子宫内膜癌检测的试剂及试剂盒制造技术

本申请提供一种子宫内膜癌检测的试剂及试剂盒，通过对RAX基因CpG岛DNA甲基化水平的检测，实现子宫内膜癌诊断或辅助诊断，具有良好的灵敏性和特异性，且对I/II型子宫内膜癌均能有效检出，此外，该检测试剂在子宫内膜脱落细胞样本和血浆样本中亦能被检出，为子宫内膜癌的无创检测提供了新思路。癌的无创检测提供了新思路。癌的无创检测提供了新思路。

【技术实现步骤摘要】
子宫内膜癌检测的试剂及试剂盒


[0001]本申请涉及生物医药
，具体涉及一种子宫内膜癌的诊断的试剂及试剂盒。

技术介绍

[0002]子宫内膜癌(endometrial cancer)，又称子宫体癌，是中国女性最常见的三大妇科恶性肿瘤之一，在我国部分发达城市，其发病率居妇科恶性肿瘤的首位。随着营养结构的改善、生活习惯的改变和预期寿命的增加，子宫内膜癌的发病率可能会进一步增加，变成严重的公共卫生问题。
[0003]子宫内膜癌分为I型和II型，I型主要在高雌激素状态下在子宫内膜增生的基础上发展导致子宫内膜癌，为雌激素相关型。此型占多数，发病年龄相对年轻，多在绝经前，高分化，多为内膜样腺癌和黏液性腺癌，子宫肌层浸润较浅，常表达雌激素受体、孕激素受体，临床病理分期多为I和II期；II型多表现为子宫内膜萎缩，与雌激素关系不大，占小部分，发病年龄相对较大，多发生在绝经后，多为低分化，主要指子宫内膜乳头状浆液性腺癌，还包括透明细胞癌、未分化癌和鳞状细胞癌。在中国，子宫内膜癌患者的五年相对生存率总体上在55％左右。生存率大小与癌症分期有关，FIGO分期I
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II期的患者五年生存率在74％
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91％之间，III期在57％
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66％之间，IV期在20％
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26％之间，因此，早诊早治是提高生存率的关键。
[0004]目前子宫内膜癌的主要检测方法包括肿瘤标志物检查(CA125、CA19
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9、CEA、CP2或HE4)、影像学检查(经腹或经阴道超声、MRI、CT、PET
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CT)、细胞学检查、分段诊断性刮宫等。肿瘤标志物检测的灵敏性和特异性均不理想，影像学检查对早期癌变的灵敏性欠佳，细胞学检查存在取材、制片、阅片水平参差不齐，取材和制片的手法影响阅片结果，患者的身体状况(激素水平、炎症、节育环、内膜增生等)影响细胞形态，造成假阳性的缺点，分段诊断性刮宫有创并且容易引起并发症(出血、子宫穿孔、宫腔感染、宫腔粘连)，因此开发灵敏性和特异性均较高且取材微创/无创的子宫内膜癌检测方法意义重大。

技术实现思路

[0005]本申请提供一种子宫内膜癌的检测试剂及试剂盒，可以用于子宫内膜癌检测或辅助诊断，具有良好的灵敏性和特异性。
[0006]本申请提供一种子宫内膜癌检测的试剂，所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自RAX基因CpG岛的全长或部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。
[0007]可选的，所述RAX基因CpG岛的核苷酸序列包括SEQ ID NO.22及SEQ ID NO.23所示核苷酸序列中的至少一种。
[0008]可选的，所述部分区域的核苷酸序列包括SEQ ID NO.24至SEQ ID NO.29所示核苷酸序列中的至少一种。
[0009]可选的，所述试剂包括能检测所述靶核苷酸甲基化水平的特异性引物对。
[0010]可选的，所述引物对包括如下引物对中的任一组：
[0011]SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的组合；
[0012]SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的组合；
[0013]SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的组合；
[0014]SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的组合；
[0015]SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14的组合；和/或
[0016]SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17的组合。
[0017]可选的，所述试剂还包括能检测所述靶核苷酸甲基化水平的特异性探针，所述特异性探针选自：SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.15和/或SEQ ID NO.18中的至少一种。
[0018]可选的，所述试剂包括：
[0019]能差异修饰所述DNA样本中的甲基化位点和非甲基化位点的反应试剂；以及，能通过甲基化检测方法确定所述靶核苷酸中的特定CpG二核苷酸位点中的胞嘧啶的甲基化水平的检测试剂。
[0020]可选的，所述反应试剂包括重亚硫酸盐或其衍生物；和/或，所述检测试剂包括内参基因以及所述内参基因对应的引物对和探针；和/或，所述甲基化检测方法包括：甲基化特异性PCR方法、亚硫酸氢盐测序法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法和甲基化敏感性限制性内切酶法。
[0021]可选的，所述DNA样本来自哺乳动物的离体生物学样本，所述哺乳动物的离体生物学样本来自血液、子宫内膜组织及子宫内膜的细胞样本中的至少一种。
[0022]相应的，本申请还提供一种用于子宫内膜癌检测的试剂盒，包括以上所述的试剂。
[0023]有益效果：
[0024]本申请提供一种子宫内膜癌的检测和诊断的试剂及试剂盒，通过将RAX基因作为目标基因，检测RAX基因中CpG二核苷酸位点是否发生甲基化，用于子宫内膜癌检测或辅助诊断，具有良好的灵敏性和特异性，且对I/II型子宫内膜癌以及各个时期的子宫内膜癌均能有效检出，此外，该检测试剂在子宫内膜脱落细胞样本和血浆样本中亦能被检出，为子宫内膜癌的无创检测提供了新思路。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0026]图1为本申请实施例1～实施例6对应的子宫内膜脱落细胞癌症样本和正常样本的ROC曲线。
[0027]图2为本申请实施例1～实施例6对应的子宫内膜癌血浆样本和正常样本的ROC曲线。
具体实施方式
[0028]下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。需说明的是，以下实施例的描述顺序不作为对实施例优选顺序的限定。另外，在本申请的描述中，术语“包括”是指“包括但不限于”。
[0029]首先，本申请提供了一种用于子宫内膜癌检测的试剂。所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG(胞嘧啶
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磷酸
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鸟嘌呤)二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自RAX基因CpG岛的全长或部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。
[0030]专利技术人在研究过程中发现，RAX基因CpG岛的甲基化水平与子宫内膜癌相关，检测RAX基因CpG岛区域甲基化的增加可以对子宫内膜癌进行诊断或辅助诊断。
[0031]术语“DNA甲基化水平”与一般理解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种子宫内膜癌检测的试剂，其特征在于，所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自RAX基因CpG岛的全长或部分区域，其中所述部分区域至少包括一个CpG二核苷酸位点。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述RAX基因CpG岛的核苷酸序列包括SEQ ID NO.22及SEQ ID NO.23所示核苷酸序列中的至少一种。3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述部分区域的核苷酸序列包括SEQ ID NO.24至SEQ ID NO.29所示核苷酸序列中的至少一种。4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括能检测所述靶核苷酸甲基化水平的特异性引物对。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述引物对包括如下引物对中的任一组：SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的组合；SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的组合；SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的组合；SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的组合；SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14的组合；和/或SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17的组合。6.根据权利要求4或5所述的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏雅婷，郭洪，王方媛，郑义慧，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：