分子标志物CHMP4C在HPV病毒感染所致宫颈癌中的应用制造技术

本发明专利技术属于医药生物技术领域，具体涉及分子标志物CHMP4C在HPV病毒感染所致宫颈癌中的应用。本发明专利技术通过生物信息数据处理、体内外实验结果证实CHMP4C在HPV病毒感染所致宫颈癌组织或细胞中高表达，首次发现了与HPV感染所致宫颈癌发生发展相关的生物标志物—CHMP4C，通过检测受试者CHMP4C的变化，来实现宫颈癌的早期诊断。本发明专利技术提供一种HPV病毒感染所致宫颈癌早期筛查、早期诊断、早期治疗、预后评估的试剂或试剂盒中的应用，为HPV病毒感染所致宫颈癌患者脱离病痛提供极有前景的策略，对HPV病毒感染所致宫颈癌的基础研究和临床研究具有重大的临床意义。重大的临床意义。重大的临床意义。

【技术实现步骤摘要】
分子标志物CHMP4C在HPV病毒感染所致宫颈癌中的应用


[0001]本专利技术属于医药生物
，具体涉及一种分子标志物CHMP4C在HPV病毒感染所致宫颈癌中的应用。

技术介绍

[0002]宫颈癌是最常见的妇科肿瘤之一，2018年全球新发病例569847例，死亡人数311365人，在女性肿瘤发病率和死亡率中排第四。其中，中国报告了106 430 例新发宫颈癌病例和47739 例死亡病例，分别占全球发病率和死亡率的18.7%和15.3%。另外由于宫颈癌筛查的人口覆盖率低（21.4%），HPV疫苗接种率也较低，消灭宫颈癌的任务更加艰巨。
[0003]宫颈癌的发生与人乳头状瘤病毒（HPV）的感染、吸烟、长期口服避孕药、第一次性交的年龄、多个性伴侣和合并感染等因素相关。其中感染HPV是宫颈癌最主要的病因，超过90％的鳞状宫颈癌能检测到HPV DNA。但是在大部分情况下，人体感染HPV病毒后能在自身免疫系统的作用下将病毒清除干净，只有少部分病毒能持续感染导致宫颈上皮内瘤变（CIN），如果不及时治疗最终将发展为宫颈癌。根据HPV与宫颈癌或癌前病变的关系，可将其分为低危型和高危型。在高风险类型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59）中，HPV16和HPV18是宫颈癌中最常见的基因型，分别占62.5%和15.7%。病毒主要利用宿主进行DNA的复制，其早期基因编码的产物，主要是癌蛋白E6和E7，能够抑制肿瘤抑制基因P53和pRb（成视网膜细胞瘤蛋白）的表达，是诱导细胞永生、转化和癌变的重要因素。
[0004]目前宫颈癌的发病机制尚不完全清楚，临床上也并没有用于宫颈癌诊治的有效的分子标志物，寻找新的分子标志物对于宫颈癌的机制研究以及临床应用都具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种宫颈癌的生物标志物，灵敏和特异性地实现宫颈癌的诊断和治疗。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0007]本专利技术提供了CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平的检测试剂在制备用于宫颈癌辅助诊断、预后评价产品中的应用。
[0008]进一步地，所述宫颈癌为HPV感染所致宫颈癌。
[0009]进一步地，所述CHMP4C基因表达上调。
[0010]进一步地，所述产品通过逆转录PCR、实时定量PCR、免疫组织化学染色或酶联免疫吸附检测样本中CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平。
[0011]优选地，扩增CHMP4C基因的特异性引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
[0012]优选地，所述产品为芯片、制剂或试剂盒；所述样本为组织或细胞。
[0013]本专利技术还提供了CHMP4C基因表达水平的抑制剂在制备治疗宫颈癌的药物中的应
用。
[0014]本专利技术还提供了CHMP4C基因表达水平的抑制剂在制备治疗宫颈癌细胞的增殖、凋亡、侵袭能力、迁移能力的药物中的应用。
[0015]根据上述所述应用，其特征在于，所述宫颈癌为HPV感染所致宫颈癌。
[0016]根据上述所述应用，其特征在于，所述CHMP4C基因表达水平的抑制剂为siRNA，所述siRNA的序列包括SEQ ID NO .3~ SEQ ID NO .8任一所示序列。
[0017]与现有技术相比本专利技术的有益效果。
