【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种定量检测技术，具体涉及一种混合双金属等离子体阵列及制备方法和等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法及应用。
技术介绍
1、代谢产物位于生化途径的末端，提供身体生理和病理生理状态的功能指纹。疾病相关过程，如肿瘤发展、耐药性、免疫反应和多能性维持，受代谢酶和转运蛋白及其相应代谢物的协调变化的调节。因此代谢分子的检测在疾病诊断、治疗等方面具有重要意义。
2、常规代谢物的优先、定量检测主要依赖于气相/液相色谱法和质谱法(gc/lc-ms)。这两种方法都需要繁琐的样品预处理和额外的色谱分离运行时间(～40分钟)来处理临床样品，以解决临床样品的组成复杂性和目标代谢物的痕量丰度问题。因此建立一种准确、快速的定量分析方法来监测临床使用的生物样品中的代谢物仍然是一个重大挑战。
3、基质辅助激光解吸/电离质谱(matrix-assisted laser desorption/ionizationms,maldi ms)能够在基质的辅助下，无需或只需简单的样品预处理对少量样品(～nl)，即可进行代谢物分子的快速、灵敏和高通量检测。然而传统的有机基质(如α-氰基-4-羟基肉桂酸(chca)和2,5-二羟基苯甲酸(dhb))由于自离解而在低质量区域(<m/z 700)存在强烈的背景噪声，这阻碍了其在代谢物检测中的应用。
4、综上，目前代谢物的定量检测主要依赖色谱法和酶联免疫吸附法：1)对于色谱法，需对复杂样品进行预处理，且存在检测时间长、价格昂贵等问题，难以实现对实际复杂样本的低成本、高通量
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是为了解决上述问题至少其一而提供一种混合双金属等离子体阵列及制备方法和等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法及应用，以解决现有技术中色谱法和酶联免疫吸附法均难以对核苷类物质准确定量检测，而maldi ms在低质量区域存在强烈的背景噪声导致检测不准的问题，实现了快速选择性地识别特定分子，并可通过指纹图谱获取特定分子的信号强度，具有操作简单、灵敏度高、成本低、检测通量高的优点，有应用于复杂临床样本的潜力。
2、本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
3、本专利技术第一方面公开了一种混合双金属等离子体阵列，由带正电的贵金属纳米颗粒与带负电的贵金属纳米颗粒通过自组装得到，其中，
4、带正电的贵金属纳米颗粒与带负电的贵金属纳米颗粒为不同贵金属的纳米颗粒；或，
5、至少带正电的贵金属纳米颗粒为双贵金属纳米颗粒；或，
6、至少带负电的贵金属纳米颗粒为双贵金属纳米颗粒。
7、优选地，所述的贵金属纳米颗粒包括ag纳米颗粒、pt纳米颗粒、au纳米颗粒和pt/au纳米颗粒。
8、本专利技术第二方面公开了一种制备如上所述的混合双金属等离子体阵列的方法，包括如下步骤：
9、s1：带正电的贵金属纳米颗粒的制备：
10、在室温下搅拌混合金属源与第一封端剂，随后将还原剂加入至混合液中并避光静置，得到带正电的贵金属纳米颗粒的悬浮液；
11、s2：带负电的贵金属纳米颗粒的制备：
12、加热并搅拌金属源至沸腾，将第二封端剂加入至沸腾的金属源中并保持煮沸状态，随后在自然冷却过程中继续搅拌，得到带负电的贵金属纳米颗粒的悬浮液；
13、s3：等离子体阵列的制备：
14、将步骤s2制备的带负电的贵金属纳米颗粒分散于油液中，加入步骤s1制备的带正电的贵金属纳米颗粒的水悬浮液并震荡，在水-油两相或油-水-油三相界面自组装形成混合双金属等离子体阵列。
15、优选地，所述的金属源包括haucl4和h2ptcl6中的一种或两种；所述的第一封端剂包括半胱氨溶液；所述的第二封端剂包括柠檬酸钠；所述的油液包括1,2-二氯乙烷和正己烷。
16、优选地，步骤s1中，所述的搅拌的时间为20min，所述的避光静置的时间为10min；步骤s2中，所述的保持煮沸状态的时间为10min，所述的在自然冷却过程中继续搅拌的时间为15min；步骤s3中，所述的震荡的时间为30s。
17、优选地，油液、带负电的贵金属纳米颗粒与带正电的贵金属纳米颗粒的体积比为500：400：20。
18、本专利技术第三方面公开了一种等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法，采用如上所述的混合双金属等离子体阵列作为基质，或，采用如上任一所述的方法制备的混合双金属等离子体阵列作为基质；
19、所述的检测方法包括如下步骤：
20、s4：样品预处理：
21、将反应样本加入至提取剂中并涡旋震荡，冷冻处理后进行离心，取上清液；
22、s5：样品制备：
23、预热靶板，将所述的等离子体阵列转移至靶板上并干燥，将步骤s4处理后的样品滴加于等离子体阵列上并干燥；
24、s6：样品检测：
25、在基质辅助激光解吸电离质谱中，采用正离子反射模式对步骤s5制备的样品进行质谱检测。
26、优选地，所述的反应样本包括血液样本、生物样本、食品样本和环境样本；所述的提取剂包括体积比为2：2：1的甲醇、乙腈和水。
