一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条及制备方法技术

本发明专利技术涉及了一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条的制备方法，包括如下步骤：样品垫的制备、胶体金垫的制备、NC膜的处理、裁剪吸水纸，将样品垫、胶体金垫、处理好的NC膜、吸水纸依次顺序粘贴到PVC底板上，制备成大板，而后裁切为试剂条；其中，胶体金垫的制备包括胶体金的活化、胶体金微球标记、配置胶体金工作液、喷金；NC膜的处理包括制备包被液、划线、划线。采用本技术方案制备的试剂条检测灵敏度高、准确性高、特异性高。特异性高。特异性高。

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条及制备方法


[0001]本专利技术涉及新冠抗原检测试剂条
，具体涉及一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条及制备方法。

技术介绍

[0002]冠状病毒的传播主要方式是近距离呼吸道飞沫传播，其他途径如接触、粪口（消化道）等途径存在极大可能。自2019年底新型冠状病毒肺炎疫情爆发以来，全国乃至全世界都面临着巨大的防控压力。新冠肺炎是全世界高度重视的传染疾病，目前尚未发现针对新冠肺炎的特效药，最为有效的防控手段依然是隔离确诊与疑似病例，同时对特定场所进行主动防控。
[0003]目前医疗机构大多主要采用荧光PCR法等核酸检测手段对疑似病患进行确诊，但是，现有的核酸检测技术依然存在如下局限：（1）操作复杂，且检测过程用时较长，整个检测流程耗时约2小时以上；（2）对实验室的要求较高，一般要求实验室为生物安全二级以上；（3）设备昂贵，需要专业技术人员操作；难以满足大规模快速筛查的社会实际需求。
[0004]为了实现大规模快速检测的目的，市场上出现了多种采用胶体金技术的新冠检测试剂盒，试剂盒一般采用胶体金作为标记物。虽然相对于荧光微球、胶乳微球等其他直径较小的标记物而言，胶体金球径较大，灵敏度相对较低，不适合做定量检测；但是相对于荧光微球、胶乳微球等需要借助专门的仪器进行读数来判断检测结果来说，采用胶体金技术的新冠检测试剂盒无需专门的判读仪器，且反应时间短，一般仅需15～20分钟即可完成检测，检测结果直观读取，检测人员无需掌握复杂的专业知识。
[0005]目前市面上存在的多种新冠检测试剂盒大多是只针对病毒的N蛋白或S1蛋白，生产工艺单一，导致许多产品检测灵敏度和特异性不高，从而出现假阴性的情况，不利于疫情的防控。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决的技术问题是弥补现有技术的不足，提供一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条及制备方法。
[0007]要解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条的制备方法，包括如下步骤：S1：样品垫的制备将处理液铺于玻璃纤维膜Ⅰ上，而后将玻璃纤维膜Ⅰ干燥处理，干燥后得样品垫；S2：胶体金垫的制备S2.1：胶体金的活化选择直径在50～70nm之间的球形胶体金颗粒，将胶体金颗粒通过柠檬酸三钠活
化，制备浓度为0.05%的活化胶体金溶液；S2.2：胶体金微球标记量取10ml活化胶体金溶液，在活化胶体金溶液中加入浓度为0.2mol/L的碳酸氢钾溶液调整PH值为6.8～7.2，搅拌4～6min；然后加入新冠N标记抗体，搅拌4～6min；再加入浓度为10%的BSA，用于封闭终止标记；而后离心8～12min，除去上清液，在沉淀物中加入活化胶体金溶液复溶；最后用活化胶体金溶液定容至0.5ml,得新冠N标记抗体浓缩金；S2.3：配置胶体金工作液采用活化胶体金溶液将新冠N标记抗体浓缩金稀释至0D值为10～15，配制成胶体金工作液；S2.4：喷金采用喷金仪将胶体金工作液喷至玻璃纤维膜Ⅱ上，而后将玻璃纤维膜Ⅱ干燥处理，干燥后得胶体金垫；S3：NC膜的处理S3.1：制备包被液用稀释液将新冠N新包被抗体稀释至1.0～1.5mg/ml，得包被液；S3.2：划线采用划线仪将包被液匀速地划到NC膜上，得“T线”；S3.3：干燥将划好线的NC膜放入恒温箱干燥，干燥温度35～39℃，干燥时长50～70min，得处理好的NC膜；S4：裁剪吸水纸将吸水纸裁剪至与样品垫、胶体金垫、NC膜面积相适应的大小；S5：组装将样品垫、胶体金垫、处理好的NC膜、吸水纸依次顺序粘贴到PVC底板上，制备成大板，而后裁切为试剂条。
[0008]进一步地，步骤S1中，所述处理液包括Tween
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20水溶液，Tween
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20的质量浓度为1%，Tween
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20水溶液是由Tween
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20与纯化水混合而成。
[0009]进一步地，步骤S1中，所述处理液还包括阻断剂水溶液，阻断剂的质量浓度为1%，阻断剂水溶液是由阻断剂与纯化水混合而成；Tween
‑
20水溶液与阻断剂水溶液的体积比为1:1。
[0010]进一步地，步骤S1中，所述干燥处理的方式为：将玻璃纤维膜Ⅰ放入冻干机中冻干，冻干时长为1～2h；或将玻璃纤维膜Ⅰ放入干燥房中进行干燥，干燥温度为35～39℃，干燥时长为11～13h。
[0011]进一步地，：步骤S2.2中，所述离心转速为10000rpm。