[0018]本专利技术首次发现了与HPV感染所致宫颈癌发生发展相关的生物标志物—CHMP4C，通过检测受试者CHMP4C的变化，来实现宫颈癌的早期诊断。
[0019]本专利技术提供了治疗HPV感染所致宫颈癌的分子靶标，通过靶向于分子标志物来治疗疾病具有敏感性和特异性。
[0020]本专利技术对HPV感染所致宫颈癌的机制研究提供了一定的理论基础。
附图说明
[0021]图1显示GEPIA数据库显示CHMP4C与宫颈癌的预后相关，CHMP4C表达高的宫颈癌患者预后较差。
[0022]图2显示利用免疫组化检测CHMP4C基因在正常宫颈组织（A）、宫颈鳞状细胞癌组织（B）和宫颈腺癌组织（C）中的表达情况。
[0023]图3显示利用qRT
‑
PCR检测siRNA对CHMP4C和E6基因表达的影响。
[0024]图4显示利用免疫印迹检测siRNA对CHMP4C和E6蛋白表达的影响，以及CHMP4C影响Bcl2和Bcl
‑
xl凋亡蛋白的表达，E6影响CHMP4C蛋白的表达。
[0025]图5显示MTT法（A、B）和平板克隆实验（C、D）检测CHMP4C对宫颈癌细胞增殖活性的影响。
[0026]图6显示利用流式细胞术检测CHMP4C对宫颈癌细胞凋亡水平的影响。
[0027]图7显示利用transwell细胞侵袭试验检测CHMP4C基因对宫颈癌细胞侵袭能力的影响。
[0028]图8显示利用细胞迁移试验检测CHMP4C基因对宫颈癌细胞迁移能力的影响。
具体实施方式
[0029]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0030]实施例1 免疫组化验证CHMP4C在不同组织中的差异表达。
[0031]如图1示GEPIA数据库显示CHMP4C高表达与宫颈癌的不良预后相关，因此我们验证CHMP4C是否为宫颈癌的基因标志物。
[0032]1.样品收集：本次研究一共收集宫颈正常组织19例、宫颈鳞癌组织88例和宫颈腺癌组织8例，标本均来源于广州医科大学附属第三医院住院的患者，均经病理学诊断证实，所有患者术前
未行放、化疗，并签署标本处理知情同意书，且通过广州医科大学附属第三医院伦理委员会审核。
[0033]2.切片制备：所有样品经病理科制备成石蜡切片，于
‑
20℃冰箱保存。
[0034]3. 免疫组化：1）从
‑
20℃冰箱中取出组织石蜡切片，置于60℃温箱中烘烤4h，可见石蜡融化，然后把切片分别放入二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ中脱蜡15min。接着把切片分别放入100%酒精Ⅰ和100%酒精Ⅱ各5min，95%酒精2min，85%酒精2min，75%酒精1min，最后在蒸馏水中洗三次，每次3min，逐渐完成水化；2）将柠檬酸修复液倒进容器内，连同容器放入煮沸的水中，温度升高后，将切片架放入修复液，盖锅盖，但不锁定，缓慢加压，使玻片在缓冲片中浸泡5min，然后将盖子锁紧，小阀门升起后继续加热3min，除去热源，置于凉水中，当小阀门沉下去后，打开盖子。取出容器，室温下晾凉，大概本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平的检测试剂在制备用于宫颈癌辅助诊断、预后评价产品中的应用。2.根据权利要求1所述的CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平的检测试剂在制备用于宫颈癌辅助诊断、预后评价产品中的应用，其特征在于，所述宫颈癌为HPV感染所致宫颈癌。3.根据权利要求1所述的CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平的检测试剂在制备用于宫颈癌辅助诊断、预后评价产品中的应用，其特征在于，所述CHMP4C基因表达上调。4.根据权利要求1所述的CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平的检测试剂在制备用于宫颈癌辅助诊断、预后评价产品中的应用，其特征在于，所述产品通过逆转录PCR、实时定量PCR、免疫组织化学染色或酶联免疫吸附检测样本中CHMP4C基因或其编码蛋白的表达水平。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：生秀杰，赵杨，刘任赐，黄静，杜玉平，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第三医院广州重症孕产妇救治中心，广州柔济医院，
类型：发明
国别省市：