基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，公开了基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条及其制备方法，该基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条，包括外壳和配套使用的样品稀释液，外壳内装配有试纸条，试纸条包括PVC底板，PVC底板上黏贴有样品垫、金标垫、包被膜和吸水垫，金标垫为玻璃纤维素膜，包被有纯化的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体与胶体金的偶联标记物；包被膜为硝酸纤维素膜，包被膜上涂设有一条包被有纯化抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的检测线和一条包被有羊抗鼠IgG抗体的质控线，本发明专利技术整体制造成本低廉、抗体与蛋白结合稳定、灵敏度较高、检测方便快速。检测方便快速。检测方便快速。

【技术实现步骤摘要】
基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体的说，涉及基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条及其制备方法。

技术介绍

[0002]犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病，传染性强，死亡率达30%
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80%，在世界范围内广泛流行；近年来，由于环境变化，动物栖息地人为干预，病毒的进化，该病在我国的发病率不断上升，其宿主范围也有不断扩大的趋势，对犬饲养业、经济动物养殖业及野生动物保护事业造成了严重危害，因此，对该病的防控和诊断尤为重要。
[0003]犬瘟热病毒的传统检测方法有血清学检测方法和病原学检测方法；其中，血清学检测方法主要包括：血凝试验、酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析等方法，但均存在灵敏度不高、特异性不强的问题；且宠物疾病抗体检测的需求相对于抗原偏少。
[0004]病原学检测方法主要包括：病毒分离法、分子生物学检测、酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析；病毒分离方法虽然在理论上可以检出一个感染性的病毒粒子，确诊犬瘟热病毒的感染，但也因分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条，包括外壳（8）和配套使用的样品稀释液，外壳（8）内装配有试纸条，试纸条包括PVC底板（2），PVC底板（2）上黏贴有样品垫（1）、金标垫（3）、包被膜（6）和吸水垫（7），其特征在于：金标垫（3）为玻璃纤维素膜，包被有纯化的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体与胶体金的偶联标记物；包被膜（6）为硝酸纤维素膜，包被膜（6）上涂设有一条包被有纯化抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的检测线（4）和一条包被有羊抗鼠IgG抗体的质控线（5）；抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体的DNA分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。2.根据权利要求1所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条，其特征在于：样品稀释液包括基液，基液中加入有质量百分数为0.05%的NaN3和0.05%的PEG20000，基液中还加入有体积百分数为0.5%的Tween
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20；基液为PBS溶液，PBS溶液的浓度为0.01mol/L，PBS溶液的pH值为7.2。3.如权利要求1
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2任一项所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、胶体金溶液的制备：取浓度为0.01%的氯金酸溶液，加热至沸腾后，迅速加入浓度为1%的柠檬酸三钠1.5mL并继续加热，溶液由淡黄色转为蓝黑色，最终变为酒红色，颜色稳定后继续加热5分钟，在室温进行冷却，获得胶体金溶液，4℃保存备用，胶体金颗粒的直径为25nm；S2、蛋白标记：采用浓度为1%的K2CO3溶液调节胶体金溶液的pH值为7.2；然后在每1mL胶体金溶液中加入10μg抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体，室温震荡30分钟，震荡速度为130r/min；然后加入浓度为10%的牛血清白蛋白20μL进行封闭，静置30分钟；静置完成后离心40分钟，离心速度为12000r/min，弃上清，按胶体金溶液体积1/10的比例加入复溶液溶解沉淀，即得到标记好的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体标记物；S3、金标垫的制备：选取玻璃纤维素膜作为金标垫（3），每条玻璃纤维素条中加入1mL的抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体标记物，进行烘干工序，即得到金标垫（3）。4.根据权利要求3所述的基于纳米抗体的犬瘟热病毒抗原检测试纸条的制备方法，其特征在于：该制备方法还包括：S4、包被膜的制备：选择硝酸纤维素膜作为包被膜（6），将抗犬瘟热病毒H蛋白纳米抗体用划膜液稀释至浓度为1mg/mL，用于检测线（4）划...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱绍辉，朱光，肖发沂，王小伟，侯显涛，齐艳君，亓鹏，王宝杰，张彤晨，柏诚昊，
申请(专利权)人：山东畜牧兽医职业学院，
类型：发明
国别省市：