一种检测COVID-19抗体的血糖生物传感器制造技术

本发明专利技术公开了一种检测COVID

【技术实现步骤摘要】
一种检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器。

技术介绍

[0002]目前新冠抗体的检测技术主要为免疫分析法，利用制备新冠抗原蛋白特异性捕获和识别新冠特异性抗体(IgM /IgG)，主要方法有ELISA、化学发光和免疫测流层析法等，其中ELISA和化学发光不仅需要酶标仪等较为昂贵的光学检测设备，而且对操作人员要求较高，因此ELISA和化学发光不适用于大规模的快速检测。免疫测流层析法是其中速度最快、最为简便的抗体检测方法，通过肉眼即可观察到检测信号，非常适用于新冠抗体的快速检测，但由于通过肉眼观察检测结果不仅会造成很大的主观误差，而且不能对新冠抗体进行定量分析。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于针对上述问题，提供一种用血糖检测COVID
‑
19抗体的生物传感器。
[0004]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器，所述生物传感器包括：新冠病毒COVID
‑
19抗原、新冠病毒COVID
‑
19抗体、修饰有发夹结构DNA片段H1
‑
DNA的新冠病毒COVID
‑
19二抗、触发DNA片段T
‑
DNA、酶标记的发夹结构DNA片段H2
‑
DNA和血糖生物传感器；所述新冠病毒COVID
‑
19抗原为：新冠病毒COVID
‑
19的S蛋白或N蛋白；其中 S蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；其中 N蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述新冠病毒COVID
‑
19抗体为：新冠病毒COVID
‑
19抗体COVID
‑
19 IgG或COVID
‑
19 IgM；所述新冠病毒COVID
‑
19二抗为：新冠病毒COVID
‑
19抗体IgG或IgM的抗抗体，即COVID
‑
19 Anti
‑
IgG或COVID
‑
19 Anti
‑
IgM；所述修饰有发夹结构DNA片段H1
‑
DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述触发DNA片段T
‑
DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述酶标记的发夹结构DNA片段H2
‑
DNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；标记H2
‑
DNA的酶为能将糖类底物转化为葡萄糖的酶，包括蔗糖酶（Invertase）、麦芽糖酶（Maltase）、果糖酶中的任意一种。
[0005]进一步的，上述检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器，其中所述血糖生物传感器为采用丝网印刷电极制备血糖生物传感器；所述采用丝网印刷电极制备血糖生物传感器其制备方法包括以下步骤：首先在工作电极上沉积普鲁士蓝作为电中介物质，沉积条件：盐酸浓度0.1
‑
1M，无水氯化铁浓度0.25
‑
2.5mM，铁氰化钾浓度0.25
‑
2.5mM，氯化钾浓度0.01
‑
0.1M，CV沉积，扫速10
‑
20mV/s，沉积3
‑
5个循环，
‑
0.1V
‑
1V；沉积完普鲁士蓝后，去离子水清
洗干净，氮气吹干；然后在普鲁士蓝表面固定葡萄糖氧化酶（GOx）：0.1
‑
1mg/mL GOx用1wt%
‑
5wt% BSA（溶剂为去离子水）稀释10倍，取10uL 稀释后的GOx加入10uL 1wt%
‑
5wt% BSA、10uL 0.5wt%
‑
1wt%戊二醛溶液，混匀，取3uL滴于沉积普鲁士蓝的工作电极上，25℃干燥形成GOx成膜；取3uL浓度为0.1%
‑
0.5% Nafion溶液（以1
×
PBS，pH=7.4稀释），滴加在GOx膜表面，25℃干燥成膜。
[0006]检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器的使用方法，包括以下步骤：Step1：在基板上固定新冠病毒COVID
‑
19抗原，用缓冲溶液清洗并干燥基板；Step2：将含有新冠病毒COVID
‑
19抗体的样本加入Step1的基板中，固定在基板上的新冠病毒COVID
‑
19抗原特异性捕获COVID
‑
19 抗体，用缓冲溶液清洗并干燥基板；Step3：将修饰有发夹结构DNA片段H1
‑
DNA的新冠病毒COVID
‑
19二抗加入Step2干燥后的基板中，以特异性识别新冠病毒COVID
‑
19抗体，用缓冲溶液清洗并干燥基板；Step4：将触发DNA片段T
‑
DNA和酶标记的发夹结构DNA片段H2
‑
DNA加入Step3干燥后的基板中，T
‑
DNA打开H1
‑
DNA的发夹结构，形成T
‑
DNA
‑
H1
‑
DNA复合物，H2
‑
DNA将T
‑
DNA置换下来，形成H1
‑
DNA
