一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒。本发明专利技术的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，包括：包被有兔抗SADS

【技术实现步骤摘要】
一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒。

技术介绍

[0002]猪急性腹泻综合征(swine acute diarrhea syndrome，SADS)是由猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus，SADS
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CoV)引起的一类急性传染病。临床表现主要有感染仔猪急性腹泻、呕吐，5日龄内新生仔猪由于体重骤减和严重脱水而迅速死亡，且死亡率高达90％以上。SADS至今还没有效的疫苗和抗病毒药物问世，目前，防控该病主要措施是控制传染源和切断潜在的传播途径。
[0003]目前，已知的猪冠状病毒有五种，除新发现的SADS外，还包括猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，其特征在于，包括：包被有兔抗SADS
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CoV N蛋白多克隆抗体的酶标板、HRP标记的鼠抗SADS
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CoV N蛋白单克隆抗体，所述鼠抗SADS
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CoV N蛋白单克隆抗体的重链可变区包括氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的CDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的CDR3；轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的CDR2、氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的CDR3。2.根据权利要求1所述的一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，其特征在于，还包括酶标二抗、封闭液、稀释液、洗涤液、显色液以及终止液。3.根据权利要求1所述的一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，其特征在于，兔抗SADS
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CoV N蛋白多克隆抗体和鼠抗SADS
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CoV N蛋白单克隆抗体的制备方法为：通过PCR扩增获得SADS
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CoVN基因，将其与原核表达载体pET32a连接，构建重组质粒pET32a
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N，转化大肠杆菌BL21，通过IPTG诱导表达获得N蛋白，然后通过镍柱纯化获得纯化的N蛋白，以此作为免疫源，免疫兔子和小鼠，分别制备兔抗SADS
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CoV N蛋白多克隆抗体和鼠抗SADS
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CoV N蛋白单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，其特征在于，所述兔抗SADS
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CoV N蛋白多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：将纯化的N重组蛋白按300μg/只的量免疫兔子；首次免疫，将N蛋白与弗氏完全佐剂等体积混匀后进行乳化，采用多点背部皮下注射；每隔2周进行加强免疫，共免疫四次，加强免疫是将N重组蛋白和弗氏不完全佐剂等体积混匀进行乳化，免疫方法同首次免疫；四免后7d对实验兔耳缘静脉采血测定抗体效价，得到特异性的兔抗SADS
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CoV N蛋白多克隆抗体。5.根据权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，曹丽艳，郑海学，田宏，孔祥雨，袁聪，段月月，
申请(专利权)人：中国农业科学院都市农业研究所，
类型：发明
国别省市：