增加了病毒的传播速度和免疫逃逸能力，导致当前使用的新型冠状病毒疫苗难以阻止奥密克戎(omicron)系列变异株的感染和传播。研究显示，新型冠状病毒疫苗相关的细胞免疫在清除病毒和降低重症死亡中起到关键作用。细胞免疫可针对sars-cov-2的多种蛋白，且可以广泛覆盖各类sars-cov-2变异株，几乎不受病毒变异的影响，且其免疫的记忆持续时间很长，能够提供长期保护。因此，新一代疫苗的研发应该集中在加强细胞免疫反应的疫苗上，或者研发仅诱导t细胞免疫的疫苗，并与目前已有的其他疫苗联合使用。
2、多肽疫苗是解决上述问题的良好路径选择。由于t细胞识别依赖于抗原递呈细胞(antigen-presenting cell,apc)递呈的与主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility complex,mhc)结合的短肽，因此可以在sars-cov-2不同蛋白质保守区序列中筛选出这些具有良好功能的t细胞多肽制备疫苗，从而对抗病毒变异，同时提供长效的免疫保护。此外，还可以
3、多肽疫苗存在免疫原性弱、易降解等缺点。研究中通常将多肽与载体蛋白结合，或将筛选的表位嵌入其他病毒载体来增强其免疫原性，但安全性低，成本高。因此，可以通过选择合适的佐剂、免疫途径或化学修饰比如ii-key等来提高多肽的免疫原性。理想的新冠多肽疫苗应在保留合成多肽上述优势的同时具有良好的免疫原性，主要以产生抗变异和长效的t细胞免疫为主。
4、现有技术中victoria k.baxter等人在2022年2月公开在biorxiv预印本上的研究使用了16条化学合成的来自sars-cov-2序列的t、b细胞肽混合物同样搭配tlr类佐剂对小鼠进行一次加强免疫并进行了攻毒实验，但混合肽并未提供任何保护作用。其可能的原因一是攻毒选用的sars-cov-2毒株是小鼠适应株，t细胞应答对其不起作用；二是t细胞多肽是针对人类hla预测选择的，与balb/c小鼠的mhc分子结合力不好，三是b细胞多肽并没有产生任何保护性抗体，在没有中和抗体的情况下单独靠t细胞免疫无法提供有效保护。
5、专利cn202110927606公开了一系列筛选到的新冠病毒被人cd8+t细胞识别的表位多肽，包括在冠状病毒中的保守表位，它们能介导针对sars-cov-2的细胞免疫，有助于下一代疫苗的开发，以应对sars-cov-2突变造成的免疫逃逸。专利cn112028978a具体公开了一些新冠病毒特异性cd8+t细胞表位肽。该专利技术所提供的新冠病毒特异性cd8+t细胞表位肽能够产生强烈的细胞免疫应答，分泌高水平ifn-γ，对于新型冠状病毒感染的预防、临床治疗和疫苗的研发均具有重要的科学意义和应用前景。
6、但以上专利技术中的表位多肽仅能引发cd8+t细胞反应，也并未针对omicron变异株预测及设计t细胞表位。另外，基于“ii-key”能更好的激活细胞免疫应答，可应用于新型冠状病毒疫苗的研发中。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了本专利技术提供了一种ii-key t细胞多肽组合物，该ii-key t细胞多肽中的抗原肽包括seq id no.1-seq id no.6，抗原肽n端直接或进行氨基酸删减后通过氨基戊酸(ava)连接了ii-key，使多肽提呈cd4+细胞的应答效率增强；本专利技术的ii-key t细胞多肽中含有hla-ii类和hla-i类表位，可以同时激发cd4+、cd8+t细胞免疫应答，并且在新冠各类变异株种保守性良好，体现抗变异的作用。本专利技术的ii-key肽混合物在只加强一次免疫的情况下能够保护致死性小鼠模型完全存活。
2、一方面，本专利技术提供了一种ii-key t细胞多肽组合物，所述的ii-key t细胞多肽是指在抗原肽的n端连接了ii-key；所述的抗原肽包括seq id no.1-seq id no.6中的一个或多个氨基酸序列。
3、具体地，所述的ii-key t细胞多肽中含有hla-i类和hla-ii类表位。
4、具体地，所述的ii-key和抗原肽通过5-氨基戊酸连接。
5、具体地，所述的抗原肽的n端直接或进行氨基酸删减后连接ii-key。
6、进一步具体地，所述的抗原肽的n端删减1-5个氨基酸。
7、具体地，所述的ii-key的序列为seq id no.7。
8、另一方面，本专利技术提供了前述的ii-key t细胞多肽组合物在制备新冠病毒疫苗中的应用。
9、具体地，所述的疫苗还含有佐剂。
10、进一步具体地，所述的佐剂可以是铝盐、titermax、乳剂、脂质体、明矾、细胞因子中的一种或多种。
11、优选地，所述的佐剂为铝盐。
12、进一步优选地，所述的佐剂为磷酸铝和氢氧化铝。
13、又一方面，本专利技术提供了一种预防和/或治疗新冠病毒感染的疫苗，所述的疫苗包括前述的ii-key t细胞多肽组合物。
14、具体地，所述的新冠病毒为奥密克戎变异株。
15、进一步具体地，所述的变异株可以是阿尔法、贝塔、伽马、德尔塔或奥密克戎。
16、所述的奥密克戎可以是ba.1、ba.2、ba.5、bq.1、xbb.1、ch.1.1、bf.7或ba.5.2。