‑
H2
‑
DNA复合物，置换下来的T
‑
DNA再次循环参与打开H1
‑
DNA发夹结构，室温反应一定时间后，用缓冲溶液清洗并干燥基板；Step5：将糖类底物加入Step4干燥后的基板中，室温反应一定时间，H2
‑
DNA上标记的酶将糖类底物转化为葡萄糖；Step6：将Step5的葡萄糖溶液滴加在血糖生物传感器上检测中溶液的葡萄糖含量，进而检测出含有新冠病毒COVID
‑
19抗体的样本中新冠病毒COVID
‑
19抗体的含量。
[0007]上述使用方法Step1中所述基板包括96孔板、离心管、玻璃管中的任意一种；使用前对基板进行预处理，具体为：用氧等离子体预处理，氩气与氧气的比例为2:1
‑
5:1，功率10W
‑
50W，处理5
‑
10min；然后将APTES溶液加入氧等离子体处理过的基板中，APTES溶液的浓度为0.1wt%
‑
5wt%，溶剂为无水乙醇和水的混合液，水的含量为1wt%
‑
10wt%；室温下反应2
‑
6h，反应结束后，用无水乙醇、去离子水清洗干净基板，氮气吹干待用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器，其特征在于：所述生物传感器包括以下组件：新冠病毒COVID
‑
19抗原、新冠病毒COVID
‑
19抗体、修饰有发夹结构DNA片段H1
‑
DNA的新冠病毒COVID
‑
19二抗、触发DNA片段T
‑
DNA、酶标记的发夹结构DNA片段H2
‑
DNA和血糖生物传感器；所述新冠病毒COVID
‑
19抗原为：新冠病毒COVID
‑
19的S蛋白或N蛋白；其中 S蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；其中 N蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述新冠病毒COVID
‑
19抗体为：新冠病毒COVID
‑
19抗体COVID
‑
19 IgG或COVID
‑
19 IgM；所述新冠病毒COVID
‑
19二抗为：新冠病毒COVID
‑
19抗体IgG或IgM的抗抗体，即COVID
‑
19 Anti
‑
IgG或COVID
‑
19 Anti
‑
IgM；所述修饰有发夹结构DNA片段H1
‑
DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述触发DNA片段T
‑
DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述酶标记的发夹结构DNA片段H2
‑
DNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；标记H2
‑
DNA的酶为能将糖类底物转化为葡萄糖的酶。2.根据权利要求1所述的检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器，其特征在于：所述标记H2
‑
DNA的酶为能将糖类底物转化为葡萄糖的酶包括蔗糖酶、麦芽糖酶、果糖酶中的任意一种。3.根据权利要求1所述的检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器，其特征在于：所述血糖生物传感器为采用丝网印刷电极制备血糖生物传感器；所述采用丝网印刷电极制备血糖生物传感器其制备方法包括以下步骤：首先在工作电极上沉积普鲁士蓝作为电中介物质，沉积条件：盐酸浓度0.1
‑
1M，无水氯化铁浓度0.25
‑
2.5mM，铁氰化钾浓度0.25
‑
2.5mM，氯化钾浓度0.01
‑
0.1M，CV沉积，扫速10
‑
20mV/s，沉积3
‑
5个循环，
‑
0.1V
‑
1V；沉积完普鲁士蓝后，去离子水清洗干净，氮气吹干；然后在普鲁士蓝表面固定葡萄糖氧化酶：0.1
‑
1mg/mL 葡萄糖氧化酶用1wt%
‑
5wt% BSA稀释10倍，取10uL 稀释后的葡萄糖氧化酶加入10uL 1wt%
‑
5wt% BSA、10uL 0.5wt%
‑
1wt%戊二醛溶液，混匀，取3uL滴于沉积普鲁士蓝的工作电极上，25℃干燥形成葡萄糖氧化酶膜；取3uL以1
×
PBS，pH=7.4稀释的浓度为0.1%
‑
0.5% Nafion溶液，滴加在葡萄糖氧化酶膜表面，25℃干燥成膜。4.权利要求1所述检测COVID
‑
19抗体的血糖生物传感器的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：在基板上固定新冠病毒COVID
‑
19抗原，用缓冲溶液清洗并干燥基板；Step2：将含有新冠病毒COVID
‑
19抗体的样本加入Step1的基板中，固定在基板上的新冠病毒COVID
‑
19抗原特异性捕获COVID
‑
19 抗体，用缓冲溶液清洗并干燥基板；Step3：将修饰有发夹结构DNA片段H1
‑
DNA的新冠病毒COVID
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李调阳，林本慧，林美雅，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：