一种幽门螺旋杆菌胶体金分型检测装置及其制备方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种幽门螺旋杆菌胶体金分型检测装置及其制备方法，检测装置包括底板，在所述底板的表面依次排列样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫这四个部件，所述胶体金结合垫上包含胶体金标记抗人IgG的单抗；所述层析膜上设有包被有重组幽门螺杆菌细胞毒(CagA)抗原、重组幽门螺杆菌空泡毒(VacA)抗原和重组幽门螺杆菌尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原的三条检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线，且上述的三条检测线及质控线相互平行。该检测装置操作简单，适用范围广，检测成本低，适用于临床检测、现场调查、以及流行病学调查。查。查。

【技术实现步骤摘要】
一种幽门螺旋杆菌胶体金分型检测装置及其制备方法


[0001]本专利技术涉及免疫检测领域，特别是指一种幽门螺杆菌胶体金分型检测装置及其制备方法。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种革兰阴性，微需氧杆菌。Hp感染与多种疾病密切相关，包括慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃癌等消化系统疾病。我国是幽门螺杆菌感染的高发国家，感染率在50％以上，但因为幽门螺杆菌致病性不一致(分为低毒型和高毒型)，并不是所有的幽门螺杆菌感染均需要进行治疗。故诊断出是否被幽门螺杆菌感染以及被何种幽门螺杆菌感染对临床治疗具有重要的指导意义。
[0003]幽门螺杆菌的检测方法根据是否需要内窥镜辅助分为非侵入性和侵入性检查。侵入性检查包括内窥镜检查、快速尿素酶试验、细菌培养、组织病理检查。侵入性方法主要通过内窥镜取得活检组织，进一步进行组织学检测。但这些方法往往会给患者带来侵入性痛苦，需要一定的条件和技术，并且费时又费力，不利于临床大批量的快速检测。
[0004]非侵入性检查包括尿素呼气试验、血清学检查、粪便抗原检测。非侵入性检查能有效避免侵入性痛苦，但这些方法或耗时且费用高，或无法区分活动性感染和过去感染，或诊断准确性易受样本存储的影响，并且以上方法都不能进行分型检测。
[0005]现有的检测幽门螺杆菌的主流技术只能判断是否感染幽门螺杆菌而无法进行分型检测，未解决此问题，本专利技术由此而来。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供一种幽门螺杆菌胶体金分型检测装置及其制备方法，以解决现有技术中检测幽门螺杆菌技术的缺陷。
[0007]本专利技术采取的技术方案是：一种幽门螺杆菌的胶体金分型检测装置，所述检测装置包括底板，在所述底板的表面依次排列样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫这四个部件，所述胶体金结合垫上包含胶体金标记抗人IgG的单抗；所述层析膜上设有包被有重组HP细胞毒(CagA)抗原、重组HP空泡毒(VacA)抗原和重组HP尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原的三条检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线，且上述的三条检测线及质控线相互平行。
[0008]优选地，所述质检测线上包被的重组HP细胞毒(CagA)抗原、重组HP空泡毒(VacA)抗原、和重组HP尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原的包被浓度为1～10mg/mL；质控线上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体最佳包被浓度为2～10mg/mL。
[0009]优选地，所述层析膜上设有的三条检测线距离加样端较近一侧，质控线距离加样端较远一侧。
[0010]优选地，各个检测线之间间距为4～10mm；最后一条检测线和质控线的间距为3～10mm。
[0011]优选地，样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫这四个部件，相邻两部件间边缘重叠。
[0012]本专利技术提供一种幽门螺杆菌胶体金分型检测装置的制备方法，包括如下步骤：
[0013]A、采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；
[0014]B、将所述鼠抗人IgG单抗与胶体金，在最佳pH值下进行偶联制得胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体溶液，并喷涂于胶体金结合垫上，干燥备用；
[0015]C、稀释所述重组HP细胞毒(CagA)抗原、重组HP空泡毒(VacA)抗原、和重组HP尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原和所述羊抗鼠IgG多克隆抗体，并喷涂至层析膜上，分别形成所述检测线与质控线，干燥备用；