17、具体地，所述的疫苗还含有佐剂。
18、进一步具体地，所述的佐剂可以是铝盐、titermax、乳剂、脂质体、明矾、细胞因子。
19、优选地，所述的佐剂为铝盐。
20、进一步优选地，所述的佐剂为磷酸铝和氢氧化铝。
21、具体地，所述的疫苗中还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、佐剂、冻干稳定剂、润湿或乳化剂、ph缓冲剂、凝胶或增粘添加剂以及防腐剂。
22、所述的药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的例子包括但不限于脱矿水或蒸馏水、盐水溶液、植物油、硅油、挥发性有机硅、矿物油、低级聚烷二醇或低级烷基二醇、脂肪酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、卡拉胶、西黄胶、阿拉伯胶、凡士林。
23、进一步具体地，所述的植物油包括但不限于：花生油、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油或椰子油。
24、进一步具体地，所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种Ii-key T细胞多肽组合物，其特征在于，在抗原肽的N端连接了Ii-key；所述的抗原肽包括SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.6中的一个或多个氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的Ii-key T细胞多肽组合物，其特征在于，所述的Ii-key T细胞多肽中含有HLA-I类和HLA-II类表位。
3.根据权利要求1所述的Ii-key T细胞多肽组合物，其特征在于，所述的Ii-key和抗原肽通过5-氨基戊酸连接。
4.根据权利要求3所述的Ii-key T细胞多肽组合物，其特征在于，所述的抗原肽的N端直接或进行氨基酸删减后连接Ii-key。
5.根据权利要求4所述的Ii-key T细胞多肽组合物，其特征在于，所述的抗原肽的N端删减1-5个氨基酸。
6.权利要求1-5任一项所述的Ii-key T细胞多肽组合物在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的疫苗还含有佐剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的佐剂为铝盐、Titermax、乳
9.一种预防和/或治疗新型冠状病毒感染的疫苗，其特征在于，所述的疫苗中包括权利要求1-5任一项所述的Ii-key T细胞多肽组合物。
10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述的新型冠状病毒为奥密克戎变异株。
11.一种药物，其特征在于，所述的药物中包括权利要求1-5任一项所述的Ii-key T细胞多肽组合物。
12.根据权利要求11所述的药物，其特征在于，还包括药学上可以接受的辅料。
13.根据权利要求12所述的药物，其特征在于，所述的药学上可接受的辅料为甘露醇、蔗糖、氯化钠、氯化镁、聚山梨酯80、甘油和羟乙基哌嗪乙硫磺酸中的一种或多种。
14.根据权利要求11-13任一项所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为注射剂。
15.根据权利要求14所述的药物，其特征在于，所述注射剂为水针剂、油针剂或粉针剂中的一种。
...【技术特征摘要】
1.一种ii-key t细胞多肽组合物，其特征在于，在抗原肽的n端连接了ii-key；所述的抗原肽包括seq id no.1-seq id no.6中的一个或多个氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的ii-key t细胞多肽组合物，其特征在于，所述的ii-key t细胞多肽中含有hla-i类和hla-ii类表位。
3.根据权利要求1所述的ii-key t细胞多肽组合物，其特征在于，所述的ii-key和抗原肽通过5-氨基戊酸连接。
4.根据权利要求3所述的ii-key t细胞多肽组合物，其特征在于，所述的抗原肽的n端直接或进行氨基酸删减后连接ii-key。
5.根据权利要求4所述的ii-key t细胞多肽组合物，其特征在于，所述的抗原肽的n端删减1-5个氨基酸。
6.权利要求1-5任一项所述的ii-key t细胞多肽组合物在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的疫苗还含有佐剂。
8.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：许文波，宋洋，王树毅，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，
类型：发明
国别省市：
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