一种松材线虫快速检测试纸卡及其制备和使用方法技术

一种松材线虫快速检测试纸卡及其制备和使用方法，包括卡壳和试纸条，试纸条底部为底板，底板上依次设置样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的硝酸纤维素膜上设置C线和T线。制备方法包括制成标签抗体

【技术实现步骤摘要】
一种松材线虫快速检测试纸卡及其制备和使用方法


[0001]本专利技术属于快速检测
，特别涉及一种松材线虫快速检测试纸卡及其制备和使用方法。

技术介绍

[0002]松属植物作为常见的绿化树种，用途十分广泛，可作为工业原料、日常用品原料等。然而，植物虫害时刻威胁着松属植物的生长。
[0003]传统松材线虫的检验检疫方法是用贝尔曼漏斗法分离出线虫后，在光学显微镜下依据线虫的形态特征来进行鉴定；这种方法费时费工，需要2个工作日，不适应口岸检疫快速通关的要求。而松材线虫的近缘种拟松材线虫在形态上与松材线虫极其相似，常单生或与松材线虫混居于松木样品中，给形态学鉴定造成困难，使松材线虫的检疫和防控工作受到严重影响，特别是口岸检疫。随着分子生物学技术的发展，PCR检测技术逐渐成为有害生物检测，特别是病原检测的利器，核糖体基因rDNA就是目前分子系统学中普遍采用的分子标记之一。松材线虫的rDNA基因由保守的18S、5.8S和2S基因编码区以及其间的非编码间隔区，ITS1和ITS2组成，由于ITS区为非编码区，不编码功能基因，因此变异程度较高，是对松本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种松材线虫快速检测试纸卡，其特征在于包括卡壳和试纸条，试纸条底部为底板，底板上依次设置样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的硝酸纤维素膜上设置C线和T线；试纸条装配在卡壳内，卡壳上设有加样孔和观察孔，加样孔与粘贴样品垫相对，观察孔与硝酸纤维素膜、C线和T线相对；金标垫上涂覆有标签抗体，该标签抗体为胶体金标记的特异性鼠抗单克隆抗体；T线处涂覆有包被抗体，该包被抗体为特异性鼠抗单克隆抗体；C线处涂覆有羊抗鼠IgG二抗。2.根据权利要求1所述的松材线虫快速检测试纸卡，其特征在于所述的底板上从前端到后端依次设置样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；样品垫的后端与金标垫的前端交叠放置，硝酸纤维素膜的前端与金标垫的后端交叠放置，吸水纸的前端与硝酸纤维素膜的后端交叠放置。3.根据权利要求1所述的松材线虫快速检测试纸卡，其特征在于所述的C线的轴线与硝酸纤维素膜的轴线垂直；T线的轴线与硝酸纤维素膜的轴线垂直；T线位于C线和金标垫之间。4.一种权利要求1所述的松材线虫快速检测试纸卡的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：(1)将0.5～2g氯化金粉末溶于100mL超纯水中，制成氯化金溶液；将0.1～0.5g柠檬酸三钠溶解于10mL超纯水中，制成柠檬酸三纳溶液；(2)将1.0～2.0mL氯化金溶液加入到100mL超纯水中，再搅拌加热至沸腾，然后加入1.0～1.5mL柠檬酸三钠溶液，在保持沸腾的条件下继续搅拌至全部溶液呈透明酒红色，制成胶体金溶液；(3)将1mL胶体金溶液用K2CO3溶液调节pH值为5.0～8.0，再加入5～50μg标签抗体，搅拌混合反应15～30min，再加入BSA搅拌混合反应15～30min，制成标签抗体
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胶体金溶液；BSA在标签抗体
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胶体金溶液中的质量浓度为1～10％；(4)将Tris、海藻糖和蔗糖溶于水中，用盐酸调节pH值为5.0～9.0，制成标签抗体稀释液；标签抗体稀释液中Tris的浓度为0.01～0.1M，海藻糖的质量浓度为1～10％，蔗糖的质量浓度为1～10％；(5)将标签抗体
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胶体金溶液离心至少30min，然后分离去除上清液，剩余的沉淀用0.05～0.5mL标签抗体稀释液溶解，制成标签抗体
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胶体金工作液；(6)将Tris、PVP、BSA和蔗糖溶于水中，用盐酸调节pH值为5.0～9.0，制成金标垫处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雨晴，魏计东，周兴智，阎红，
申请(专利权)人：基因赛奥大连生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：