一种肺腺癌铁死亡敏感性三联标志物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，具体是一种肺腺癌铁死亡敏感性三联标志物及其应用，所述三联标志物是ACSL4、YAP和LPCAT3。该三联标志物可作为铁死亡敏感性标志物，且实验结果表明该标志物组合相较于单一使用以及其他组合的准确率都有显著性的提升。本发明专利技术还提供了该三联标志物在制备用于肺腺癌铁死亡检测试剂盒中的应用。其优点表现在：检测准确率高、成本低、操作简单，可很好的应用于临床上，有很强的实用性。实用性。实用性。

【技术实现步骤摘要】
一种肺腺癌铁死亡敏感性三联标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体地说，是一种肺腺癌铁死亡敏感性三联标志物及其应用。

技术介绍

[0002]2012年，哥伦比亚大学Stockwell实验室报道erastin等一类小分子抗肿瘤化合物能够诱导大量的细胞死亡，该类型细胞死亡依赖于细胞内的铁离子和脂质过氧化物，并将之命名为ferroptosis，即铁死亡，其在形态学、生物学及基因水平上均明显不同于凋亡、坏死、自噬等其他形式的细胞死亡。除了抑制肿瘤的功能，铁死亡的其余正常生理功能还未探明。但是铁死亡与许多人类疾病和治疗策略相关。铁死亡与癌症(如弥漫性大B细胞淋巴瘤、肾嫌色细胞癌、肝细胞癌等)、神经退行性疾病(如帕金森病，亨廷顿病和阿尔茨海默病)和组织缺血再灌注损伤(如急性肾衰竭和脑室周围白质软化)等疾病息息相关
[1,2,3,4]。在多种实验肿瘤模型中可以观察到铁死亡诱导剂抑制肿瘤的作用，这意味着诱导铁死亡可以作为一种新的抗肿瘤治疗方案。
[0003]根据2020年全球最新癌症负担数据
[5]，由于新发病例数的快速增长，乳腺癌取代肺癌成为全球第一大癌症。然而，肺癌死亡病例仍居所有癌症之首。在我国，肺癌的发病率和死亡率均位于癌症之首。肺腺癌是最常见的亚型，约占所有肺癌病例的40％
[6]。虽然手术切除是早期肺腺癌最有效的治疗方法，但晚期患者可能受益于辅助细胞毒治疗
[7,8]。然而，化疗耐药往往是肺腺癌患者复发的主要原因
[6]。最近，有研究表明顺铂耐药的肺腺癌细胞对铁死亡敏感，诱导铁死亡的疗法可以为顺铂治疗失败的肺腺癌患者提供新的治疗方案
[9]。与其他类型的癌症相似，肺腺癌对铁死亡的敏感性可能有所不同，是否存在某种标志物可预示肺腺癌细胞或患者样本对铁死亡的敏感程度尚不清楚。
[0004]中国专利申请：201510954097.4公开了一种用于预测肺腺癌患者预后及判断辅助化疗获益的系统，包括检测c
‑
Src、CyclinE1、TTF1、p65、CHK1和JNK1六种蛋白质表达量的系统和蛋白质表达量数据处理系统。检测上述六种蛋白质表达量的系统通过免疫组织化学染色方法测定蛋白质的表达量；蛋白质表达量数据处理系统将来自待预测肺腺癌患者的分离的肺腺癌组织中所述六种蛋白质表达量转换为预后分值，根据预后分值预测待肺腺癌患者的预后和/或待预测肺腺癌患者是否受益于辅助化疗。但该专利中涉及的标志物高达6种，检测方法较为繁杂，且并未涉及到铁死亡内容。
[0005]可见是否存在某种标志物可预示肺腺癌细胞或患者样本对铁死亡的敏感程度目前尚不清楚。而本专利技术首次创造性的提出将肺腺癌铁死亡敏感性的一种三联标志物，为肺腺癌患者提供了一种新的治疗方法，关于本专利技术一种肺腺癌铁死亡敏感性三联标志物及其应用目前还未见报道。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供一种肺腺癌铁死亡敏感性三联标志物
及其应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种预测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂盒，含有检测ACSL4、YAP和LPCAT3表达量的试剂。
[0009]优选地，所述试剂盒还可用于预测脂质活性氧含量。
