一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒及其制备方法。一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒由卡壳、位于卡壳内的试纸条组成，试纸条由底板(1)、样品垫(2)、胶体金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水滤纸(5)组成，样品垫(2)、胶体金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水滤纸(5)依次从下往上粘贴在底板(1)上。所述硝酸纤维素膜(4)上靠近所述胶体金垫(3)侧设有测试线T线(41)，所述硝酸纤维素膜(4)上靠近所述吸水滤纸(5)侧设有质控线C线(42)。本发明专利技术可直接检测出样本中是否含有新型冠状病毒，可用于疾病早期的诊断；有效辅助核酸检测，为全球抗击疫情的战役提供有效的科学武器。的战役提供有效的科学武器。的战役提供有效的科学武器。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，具体为一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]截止至目前，新型冠状病毒肺炎仍在全球肆虐蔓延，我国虽对疫情控制情况较好，但随着国外疫情的日益加重，我国所面临的防疫压力也日趋增大，而病毒检测作为新冠肺炎疫情防控中的重要一环，也愈加受到人们重视。
[0003]现行社会上新冠病毒的精准检测仍然重度依赖核酸检测，此类检测方法结果精准，但检测速度较慢，成本较高，且需要大量经过专业培训的人员来操作试验设备，因此无法实现大规模快速检测；而目前可以以较快速度获取检测结果的试剂盒，则绝大多数依靠抗体检测，虽然成本低，操作简便，但其结果准确性较差，有较大概率出现假阴性与假阳性的情况，且仅能在患病产生抗体后，即感染8
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15天才能检出，无法满足大规模密切接触者和无症状感染者的快速筛检。
[0004]因此迫切需要开发研究出一种快速而精准的检测方法，以应对新形势下的新型冠状病毒传播。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，包括卡壳、位于卡壳内的试纸条；试纸条由底板、样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸组成，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次从左往右搭接在底板上。
[0007]进一步的，所述胶体金垫上有含有鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体1的金标抗体复合物。
[0008]进一步的，所述硝酸纤维素膜上靠近胶体金垫一侧有测试线T线，靠近吸水滤纸一侧有质控线C线；其中测试线T线包被有鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体2，质控线C线包被有羊抗鼠IgG抗体。
[0009]进一步的，所述一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0010]S1.胶体金溶液的准备：制备符合使用要求的胶体金溶液备用；
[0011]S2.胶体金垫的制备：用S1中胶体金溶液标记鼠抗SARS
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Cov
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2 NP单克隆抗体1，将其制备为金标抗体复合物，将金标抗体复合物铺在金标垫上，45℃干燥后进行免疫层析试纸条大板的组装；
[0012]S3.硝酸纤维素膜的制备：将鼠抗SARS
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Cov
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2 NP单克隆抗体2包被在硝酸纤维素膜上形成测试线T线，将羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜上形成质控线C线；
[0013]S4.切条组装按照产品需求尺寸，对原料进行切条，并按照样本垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜与吸水滤纸的顺序，依次搭接在底板上，得胶体金免疫层析试纸条；
[0014]S5.将组装好的胶体金免疫层析试纸条放在电子干燥柜内，保持湿度为25％
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35％，温度为18℃
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26℃，后熟5天，之后将其与塑料外壳组装，得到成品。
[0015]进一步的，所述步骤S1所述胶体金纳米颗粒水溶液的制备方法包括以下步骤：
[0016]S11.在锥形瓶中加入超纯水，再加入质量分数为2％的氯金酸溶液，搅拌下加热至沸腾，沸腾1分钟后一次性迅速加入柠檬酸三钠，当溶液变为通透的红色后，继续加热1分钟，待溶液冷却后即得到胶体金溶液；其中按重量份数计，所述超纯水与氯金酸溶液的比例为100：(1
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2.5)，所述柠檬酸三钠添加质量分数为1％；
[0017]S12.紫外检测符合要求后，4℃避光保存。
[0018]进一步的，步骤S1所述胶体金溶液紫外检测波长应在525nm
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535nm之间。
[0019]进一步的，步骤S2所述金标抗体复合物的制备方法包括以下步骤：
[0020]S21.按体积份数计，取1000份上述胶体金溶液置于容器中，取8
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10份的0.2M的碳酸钾溶液滴加入胶体金溶液内，调节溶液pH，在溶液内缓慢均匀的加入12
