检测头颈鳞状细胞癌的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种检测头颈鳞状细胞癌的试剂及其应用。以GRCh38.p14为参考，目标区域为Chr6:137493196‑137494301或者其部分区域。通过检测OLIG3基因CpG岛及其临近区域DNA的甲基化水平的变化，即以Chr6:137493196‑137494301为目标区域进行甲基化水平检测，能够有效区分头颈鳞状细胞癌患者和健康人，灵敏度高，特异性强，为头颈鳞状细胞癌的诊断提供了新的思路。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学，具体而言，涉及一种检测头颈鳞状细胞癌的试剂及其应用。

技术介绍

1、头颈癌是指一组起源于上呼吸道和部分上消化道器官的恶性肿瘤，其发生部位包括口腔、口咽、下咽、喉等。据统计，在2018年，全球有705781例新发头颈癌病例，并有358144例患者死于头颈癌。在头颈部肿瘤中，超过90％的癌症属于头颈鳞状细胞癌(head andneck squamous cell carcinoma,hnscc)。头颈鳞状细胞癌多发生于口腔、咽喉部的黏膜，发病部位较隐匿，临床上早期症状不典型，又缺少能够早期发现病变的生物标记物，因此不易被早期发现，超过半数以上的患者都是在病变中晚期的时候才确诊，这时多数患者已出现淋巴结和/或远处转移，给该病的临床治疗带来较大困难。目前，尽管头颈鳞状细胞癌的诊疗技术已经显著提高，但该病预后仍然较差，5年生存率低于50％。

2、头颈鳞状细胞癌患者的生存率和生活质量与确诊时原发部位的肿瘤大小直接相关，且一旦患者的口咽部出现无法愈合的肿块或疼痛、吞咽困难、呼吸困难等与癌症相关的症状，则成功治疗的可能性就大大降低。因此，在尚无症状的高危人群中进行早期筛查和诊断是十分必要的。

3、近年来，体液活检技术已成为检测和监控疾病各个阶段发展状态的最有前景的工具，为精准医疗提供了有力支持。体液中的循环标志物如循环肿瘤细胞、循环肿瘤dna和外泌体等可以反映肿瘤原发部位的信息。因此，筛选高灵敏度、高特异性的分子标记物，采用体液活检的方式对头颈鳞状细胞癌患者进行早期诊断或辅助诊断具有积极的意义。</p>

4、有鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

1、本申请实施例的目的之一包括将检测chr6:137493196-137494301或者其部分区域的甲基化水平的试剂用于制备头颈鳞状细胞癌诊断产品，采用该诊断产品进行头颈鳞状细胞癌的诊断，灵敏度高，特异性强。

2、在本申请的第一方面，提供检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备头颈鳞状细胞癌诊断产品中的应用；

3、以grch38.p14为参考，所述目标区域为chr6:137493196-137494301或者其部分区域。

4、在本申请的一些实施方式中，所述部分区域包括如下定义的区域1至区域11中的一个或者多个：

5、区域1为chr6:137493196-137493305，正链；

6、区域2为chr6:137493358-137493519，正链；

7、区域3为chr6:137493512-137493649，正链；

8、区域4为chr6:137493664-137493803，正链；

9、区域5为chr6:137493804-137493898，正链；

10、区域6为chr6:137493921-137494067，正链；

11、区域7为chr6:137494135-137494301，正链；

12、区域8为chr6:137493920-137494054，负链；

13、区域9为chr6:137493817-137493919，负链；

14、区域10为chr6:137493573-137493687，负链；和

15、区域11为chr6:137493200-137493308，负链。

16、在本申请的一些实施方式中，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性pcr法、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组亚硫酸氢盐测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字pcr法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和甲基化特异性荧光定量pcr法。

