可切换嵌合抗原受体工程化的人自然杀伤细胞制造技术

具有可切换嵌合抗原受体的工程化的自然杀伤细胞、制造方法、药物组合物以及用于治疗癌症和病毒感染的方法。癌症和病毒感染的方法。癌症和病毒感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可切换嵌合抗原受体工程化的人自然杀伤细胞
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2019年3月22日提交的美国临时申请第62/822,389号的优先权权益，所述美国临时申请通过引用并入本文中。


[0003]本专利技术涉及工程化的免疫疗法。

技术介绍

[0004]现有的基于CAR工程化的T细胞(CAR
‑
T)的疗法代表了近年来开发的最成功的免疫疗法方法之一。大多数CAR
‑
T细胞疗法已在临床上用于通过靶向B细胞特异性抗原CD19来治疗血液恶性肿瘤。然而，由于T细胞的一些内在特性，包含限制其严格用于自体患者的同种异体反应性以及由不受控制的增殖或不受控制的细胞因子释放引起的副作用，这种方法并非没有限制。另一方面，NK细胞起同种异体细胞毒性效应细胞的作用，所述同种异体细胞毒性效应细胞不必基于患者特异性应用，不需要事先致敏并且被证明毒性较小。由于这些原因，CAR工程化的NK(CAR
‑
NK)细胞作为替代性CAR细胞疗法越来越引起关注。然而，还存在其它未解决的挑战。由于缺乏真正的肿瘤特异性抗原，针对实体瘤的靶向性基于CAR的疗法一直具有挑战性，因为大多数靶标由非恶性细胞所共享并且由于“在靶(on
‑
target)、肿瘤外(off
‑
tumor)”效应可能导致毒性。”可微调CAR疗法可用于更好地鉴定和靶向肿瘤，同时限制这种毒性。第二个挑战是难以扩大CAR细胞的制造速率以满足患者的需求。这是因为常规的CAR细胞是在针对一个靶标的一个CAR的基础上以刚性形式产生的。制备具有一种特异性的每个细胞批次需要时间、成本和复杂的制造设施，这通常使大多数患者无法接受治疗。最近开发的将效应细胞活化功能与抗原识别功能解偶的sCAR被设计成克服这些障碍。
[0005]过继细胞治疗的一个关键目标是精确控制治疗细胞群的抗肿瘤活性。目前策略，如FDA批准的抗CD19 CAR
‑
T细胞(tisageleclecuel(Kymriah)和axicabtagene ciloleucel(Yescarta))非常有效，但会导致使患者出现显著的免疫抑制和感染易感性
1,2
的长期(可能是永久性的)B细胞发育不全和低丙球蛋白血症。此外，如CAR介导的细胞因子释放综合征等毒性和神经毒性可能难以控制，并且在一些情况下会导致显著的发病率以及甚至死亡率1‑3。CAR所靶向的许多肿瘤抗原可能导致“在靶、肿瘤外”毒性，如已经充分综述的
1,2
。例如，在患有结肠癌的患者中，通过CAR
‑
T细胞靶向癌胚抗原由于正常结肠组织的抗原识别而导致严重结肠炎4。不幸的是，用抗Her2 CAR
‑
T细胞治疗患者会导致死亡，很可能是由于Her2在肺细胞上的表达5。同样，针对AML抗原的CAR也是有问题的，因为大多数CAR也由正常造血干细胞共享，可能导致骨髓发育不全延长6‑8。已经提出使用如自杀开关和基于RNA的CAR表达等选项控制CAR
‑
T细胞活性
1,9
‑
11
。然而，杀伤开关不提供对T细胞活化和扩增的控制，并且导致潜在治疗性CAR
‑
T细胞的不可逆消除。基于RNA的系统仅导致短暂的CAR表达、较低的抗肿瘤活性并且不能捕获完全动态和可滴定的开/关活性
9,10
。
[0006]先前使用sCAR
‑
T细胞的研究证明了免疫突触的选择性形成，其中sCAR
‑
T细胞、开
关和靶细胞全部以结构明确和时间控制的方式相互作用。此sCAR
‑
T细胞系统已显示出对CD19+细胞B细胞恶性肿瘤的强效杀伤作用，包含产生T中枢记忆(Tcm)群体，所述群体能够有效地重新给药可溶性开关组分(仅施用单剂量的sCAR
‑
T细胞)以治疗复发性疾病
12,13
。可溶性开关的使用也实现CAR接合的精确滴定。例如，可以首先用低剂量的开关治疗患者以使CRS或神经毒性最小化，然后用更高的后续剂量治疗患者以增加抗肿瘤活性。此外，此系统能够轻易地使用多于一个开关组件，以使得能够双重靶向肿瘤细胞抗原，以便预防由于单个肿瘤抗原的丢失而导致的复发
12,13
。迄今为止，临床前研究表明，这些sCAR
‑
T细胞不仅能靶向并杀伤CD19
+
B细胞恶性肿瘤，还能通过抗Her2开关靶向并杀伤乳腺癌和胰腺癌
12
‑
15
。
[0007]最后，已经提出了许多其它基于CAR的系统，如Syn
‑
Notch系统、“条件CAR”、其它开关介导的CAR以及其它系统，以改善实体瘤的靶向性，同时维持对治疗的安全性和控制
2,16
‑
18
。