[0010]第二方面，本专利技术提供了一种试剂组合在制备预测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂盒中的应用，所述试剂组合含有检测ACSL4、YAP和LPCAT3表达量的试剂。
[0011]第三方面，本专利技术提供了ACSL4、YAP和LPCAT3在制备预测肺腺癌铁死亡敏感性的药物中的应用。
[0012]第四方面，本专利技术提供了ACSL4、YAP和LPCAT3的促进剂在制备提高肺腺癌铁死亡敏感性的药物中的应用。
[0013]优选地，所述ACSL4、YAP和LPCAT3的促进剂是促进ACSL4、YAP和LPCAT3表达量的物质。
[0014]优选地，所述ACSL4、YAP和LPCAT3的促进剂选自小分子化合物或生物大分子。
[0015]本专利技术优点在于：
[0016]1、本专利技术首次将ACSL4、YAP和LPCAT3联合使用用于预测肺腺癌铁死亡敏感性，相较于现有技术中单一标志物在准确率上有了显著提升，表明ACSL4、YAP和LPCAT3之间协同作用，能指导临床制定个体化化疗方案，提高疗效。
[0017]2、方法简便、成本低，提高了患者的接受度以及为肺腺癌的治疗提供了一种新思路和解决方案，实用性强，应用前景广。
附图说明
[0018]附图1是肺腺癌细胞系对铁死亡的敏感程度存在差异。
[0019]附图2是LPCAT3与肺腺癌细胞系对铁死亡的敏感程度成正比。
[0020]附图3是LPCAT3表达水平和铁死亡敏感程度存在相关性。
[0021]附图4是LPCAT3敲除降低了肺腺癌细胞系对铁死亡的敏感程度。
[0022]附图5是LPCAT3表达量高的原代肺腺癌细胞对铁死亡更敏感。
[0023]附图6是判断YAP，LPCAT3，ACSL4联用作为铁死亡敏感性标志物。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0025]实施例1
[0026]1方法
[0027]1.1细胞、试剂和质粒
[0028]已建立的H358，H1650，PC9，H1975，A549和H1299细胞系均购自上海富衡生物科技有限公司。患者来源的原代肺腺癌细胞系来源于肺腺癌组织。将未坏死的小于1.0cm3的组
织用冰冷的DPBS冲洗3次，然后再重悬浮于含有胶原酶(2mg/ml，Solarbio,中国上海)的DMEM培养基中，37℃作用4h，再用DMEM洗涤3次后，在常规条件下进行细胞培养。对于正常细胞培养，细胞用DMEM+10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素双抗培养。
[0029]细胞实验所用的试剂为：Erastin(Sigma,St Louis,MO,USA),ferrostatin
‑
1(Fer
‑
1,Sigma)，SYTOX Green(Invitgen，Carbsland，CA，USA)，C11
‑
BODIPY581/591(Invitrogen)。
[0030]利用LentiCRISPRv2质粒(Addgene,Cambridge,MA,USA)构建LPCAT3的敲除载体。表达LPCAT3的质粒购自中国上海上海佐润生物科技有限公司。
[0031]1.2免疫印迹
[0032]将细胞蛋白裂解物在SDS聚丙烯酰胺凝胶中分离并转移到硝酸纤维素膜上。将膜在封闭缓冲液(含1％吐温<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂盒，其特征在于，含有检测ACSL4、YAP和LPCAT3表达量的试剂。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还可用于预测脂质活性氧含量。3.一种试剂组合在制备预测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂组合含有检测ACSL4、YAP和LPCAT3表达量的试剂。4.ACSL4、YAP和LPCAT3在制备预测肺腺癌铁...

【专利技术属性】
技术研发人员：张骁，王佳谊，王一琨，马丽芳，于永春，张聪聪，田晓婷，
申请(专利权)人：上海市胸科医院，
类型：发明
国别省市：