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18份浓度为1g/L的鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体1，之后将溶液置于混匀仪内室温下混匀30
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45分钟；
[0021]S22.混匀后，迅速在溶液内加入80
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120份10％牛血清白蛋白溶液，置于混匀仪内继续混匀20
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30分钟后，取出，室温下静置30分钟；
[0022]S23.静置完成后，将溶液移入离心机内，以13000rpm的转速离心30分钟；
[0023]S24.离心后分离沉淀，将沉淀溶于700份胶体金重悬缓冲液中，4℃保存备用。
[0024]进一步的，一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
[0025]a.使用前检测卡必须充分恢复至室温，检测应在室温条件下进行；
[0026]b.样本采集后将鼻咽试子放入样本稀释液的管中；
[0027]c.盖好样本稀释液管的盖子，倒置管子于加样孔上方，缓慢滴加稀释液到加样孔中，开始计时；
[0028]d.10分钟后观察检测卡，若检测卡上C线与T线均显色，则该样本为阳性，若检测卡上C线显色，T线不显色，则该样本为阴性，其余情况为无效。
[0029]进一步的，步骤b所述样本稀释液为含有pH7.4的0.01M PBS、0.05％SDS、0.5％曲拉通、0.3％EDTA和0.05％Proclin300的溶液。
[0030]本专利技术的新型冠状病毒抗原检测试剂盒采用双抗体夹心法进行检测，抗原会先与胶体金垫内金标抗体结合，之后再与测试线T线上的抗体结合，形成夹心结构，在测试线T线显色，若试样中无新冠病毒抗原，则试样内物质无法与金标抗体及测试线T线上的抗体形成夹心结构，无法显色。
[0031]在夹心法检测的实验中，本专利技术检测的是新冠抗原，需要把样本中的新冠抗原提取出来才能检测，提取样本中的新冠抗原需要样本稀释液，样品稀释液中含有解离成分，可使样本中的新冠抗原释放出来，从而进行准确检测。一般稀释液中，Proclin300作为防腐剂可以抑制细菌的生长，SDS能够起到裂解细胞的作用，曲拉通能够将膜蛋白从细胞膜上解离下来，达到提取膜蛋白的作用，EDTA能够抑制蛋白酶活性，防止蛋白酶解，三种组分综合作用，能够达到提取蛋白的作用，三种试剂缺一不可。
[0032]本专利技术胶体金垫上覆有鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体1，鼠抗SARS
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2 NP单
克隆抗体1通过静电作用与胶体金颗粒结合形成金标抗体复合物；胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，包括卡壳、位于卡壳内的试纸条；所述试纸条由底板(1)、样品垫(2)、胶体金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水滤纸(5)组成；所述样品垫(2)、胶体金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)和吸水滤纸(5)依次从左往右搭接在底板(1)上。2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于：所述胶体金垫(3)上有含有鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体1的金标抗体复合物。3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒，其特征在于：所述硝酸纤维素膜(4)上靠近胶体金垫(3)一侧有测试线T线(41)，靠近吸水滤纸(5)一侧有质控线C线(42)；其中测试线T线(41)包被有鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体2，质控线C线(42)包被有羊抗鼠IgG抗体。4.一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.胶体金溶液的准备：制备符合使用要求的胶体金溶液备用；S2.胶体金垫(3)的制备：用S1中胶体金溶液标记鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体1，将其制备为金标抗体复合物，将金标抗体复合物铺在金标垫上，45℃干燥后进行免疫层析试纸条大板的组装；S3.硝酸纤维素膜(4)的制备：将鼠抗SARS
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2 NP单克隆抗体2包被在硝酸纤维素膜(4)上形成测试线T线(41)，将羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素膜(4)上形成质控线C线(42)；S4.切条组装：按照产品需求尺寸，对原料进行切条，并按照样本垫(2)、胶体金垫(3)、硝酸纤维素膜(4)与吸水滤纸(5)的顺序，依次搭接在底板(1)上，得胶体金免疫层析试纸条；S5.将组装好的胶体金免疫层析试纸条放在电子干燥柜内，之后将其与塑料外壳组装，得到成品。5.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒抗原检测试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤S1所述胶体金溶液的制备方法包括以下步骤：S11.在锥形瓶中加入超纯水，再加入质量分数为2％的氯金酸溶液，搅拌...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦玉，郑涛，洪春花，叶晗，
申请(专利权)人：江苏晶红生物医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：