[0016]D、将样品垫、胶体金结合垫、层析膜、吸收垫依次粘贴在底板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。
[0017]优选地，所述一种幽门螺杆菌胶体金分型检测装置的制备方法步骤A中胶体金粒径在10～40nm。
[0018]优选地，所述一种幽门螺杆菌胶体金分型检测装置的制备方法步骤B中最佳pH为8.0～9.5。
[0019]胶体金免疫层析技术(gold immunochromatography assay，GICA)是一种快速诊断技术，该技术将胶体金作为示踪物应用于抗原抗体反应。通过硝酸纤维素膜的毛细作用，将含有待检物质的样品沿着膜上移，固定在膜上的受体与之结合发生特异性反应。抗原抗体复合物不断累积，胶体金标记沉淀显色，从而达到检测目的。由于其具有简单快捷、无需特殊设备、结果稳定等优点，非常适合于现场检测，广泛用于生物、医药、食品等领域。
[0020]目前基于胶体金免疫层析技术的幽门螺杆菌检测方法多为检测IgG抗体，只能判断是否感染过幽门螺旋杆菌，无法进行分型检测。本专利技术通过基因工程技术进设计表达出幽门螺杆菌的不同抗原，将其固定在层析膜上，检测时根据幽门螺杆菌抗体种类的不同，对病菌进行分型，为临床是否需要治疗提供指导。
[0021]与现有方法比较，本专利技术具操作简便、检测时间短、灵敏度高、特异性强和适用范围广等特点。本项目产品能快速实现幽门螺杆菌诊断与分型检测，适用于临床检测、现场调查、以及流行病学调查等。
附图说明
[0022]图1为本专利技术的结构示意图。
[0023]图中：1、样品垫；2、胶体金结合垫；3、层析膜；4、吸收垫；5、底板；T1、第一检测线；T2、第二检测线；T3、第三检测线；C、质控线。
具体实施方式
[0024]参见图1所示，本专利技术的幽门螺杆菌胶体金分型检测装置，包括底板5，在所述底板5上依次粘贴有样品垫1、胶体金结合垫2、层析膜3、吸收垫4；所述胶体金结合垫2一端与吸样垫1搭接，另一端与层析膜3的一端搭接，所述层析膜3的另一端与取样垫4搭接；所述层析膜3上设置第一检测线T1、第二检测线T2、第三检测线T3和质控线C；所述的检测线T1上固相有纯化的HP尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原，所述的检测线T2上固相有纯化的HP细胞毒
(CagA)抗原，所述的检测线T3上固相有纯化的HP空泡毒(VacA)抗原；控线C包被羊抗鼠IgG多克隆抗体。
[0025]实施例1幽门螺杆菌细胞毒(CagA)、空泡毒(VacA)和尿素酶亚单位B蛋白(UreB)的核心抗原表达
[0026]幽门螺杆菌细胞毒(CagA)、空泡毒(VacA)和尿素酶亚单位B蛋白(UreB)的三个基因序列是申请人根据GenBank收录的幽门螺杆菌43504株的序列，经过优选找到的抗原性较强的表位区作为目的基因，经金唯智公司人工合成，且在基因的两端根据需要添加酶切位点片段。
[0027](1)合成的CagA和VacA基因序列，经过BamHI和SacI双酶切；合成的UreB核心抗原基因序列经过EcoRI和XhoI双酶切。回收双酶切后的DNA片段，然后将此片段与用同样的酶酶切的pET28a表达载体连接，分别构建表达载体pET28a
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CagA、pET28a
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VacA和pET28a
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UreB。
[0028](2)连接产物转化DH5α感受态细胞，将转化菌涂布氨苄青霉素抗性的LB琼脂平板37℃培养过夜。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种幽门螺杆菌胶体金分型检测装置，其特征在于，所述检测装置包括底板，在所述底板的表面依次排列样品垫、胶体金结合垫、层析膜和吸收垫这四个部件，所述胶体金结合垫上包含胶体金标记抗人IgG的单抗；所述层析膜上设有包被有重组HP细胞毒(CagA)抗原、重组HP空泡毒(VacA)抗原、和重组HP尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原的三条检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线，且上述的三条检测线及质控线相互平行。2.根据权利要求1所述的分型检测装置，其特征在于，所述质检测线上包被的重组HP细胞毒(CagA)抗原、重组HP空泡毒(VacA)抗原、和重组HP尿素酶亚单位B蛋白(UreB)抗原的包被浓度为1～10mg/mL；质控线上包被的羊抗鼠IgG多克隆抗体最佳包被浓度为2～10mg/mL。3.根据权利要求1所述的分型检测装置，其特征在于，所述层析素膜上设置的三条检测线从加样端依次排列为：包被有HP尿素酶亚单位B蛋白抗原的第一检测线、包被有HP细胞毒抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹鸿萍，覃快，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：