17、在本申请的一些实施方式中，所述试剂包括检测所述目标区域甲基化水平的检测引物对以及检测探针。

18、在本申请的一些实施方式中，所述试剂具有如下技术特征中的一个或者多个：

19、(1)检测所述区域1的检测引物对如seq id no.7和seq id no.8所示，检测探针如seq id no.9所示；

20、(2)检测所述区域2的检测引物对如seq id no.10和seq id no.11所示，检测探针如seq id no.12所示；

21、(3)检测所述区域3的检测引物对如seq id no.13和seq id no.14所示，检测探针如seq id no.15所示；

22、(4)检测所述区域4的检测引物对如seq id no.16和seq id no.17所示，检测探针如seq id no.18所示；

23、(5)检测所述区域5的检测引物对如seq id no.19和seq id no.20所示，检测探针如seq id no.21所示；和，

24、(6)检测所述区域6的检测引物对如seq id no.22和seq id no.23所示，检测探针如seq id no.24所示；

25、(7)检测所述区域7的检测引物对如seq id no.25和seq id no.26所示，检测探针如seq id no.27所示；

26、(8)检测所述区域8的检测引物对如seq id no.28和seq id no.29所示，检测探针如seq id no.30所示；

27、(9)检测所述区域9的检测引物对如seq id no.31和seq id no.32所示，检测探针如seq id no.33所示；

28、(10)检测所述区域10的检测引物对如seq id no.34和seq id no.35所示，检测探针如seq id no.36所示；和，

29、(11)检测所述区域10的检测引物对如seq id no.37和seq id no.38所示，检测探针如seq id no.39所示。

30、在本申请的一些实施方式中，所述试剂还包含检测内参基因的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针；所述内参基因包含actb基因。

31、在本申请的一些实施方式中，检测所述actb基因的检测引物对如seq id no.62和seq id no.63所示，以及检测探针如seq id no.64所示。

32、在本申请的一些实施方式中，检测的样本类型包括血浆样本、细胞样本或者组织样本。

33、在本申请的第二方面，提供一种头颈鳞状细胞癌诊断试剂盒，包括第一方面中所定义的试剂。

34、在本申请的一些实施方式中，所述诊断试剂盒还包括测序试剂、扩增试剂、将未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂、dna提取试剂纯化试剂中的一种或者多种。

35、在本申请的一些实施方式中，所述扩增试剂包括扩增缓冲液、dntps、dna聚合酶和mg2+中的一种或者多种。

36、本本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备头颈鳞状细胞癌诊断产品中的应用；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述部分区域包括如下定义的区域1至区域11中的一个或者多个：

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性PCR法、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组亚硫酸氢盐测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和甲基化特异性荧光定量PCR法。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述目标区域甲基化水平的检测引物对以及检测探针。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测引物对以及检测探针选自如下一组或者多组：

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂还包含检测内参基因的检测引物对和所述检测引物对对应的检测探针；所述内参基因包含ACTB基因；

7.根据权利要求1、2、4至6中任一项所述的应用，其特征在于，检测的样本类型包括血浆样本、细胞样本或者组织样本。

8.一种头颈鳞状细胞癌诊断试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至7任一项所定义的试剂。

9.根据权利要求8所述的头颈鳞状细胞癌诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒还包括测序试剂、扩增试剂、将未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶的试剂、DNA提取试剂和纯化试剂中的一种或者多种。

10.根据权利要求9所述的头颈鳞状细胞癌诊断试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂包括扩增缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和Mg2+中的一种或者多种。

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【技术特征摘要】

1.检测目标区域的甲基化水平的试剂在制备头颈鳞状细胞癌诊断产品中的应用；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述部分区域包括如下定义的区域1至区域11中的一个或者多个：

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂通过如下方法中的一种或多种实现对所述目标区域的甲基化水平的检测：甲基化特异性pcr法、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组亚硫酸氢盐测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字pcr法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法和甲基化特异性荧光定量pcr法。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述目标区域甲基化水平的检测引物对以及检测探针。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测引物对以及检测探针选...

【专利技术属性】
技术研发人员：周谛晗，董兰兰，张良禄，刘成杰，洪瑶，刘严，李肖燕，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：