一种新型冠状病毒抗体检测试纸、制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒抗体检测试纸、制备方法和应用，所述试纸包括底板和沿层析方向依次设置在底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，结合垫上包含SARS

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒抗体检测试纸、制备方法和应用


[0001]本专利技术属抗体检测
，具体涉及一种新型冠状病毒抗体检测试纸、制 备方法和应用。

技术介绍

[0002]体外诊断，即IVD(In Vitro Diagnosis)，是指将从人体中提取出来的样本(如 血液、体液、组织等生物样本)，使用体外检测试剂盒、试剂等对其进行检测， 从而获取有效的诊断信息，并据此进一步判断机体疾病或功能的一种较为成熟的 诊断方法。体外诊断相比于其他诊断方法的主要优势是诊断效率高、检测速度快、 成本低、可以进行大批量检测，因此可以预测体外诊断的发展方向是快速、灵敏、 大批量检测生物样品。而基于体外诊断技术发展起来的免疫层析试纸条在生物医 学检测方面同样具有快速灵敏、简便直观、成本低大批量等优点，在病例极多， 检测样本极多的大环境下具有极高的应用价值及优势，如检测传染性极高的新兴 SARS
‑
CoV
‑
2的新型冠状病毒。在疾病初期，可以用试纸条对疑似病例进行大批 量检测，以此来排查病毒在人群中的传播程度，进而可以有效预防病毒的大面积 爆发；在疾病后期，也可以通过用试纸条检测病人的生物样本先大致判断哪些患 者已痊愈，再用其他检测方法进一步确保检测结果无误，大大提高了检测效率， 降低了检测成本。免疫层析条技术的主要原理是相应抗原和抗体会产生特异性免 疫反应，以及溶液在毛细作用力下会沿着纸板慢慢向上延展浸润。如果用抗原来 标记显色指示剂制成检测试纸条，当生物样品中(如：尿液、血液或唾液)含有 能与该抗原特异性结合的抗体物质，这种结合会使试纸条的检测区出现显色指示 剂的包覆和进而呈现出显色效果，借此来识别所检生物样品中是否含有目标被检 物质，从而达到快速检测目标被检物的目的。
[0003]目前已经发展出了Alpha、Beta、Gamma、Delta等毒株，其中Delta是迄今 为止传染性最强的变异株。这些变异毒株与原始版本相比，具有高度传染性，对 疫苗的耐药性也更强，对病毒的检测和防治带来了很大难度。
[0004]这样的情况下病毒样本亟须大量快速简单快捷的检测方法。为了满足重灾区 的巨大检测需求以及进一步有效控制病毒的反复出现，而且一些边远地区的基层 医疗条件不够完善，发展快速及时的有效诊断手段是重中之重。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种新型冠状病毒抗体检测试纸、 制备方法和应用，具体包括以下内容：
[0006]一种新型冠状病毒抗体检测试纸，包括底板和沿层析方向依次设置在底板上 的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫的一端与样品垫的一端 接触，所述结合垫的另一端与硝酸纤维素膜的一端接触，所述硝酸纤维素膜的另 一端与吸水垫接触，所述结合垫上包含SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡IgY 单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上沿层析方向依次设置有检测线和质控线，检测 线上喷涂有鼠抗人IgG单克隆抗体，以及质控
线上喷涂有兔抗鸡IgY单克隆抗 体。
[0007]具体地，所述结合垫上包含胶体金标记的SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡 IgY单克隆抗体。
[0008]具体地，所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，所述结合物垫为玻璃纤维 膜，所述底板为聚氯乙烯胶板。
[0009]本专利技术还公开了一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，包括以下步骤：
[0010]步骤1：柠檬酸三钠与氯化金三水化合物反应，得到胶体金；
[0011]步骤2：用步骤1制备的胶体金分别标记SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡 IgY单克隆抗体；
[0012]步骤3：将标记好的SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体的重 悬液混合，将结合垫浸入混合液中，然后取出结合垫并烘干；
[0013]步骤4：将硝酸纤维素膜粘贴于底板上，使其贴紧PVC底板，然后分别沿 层析方向依次将鼠抗人IgG单克隆抗体和兔抗鸡IgY单克隆抗体横向喷涂在硝 酸纤维素膜上的相应位置，分别作为检测线和质控线，最后烘干；
[0014]步骤5：将结合垫、样品垫和吸水垫粘接到底板相应位置上。
[0015]具体地，所述步骤1为：将氯化金加入去离子水中，加热至沸腾后加入柠檬 酸三钠，当溶液变为紫红色后，持续加热10
‑
20min至颜色不变，补加一定体积 的去离子水，待其降至室温即可将得到胶体金溶液。
[0016]具体地，所述步骤2包括以下步骤：
