一种引物探针组合物、包含其的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种引物探针组合物、包含其的试剂盒及其检测方法，属于病毒检测技术领域，本发明专利技术提供的引物探针组合包括针对甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的特异性引物和探针，该特异性引物和探针具有良好的特异性，采用本发明专利技术的试剂盒，Q

【技术实现步骤摘要】
一种引物探针组合物、包含其的试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术属于病毒检测
，具体涉及一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的引物探针组合物、包含其的试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人类最常见的一类疾病，是全球范围内引起人群发病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道感染是由呼吸道病毒引起的，常见的呼吸道病毒包括甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒等。
[0003]现有技术中，目前呼吸道病原体检测的主要方法包括病原体分离培养法、免疫法和分子诊断等方法。病毒分离培养是目前病毒病原学检测的金标准，但是对标本中病毒采集、运输及保存条件要求均较高，且操作复杂、耗时长、不稳定、敏感性不高，不适合临床检测应用；免疫法的特异性高，但灵敏度较低，且往往不可用于疾病的早期诊断；而实时荧光定量PCR技术是目前应用最广泛的分子诊断方法，该技术不仅实现了对核酸模板的定量检测，而且具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的优点，但是现有的试剂盒检测效率低，因引物特异性的原因，难以在一个反应体系中，同时检测多种病毒；另外检测准确度低，会发生交叉反应性，容易出现假阳性或者假阴性的结果；并且检测灵敏度低，难以实现病毒的滴度微量的病毒的检测。
专利技术内容
[0004]为了克服现有技术中的上述不足，本专利技术的目的之一在于提供一种引物探针组合物，可以实现引物对和探针的特异性高效率的扩增。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒核酸联合检测试剂盒，可以实现一管多检，彻底解决了现有技术中试剂盒检测效率低、特异性差以及灵敏度低的问题。
[0006]本专利技术的目的之三在于提供非诊断目的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的方法，可以实现操作便捷地对甲型流感病毒、乙型流感病毒或呼吸道合胞病毒进行检测，并且结果准确度高。
[0007]为了实现上述目的之一，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供一种引物探针组合物，包括以下组分：甲型流感病毒的上游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示；甲型流感病毒的下游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:2所示；甲型流感病毒的探针，其核酸序列如SEQ ID NO:3所示；乙型流感病毒的上游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:4所示；
乙型流感病毒的下游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:5所示；乙型流感病毒的探针，其核酸序列如SEQ ID NO:6所示；呼吸道合胞病毒的上游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:7所示；呼吸道合胞病毒的下游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:8所示；呼吸道合胞病毒的探针，其核酸序列如SEQ ID NO:9所示。
[0008]其中，所述SEQ ID NO:3所示探针的5
’
端标记VIC荧光基团，3
’
端标记BHQ1猝灭基团；所述SEQ ID NO:6所示探针的5
’
端标记ROX荧光基团，3
’
端标记BHQ2猝灭基团；所述SEQ ID NO:9所示探针的5
’
端标记FAM荧光基团，3
’
端标记BHQ1猝灭基团。
[0009]为了实现上述目的之二，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒，所述试剂盒包括含有权利要求1或2所述引物探针组合的PCR反应液。
[0010]其中，所述PCR反应液还包括PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和反转录酶。
[0011]其中，所述试剂盒还包括阳性质控品和阴性质控品，所述阳性质控品为灭活的甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒基因片段的混合物，所述阴性质控品为灭活的内标基因片段，所述灭活的内标基因片段为人核糖核酸酶P的基因片段。
[0012]其中，所述反应液还包括所述人核糖核酸酶P的基因片段的上游引物、下游引物和探针，所述上游引物的核酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述下游引物的核酸序列如SEQ ID NO:11所示，所述探针的核酸序列如SEQ ID NO:12所示。
[0013]其中，所述SEQ ID NO:12所示探针的5
’
端标记CY5荧光基团，3
’
端标记BHQ2猝灭基团。
[0014]为了实现上述目的之三，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供一种非诊断目的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的方法，其以本专利技术所述的试剂盒对样本核酸进行检测，根据荧光信号判断样品是否存在甲型流感病毒、乙型流感病毒或呼吸道合胞病毒。
[0015]进一步地，将所述PCR反应液、DNA聚合酶、反转录酶和样本核酸按以下反应体系的配比配制成核酸扩增反应混合液进行PCR反应，所述反应体系的配比如下：
进一步地，所述扩增的程序包括：与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果如下：（1）本专利技术的一种引物探针组合物，该组合物中的上下游引物和探针有良好的特异性，避免脱靶效应，保证检测结果更准确。
[0016]（2）本专利技术的一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的试剂盒，使用该试剂盒检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒，检测特异性高，不发生
交叉反应，并且检测准确度和灵敏度高，可以实现一管多检，检测效率高，与现有的市售试剂盒相比，该试剂盒更优越。
[0017]（3）本专利技术的一种非诊断目的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒的方法，采用q
‑
PCR的方法对甲型流感病毒、乙型流感病毒或呼吸道合胞病毒进行检测，操作便捷，结果准确。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1是本申请实施例提供的试剂盒对甲型流感病毒进行检测的扩增曲线图。
[0020]图2是本申请实施例提供的试剂盒对乙型流感病毒进行检测的扩增曲线图。
[0021]图3是本申请实施例提供的试剂盒对呼吸道合胞病毒进行检测的扩增曲线图。
[0022]图4是本申请实施例提供的试剂盒进行交叉反应检测的扩增曲线图。
[0023]图5是本申请实施例提供的试剂盒进行甲型流感病毒灵敏度检测的扩增曲线图。
[0024]图6是本申请实施例提供的试剂盒进行乙型流感病毒灵敏度检测的扩增曲线图。
[0025]图7是本申请实施例提供的试剂盒进行呼吸道合胞病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种引物探针组合物，其特征在于，包括以下组分：甲型流感病毒的上游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示；甲型流感病毒的下游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:2所示；甲型流感病毒的探针，其核酸序列如SEQ ID NO:3所示；乙型流感病毒的上游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:4所示；乙型流感病毒的下游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:5所示；乙型流感病毒的探针，其核酸序列如SEQ ID NO:6所示；呼吸道合胞病毒的上游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:7所示；呼吸道合胞病毒的下游引物，其核酸序列如SEQ ID NO:8所示；呼吸道合胞病毒的探针，其核酸序列如SEQ ID NO:9所示。2.根据权利要求1所述的一种引物探针组合物，其特征在于，所述SEQ ID NO:3所示探针的5
’
端标记VIC荧光基团，3
’
端标记BHQ1猝灭基团；所述SEQ ID NO:6所示探针的5
’
端标记ROX荧光基团，3
’
端标记BHQ2猝灭基团；所述SEQ ID NO:9所示探针的5
’
端标记FAM荧光基团，3
’
端标记BHQ1猝灭基团。3.一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括含有权利要求1或2所述的引物探针组合物的PCR反应液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液还包括PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和反转录酶。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性质控品和阴性质控品，所述阳性质控品为灭活的甲型流感病毒、乙型流感病毒及呼吸道合胞病毒基因片段的混合物，所述阴性质控品为灭活的内标基因片段，所述灭活的内标基因片段为人核糖核酸酶P的基因片段。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述反应液还包括所述人核糖核酸酶P的基因片段的上游引物、下游引物和探针，所述上游引物的核酸序列如SEQ ID NO:10所示，所述下游引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娇娇，
申请(专利权)人：广州科方生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：