一种用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒及其制备方法，其中，所述试剂盒包括11

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒及其制备方法，属于生化检测领域。

技术介绍

[0002]11
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脱氢血栓素B2（11
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dehydro
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thromboxaneB2，11
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DH
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TXB2）是血栓烷素A2（TXA2）的终末代谢产物，主要经肾排出，在止血及心血管疾病的发生过程中均起到重要作用。花生四烯酸在前列腺素H合成酶1和2（COX
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1和COX
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2）的作用下生成前列腺素H。前列腺素H化学性质不稳定，可在异构酶的作用下转化为多种具有生物活性的前列腺素类物质，包括TXA2、前列环素I2、前列腺素D2、前列腺素E2及前列腺素F2α等。TXA2主要经COX
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1途径在血小板中合成，新生的血小板同时表达COX
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1和COX
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2，而成熟血小板仅表达COX
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1，COX
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2则主要表达于单核细胞、内皮细胞等有核细胞中。TXA2有强烈的缩血管作用，还可通过结合血栓烷素血小板受体（TPR）激活血小板，促进其聚集，从而发挥促血栓形成作用。除TXA2外，凝血酶、胶原和腺苷二磷酸（ADP）亦能通过其他通路激活血小板。TXA2高度不稳定，会迅速被水解为较稳定的血栓烷素B2（thromboxaneB2，TXB2）。TXB2随后在肝中被转化为半衰期更长的11
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DH
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TXB2，并经尿液排出。TXA2则是花生四烯酸在环氧合酶（COX）作用下产生的具有促血小板聚集、收缩血管等生物活性作用的物质，在血栓形成过程中有重要作用。阿司匹林能通过不可逆地抑制COX
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1活性，减少TXA2合成，从而抑制血小板聚集及其在冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）发展和急性冠状动脉综合征（ACS）发生中的作用。TXA2的代谢产物11
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DH
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TXB2水平能反映血小板活性及阿司匹林的抗血小板效果。
[0003]阿司匹林能通过抑制血小板COX
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1活性有效抑制血小板功能，从而降低心血管事件风险。尿11
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DH
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TXB2浓度反映血栓烷素的整体合成水平，因而能直接反映阿司匹林对血栓烷素合成及对血小板功能的抑制效果。通过研究既往文献中冠心病及相关人群的尿11
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DH
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TXB2水平及阿司匹林反应性，得出以下结论：（1）冠心病危险人群及冠心病患者（尤其是ACS患者）基础（未应用阿司匹林时）尿11
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DH
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TXB2水平明显高于健康人群，且与危险因素水平有正相关趋势，提示血小板活性逐渐增加；性别、年龄、体重等因素也对血栓烷素代谢有一定影响；（2）应用阿司匹林能显著降低所有人群的尿11
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DH
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TXB2水平，抑制率为60％～80％；（3）高危人群及冠心病应用阿司匹林后的尿11
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DH
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TXB2水平亦明显高于健康人群，提示有更高的HAPR发生率及心血管不良事件发生风险；（4）PCI能显著提高尿11
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DH
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TXB2排泌，提示血小板大量激活，CABG术则没有这种效果；（5）多数预后研究支持应用阿司匹林后尿11
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DH
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TXB2高水平所提示的HAPR与心血管事件发生率增加有关。减少尿11
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DH
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TXB2排泌的措施可改善阿司匹林反应，或可降低心血管不良事件风险。
[0004]体外血小板激活会明显影响血清TXB2的测定结果，却对血清11
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DH
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TXB2水平无影响，同时尿液与血清中11
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DH
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TXB2的浓度有良好的相关性，因而测定尿液11dhTXB2的含量能更有效地反映体内TXA2的产生。11
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DH
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TXB2的检测方法包括放射免疫法（RIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）及液相色谱
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串联质谱法（LC
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MS/MS）。由于11
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DH
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TXB2的分子量较小，且在
尿液中的浓度不高，目前多采用ELISA法进行测定。所使用的11
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DH
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TXB2抗体有单克隆抗体和多克隆抗体两种，测得的尿11
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DH
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TXB2浓度需用尿肌酸酐浓度进行校正，以排除尿液浓度和肾功能的影响，因此可用随机尿样本进行检测。虽然LC
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MS/MS法应用时间较ELISA与RIA短，但能较为特异地检测11
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DH
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TXB2，检测结果变异率也更小。酶联免疫目前还是检测阿司匹林代谢情况的金标准，但目前的酶免存在假阳率高，准确率差的问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的目的是获得一种用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒及其制备方法。
[0006]为实现上述专利技术目的之一，本专利技术采用的用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒的技术方案如下：所述试剂盒包括11
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脱氢血栓烷B2的单克隆抗体包被的酶标板、11
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脱氢血栓烷B2竞争品、显色底物、终止液和系列浓度的11
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去氢血栓素B2标准溶液，其中单克隆抗体为鼠单抗，鼠单抗轻链可变区氨基酸序列如序列表SEQIDNO.2所示，鼠单抗重链可变区氨基酸序列如序列表SEQIDNO.4所示。
[0007]优选的，所述11
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脱氢血栓烷B2竞争品为辣根过氧化物酶（HRP）标记的11
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DH
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TXB2。
[0008]优选的，所述试剂盒还包括质控品或校准品11
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DH
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TXB2。
[0009]优选的，所述酶标板为包被11
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脱氢血栓烷B2的单克隆抗体包被的酶标板。
[0010]优选的，所述显色底物为酶促显色底物TMB。
[0011]优选的，所述系列浓度的11
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去氢血栓素B2标准溶液为浓度范围在100pg/ml~8000pg/ml之间的梯度溶液。
[0012]优选的，所述终止液为3%体积百分比的盐酸溶液。
[0013]优选的，所述待测样品为尿液样品。
[0014]本专利技术还提供了用于评估阿司匹林代谢能力的方法，所述11
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DH
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TXB2浓度的判断方法包括如下步骤：1)向本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括11
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脱氢血栓烷B2的单克隆抗体包被的酶标板、11
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脱氢血栓烷B2竞争品、显色底物、终止液和11
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去氢血栓素B2标准溶液，所述11
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脱氢血栓烷B2的单克隆抗体为鼠单抗，鼠单抗轻链可变区氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示，鼠单抗重链可变区氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。2.根据权利要求1所述的用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒，其特征在于，所述11
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脱氢血栓烷B2竞争品为辣根过氧化物酶标记的11
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DH
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TXB2。3.根据权利要求1所述的用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒，其特征在于，所述酶标板为包被11
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脱氢血栓烷B2的单克隆抗体包被的酶标板。4.根据权利要求1所述的用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒，其特征在于，所述显色底物为酶促显色底物TMB。5.根据权利要求1所述的用于检测阿司匹林代谢能力的检测试剂盒，其特征在于，所述11
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去氢血栓素B2标准溶液为浓度范围在100 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丹，易倩春，
申请(专利权)人：湖南菲思特精准医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：