技术实现思路

[0008]本公开提供了一种用可切换嵌合抗原受体(sCAR)工程化的自然杀伤(NK)细胞、其制造方法和使用方法。
[0009]在实施例中，本专利技术提供了一种用可切换嵌合抗原受体(sCAR)工程化的自然杀伤(NK)细胞。在实施例中，所述sCAR包括对与肽新抗原表位(PNE)结合具有特异性的抗体scFv区。在实施例中，所述sCAR进一步包括NKG2D跨膜结构域、2B4共刺激结构域和/或CD3ζ链(或其突变)。在实施例中，所述NK细胞进一步包括与所述sCAR结合的开关，其中所述开关包括与抗癌或抗病毒抗体Fab区融合的肽新抗原表位(PNE)，所述抗癌或抗病毒抗体Fab区对与癌症抗原或病毒抗原结合具有特异性。在实施例中，所述癌症抗原是CD19或卷曲蛋白7(Frizzled 7)。在实施例中，本专利技术提供的是，所述癌症或病毒抗原可以是本文所公开的或本领域已知的那些癌症或病毒抗原中的任何癌症或病毒抗原。在实施例中，所述NK细胞源自人诱导的多能细胞。
[0010]在实施例中，本专利技术提供了一种治疗受试者的癌症或病毒的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的自然杀伤(NK)细胞，所述NK细胞用针对所述癌症或所述病毒的抗原活化的可切换嵌合抗原受体(sCAR)工程化。
[0011]在实施例中，所述sCAR包括对与肽新抗原表位(PNE)结合具有特异性的抗体scFv区。在实施例中，所述sCAR进一步包括NKG2D跨膜结构域、2B4共刺激结构域和CD3ζ链。
[0012]在实施例中，所述sCAR通过与开关结合而被进一步活化，其中所述开关包括分别与抗癌或抗病毒抗体Fab区融合的PNE，所述抗癌或抗病毒抗体Fab区对与所述癌症抗原或所述病毒抗原结合具有特异性。在实施例中，所述癌症抗原是CD19或卷曲蛋白7。在实施例中，本专利技术提供的是，所述癌症或病毒抗原可以是本文所公开的或本领域已知的那些癌症或病毒抗原中的任何癌症或病毒抗原。
[0013]在实施例中，所述NK细胞是同种异体的。在实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种自然杀伤(NK)细胞，其用可切换嵌合抗原受体(sCAR)工程化。2.根据权利要求1所述的NK细胞，其中所述sCAR包括对与肽新抗原表位(PNE)结合具有特异性的抗体scFv区。3.根据权利要求2所述的NK细胞，其中所述sCAR进一步包括NKG2D跨膜结构域、2B4共刺激结构域和CD3ζ链。4.根据权利要求3所述的NK细胞，其进一步包括与所述sCAR结合的开关，其中所述开关包括与抗癌或抗病毒抗体Fab区融合的PNE，所述抗癌或抗病毒抗体Fab区对与癌症抗原或病毒抗原结合具有特异性。5.根据权利要求5所述的NK细胞，其中所述癌症抗原是CD19或卷曲蛋白7(Frizzled 7)。6.根据权利要求1所述的NK细胞，其中所述NK细胞源自人诱导的多能细胞。7.一种治疗受试者的癌症或病毒的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的自然杀伤(NK)细胞，所述NK细胞用针对所述癌症或所述病毒的抗原活化的可切换嵌合抗原受体(sCAR)工程化。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述sCAR包括对与肽新抗原表位(PNE)结合具有特异性的抗体scFv区。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述sCAR进一步包括NKG2D跨膜结构域、2B4共刺激结构域和CD3ζ链。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述sCAR通过与开关结合而被活化，其中所述开关包括分别与抗癌或抗病毒抗体Fab区融合的PNE，所述抗癌或抗病毒抗体Fab区对与所述癌症抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：斯克利普斯研究所，
类型：发明
国别省市：