[0012]进一步地，步骤S2.4中，所述干燥处理的方式为：将玻璃纤维膜Ⅱ放入冻干机中冻干，冻干时长为1～2h；或将玻璃纤维膜Ⅱ放入干燥房中进行干燥，干燥温度为35～39℃，干燥时长为11～13h。
[0013]进一步地，步骤S2.2中，所述新冠N标记抗体的浓度为5～50ug/ml。
[0014]进一步地，所述新冠N标记抗体的浓度为20ug/ml。
[0015]进一步地，步骤S3.1中，所述稀释液为0.1mol/L的磷酸盐缓冲液；用稀释液将新冠N新包被抗体稀释至1mg/ml，得包被液。
[0016]一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条，通过如上所述的制备方法所制得。
[0017]本专利技术可以达到的有益效果为：（1）样品垫通过处理后，既可以有效地减少内源性干扰物质的影响，也能增加样品的通透性，提高检测灵敏度。
[0018]（2）活化后的胶体金溶液，在浓度和PH的条件下，可以更稳定且均匀地与新冠N标记抗体进行标记；用BSA封闭多余的活化位点，进一步提高了检测稳定性和特异性，特异性高达99.76%。
[0019]（3）提高了检测灵敏度，灵敏度高达200万倍稀释（50ng/ml）。
[0020]（4）提高了检验准确性，经过大量临床验证，准确性高达98.82%。
附图说明
[0021]图1是本专利技术实施例的试剂条的构成示意图；图2是采用本专利技术实施例1的试剂条的检测结果照片展示；图3是采用市售A试剂条的检测结果照片展示；图4是采用市售B试剂条的检测结果照片展示；图中：1
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PVC底板，2
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样品垫，3
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胶体金垫，4
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NC膜，5
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T线，6
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C线，7
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吸水垫。
具体实施方式
[0022]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。
[0023]实施例1一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条的制备方法，包括如下步骤：S1：样品垫的制备将处理液铺于玻璃纤维膜Ⅰ上，而后将玻璃纤维膜Ⅰ干燥处理，干燥后得样品垫；干燥处理的方式为：将玻璃纤维膜Ⅰ放入冻干机中冻干，冻干时长为1.5h；处理液的溶质包括Tween
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20和阻断剂；处理液的配置方法为：首先采用纯化水分别稀释通过市面上购买的Tween
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20和阻断剂，即将1L纯化水加入50g阻断剂和50g Tween
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20的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏度新冠抗原检测试剂条的制备方法，其特征是：包括如下步骤：S1：样品垫的制备将处理液铺于玻璃纤维膜Ⅰ上，而后将玻璃纤维膜Ⅰ干燥处理，干燥后得样品垫；S2：胶体金垫的制备S2.1：胶体金的活化选择直径在50～70nm之间的球形胶体金颗粒，将胶体金颗粒通过柠檬酸三钠活化，制备浓度为0.05%的活化胶体金溶液；S2.2：胶体金微球标记量取10ml活化胶体金溶液，在活化胶体金溶液中加入浓度为0.2mol/L的碳酸氢钾溶液调整PH值为6.8～7.2，搅拌4～6min；然后加入新冠N标记抗体，搅拌4～6min；再加入浓度为10%的BSA，用于封闭终止标记；而后离心8～12min，除去上清液，在沉淀物中加入活化胶体金溶液复溶；最后用活化胶体金溶液定容至0.5ml,得新冠N标记抗体浓缩金；S2.3：配置胶体金工作液采用活化胶体金溶液将新冠N标记抗体浓缩金稀释至0D值为10～15，配制成胶体金工作液；S2.4：喷金采用喷金仪将胶体金工作液喷至玻璃纤维膜Ⅱ上，而后将玻璃纤维膜Ⅱ干燥处理，干燥后得胶体金垫；S3：NC膜的处理S3.1：制备包被液用稀释液将新冠N新包被抗体稀释至1.0～1.5mg/ml，得包被液；S3.2：划线采用划线仪将包被液匀速地划到NC膜上，得“T线”；S3.3：干燥将划好线的NC膜放入恒温箱干燥，干燥温度35～39℃，干燥时长50～70min，得处理好的NC膜；S4：裁剪吸水纸将吸水纸裁剪至与样品垫、胶体金垫、NC膜面积相适应的大小；S5：组装将样品垫、胶体金垫、处理好的NC膜、吸水纸依次顺序粘贴到PVC底板上，制备成大板，而后裁切为试剂条。2.根据权利要求1所述的高灵敏度新冠抗原检测试剂条的制备方法，其特征是：步骤S1中，所述处理液包括Tween
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20水溶液，Tween
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20的质量浓...

【专利技术属性】
技术研发人员：张斌，王培，聂晖，宁春华，
申请(专利权)人：济南百博生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：