27、优选地，步骤s4中，所述的涡旋震荡的时间为30s，所述的冷冻处理为在-20℃下冷冻2h，所述的离心为在4℃下以12000rpm离心10min；步骤s5中，所述的预热的温度为0-100℃。
28、本专利技术第四方面公开了一种如上任一所述的等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法在定量检测核苷类物质中的应用。
29、贵金属是很有前景的激光解吸/电离质谱(ldi ms)基质材料，表现出优越的表面等离激元效应和较高的热载流子效应，从而改善分析物的脱附和电离。本专利技术以混合双贵金属纳米颗粒通过液-液界面或油-水-油三相界面自组装，制备了一种新型的均匀且密集排布的等离子体阵列；该等离子体阵列可通过增强化学基团(例如，碱性氮杂环(base ringnitrogen)、外环酮基团(exocyclic keto groups)、咪唑基团等)与贵金属之间的结合亲和力，来优先检测特定代谢物(例如，核苷)。
30、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
31、本专利技术提供了一种新型通过混合双金属纳米材料自组装形成的等离子体阵列，可作为基质辅助激光解吸电离质谱的基质材料，用于核苷类物质的定量检测。
32、本专利技术旨在利用自组装的等离子体阵列辅助ldi ms优先、定量检测核苷类物质。混合双金属等离子体阵列与质谱相结合，显示对核苷类物质具有极强的亲和性。
33、该检本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种混合双金属等离子体阵列，其特征在于，由带正电的贵金属纳米颗粒与带负电的贵金属纳米颗粒通过自组装得到，其中，
2.根据权利要求1所述的一种混合双金属等离子体阵列，其特征在于，所述的贵金属纳米颗粒包括Ag纳米颗粒、Pt纳米颗粒、Au纳米颗粒、Au/Ag纳米颗粒和Pt/Au纳米颗粒。
3.一种制备如权利要求1或2所述的混合双金属等离子体阵列的方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种混合双金属等离子体阵列的制备方法，其特征在于，所述的金属源包括HAuCl4和H2PtCl6中的一种或两种；所述的第一封端剂包括半胱氨溶液；所述的第二封端剂包括柠檬酸钠；所述的油液包括1,2-二氯乙烷和正己烷。
5.根据权利要求3所述的一种混合双金属等离子体阵列的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述的搅拌的时间为20min，所述的避光静置的时间为10min；步骤S2中，所述的保持煮沸状态的时间为10min，所述的在自然冷却过程中继续搅拌的时间为15min；步骤S3中，所述的震荡的时间为30s。
6.根据权利要求3所述的一
7.一种等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法，其特征在于，采用如权利要求1或2所述的混合双金属等离子体阵列作为基质，或，采用如权利要求3-6任一所述的方法制备的混合双金属等离子体阵列作为基质；
8.根据权利要求7所述的一种等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法，其特征在于，所述的反应样本包括血液样本、生物样本、食品样本和环境样本；所述的提取剂包括体积比为2：2：1的甲醇、乙腈和水。
9.根据权利要求7所述的一种等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法，其特征在于，步骤S4中，所述的涡旋震荡的时间为30s，所述的冷冻处理为在-20℃下冷冻2h，所述的离心为在4℃下以12000rpm离心10min；步骤S5中，所述的预热的温度为0-100℃。
10.一种如权利要求7-9任一所述的等离子体阵列辅助激光解吸电离质谱的检测方法在定量检测核苷类物质中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种混合双金属等离子体阵列，其特征在于，由带正电的贵金属纳米颗粒与带负电的贵金属纳米颗粒通过自组装得到，其中，
2.根据权利要求1所述的一种混合双金属等离子体阵列，其特征在于，所述的贵金属纳米颗粒包括ag纳米颗粒、pt纳米颗粒、au纳米颗粒、au/ag纳米颗粒和pt/au纳米颗粒。
3.一种制备如权利要求1或2所述的混合双金属等离子体阵列的方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的一种混合双金属等离子体阵列的制备方法，其特征在于，所述的金属源包括haucl4和h2ptcl6中的一种或两种；所述的第一封端剂包括半胱氨溶液；所述的第二封端剂包括柠檬酸钠；所述的油液包括1,2-二氯乙烷和正己烷。
5.根据权利要求3所述的一种混合双金属等离子体阵列的制备方法，其特征在于，步骤s1中，所述的搅拌的时间为20min，所述的避光静置的时间为10min；步骤s2中，所述的保持煮沸状态的时间为10min，所述的在自然冷却过程中继续搅拌的时间为15min；步骤s3中，所述的震荡的时间为30s。
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