[0017](1)分别取出一定体积的胶体金溶液于洁净的第一离心管和第二离心管中， 用K2CO3溶液将第一离心管中胶体金溶液的pH值调至10
‑
11，用K2CO3溶液 将第二离心管中胶体金溶液的pH值调至8
‑
9，同时确保两个离心管中的胶体金 溶液不产生聚沉；
[0018](2)在第一离心管中加入一定量的SARS
‑
CoV
‑
2重组N蛋白抗原，在第二 离心管中加入一定量的鸡IgY单克隆抗体，分别将第一离心管和第二离心管混匀 后反应20
‑
40min；
[0019](3)分别往第一离心管和第二离心管中加入一定量的10mM Tris溶液和5％ 酪蛋白钠盐，搅拌反应20
‑
40min；
[0020](4)将上述两个离心管进行离心，离心转速8000
–
9000r/min，离心时间为 5
‑
15min，分离得到胶体金标记的SARs
‑
CoV
‑
2重组N蛋白抗原和胶体金标记的 鸡IgY单克隆抗体；
[0021](5)分别取一定体积的20mM Tris和5％蔗糖充分重悬(4)中离心得到的 胶体金标记的SARs
‑
CoV
‑
2重组N蛋白抗原和胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体。
[0022]具体地，所述步骤3为将步骤2中得到的胶体金标记的SARS
‑
Cov
‑
2重组N 蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体的重悬液混合，用混合后的重悬液充分浸泡结合 垫，然后取出结合垫，42℃烘干4h，得到带显色检测试剂的干燥结合垫，保存 于25℃干燥柜备用。
[0023]具体地，所述步骤4中的烘干温度为42℃，烘干时间为2h；所述步骤5中， 结合垫的一端设置在样品垫和底板之间，硝酸纤维素膜的一端设置在结合垫和底 板之间，硝酸纤维素膜的另一端设置在吸水垫和底板之间，相邻垫板之间相交 1.5
‑
2.5mm。
[0024]本专利技术还公开了一种检测新型冠状病毒抗体的方法，利用新型冠状病毒抗体 检测试纸进行新型冠状病毒抗体检测。
[0025]具体地，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒抗体检测试纸，包括底板和沿层析方向依次设置在底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫的一端与样品垫的一端接触，所述结合垫的另一端与硝酸纤维素膜的一端接触，所述硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫接触，其特征在于，所述结合垫上包含SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上沿层析方向依次设置有检测线和质控线，检测线上喷涂有鼠抗人IgG单克隆抗体，以及质控线上喷涂有兔抗鸡IgY单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗体检测试纸，其特征在于，所述结合垫上包含胶体金标记的SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体。3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗体检测试纸，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，所述结合物垫为玻璃纤维膜，所述底板为聚氯乙烯胶板。4.一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：柠檬酸三钠与氯化金三水化合物反应，得到胶体金；步骤2：用步骤1制备的胶体金分别标记SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体；步骤3：将标记好的SARS
‑
Cov
‑
2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体的重悬液混合，将结合垫浸入混合液中，然后取出结合垫并烘干；步骤4：将硝酸纤维素膜粘贴于底板上，使其贴紧PVC底板，然后分别沿层析方向依次将鼠抗人IgG单克隆抗体和兔抗鸡IgY单克隆抗体横向喷涂在硝酸纤维素膜上的相应位置，分别作为检测线和质控线，最后烘干；步骤5：将结合垫、样品垫和吸水垫粘接到底板相应位置上。5.根据权利要求4所述的一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，所述步骤1为：将氯化金加入去离子水中，加热至沸腾后加入柠檬酸三钠，当溶液变为紫红色后，持续加热10
‑
20min至颜色不变，补加一定体积的去离子水，待其降至室温即可将得到胶体金溶液。6.根据权利要求4所述的一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，所述步骤2包括以下步骤：(1)分别取出一定体积的胶体金溶液于洁净的第一离心管和第二离心管中，用K2CO3溶液将第一离心管中胶体金溶液的pH值调至10
‑
11，用K2CO3溶液将第二离心管中胶体金溶液的pH值调至8
‑
9，同时确保两个离心管中的胶体金溶液不产生聚沉；(2)在第...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄辉，温凯凯，张小玉，
申请(专利权)人：中国科学院大学，
类型：发明
国别省市：