治疗亨廷顿病的组合物和方法技术

提供用于抑制、治疗和/或预防亨廷顿病的组合物和方法。组合物和方法。组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗亨廷顿病的组合物和方法
[0001]本申请根据35U.S.C.
§
119(e)要求对2019年3月8日提交的美国临时专利申请号62/815,647的优先权。前述申请是通过引用并入本文。


[0002]本专利技术总体上涉及基因沉默领域。具体地，本专利技术提供用于调节亨廷顿蛋白基因的表达的组合物和方法。

技术介绍

[0003]亨廷顿病(HD)是一种常染色体显性神经系统变性疾病。HD是聚谷氨酰胺(聚Q)障碍家族的一部分，所述家族包含至少九种不同的神经系统变性疾病，它们源自特定基因(例如，亨廷顿蛋白)中可变扩增的三核苷酸CAG重复(Walker,F.O.(2007)Lancet,369:218
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228；Walker,F.O.(2007)Semin.Neurol.,27:143
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150)。所述扩增的大小与发病年龄(例如，成年发病与幼年型)呈部分负相关。HD是由亨廷顿蛋白基因的第一外显子内的CAG重复扩增(约>36个重复)引起的。
[0004]亨廷顿蛋白基因(htt)和蛋白质(HTT)广泛且普遍地表达，但是所述疾病具有选择性神经元易损性的模式(例如，在脑内)(Ambrose等人(1994)Somat.Cell Mol.Genet.,20:27
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38；Landles等人(2004)EMBO Rep.,5:958
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963)。htt的正常功能和突变体htt的病理学机制都没有被完全理解。可能存在多种机制，包括功能的毒性增益和野生型功能的丧失。值得注意的是，可以在不同位置和不同类型的神经元中发现HTT蛋白的聚集体。
[0005]对于HD不存在治愈，并且治疗集中于管理其症状(Johnson等人(2010)Hum.Mol.Genet.,19:R98
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R102)。近期数据表明，全长和截短的mRNA转录物及其相关蛋白质产物存在于HD患者中，并且对神经元功能障碍和死亡的机制有贡献(Sathasivam等人(2013)Proc.Natl.Acad.Sci.,110:2366
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2370)。值得注意的是，遗传修饰的小鼠模型的应用显示，如果消除突变体亨廷顿蛋白表达，即使在晚期疾病阶段，HD样疾病表型可能消退(Yamamoto等人(2000)Cell,101:57
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66；Diaz
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Hernandez等人(2005)J.Neurosci.,25:9773
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9781)。因此，减少突变体htt mRNA(全长和/或终止的)可以导致治疗性干预(Sah等人(2011)J.Clin.Invest.,121:500
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507)。然而，需要改进的调节htt基因表达的方法。

技术实现思路

[0006]根据本专利技术，提供用于抑制亨廷顿蛋白基因(htt)表达的核酸分子。在特定实施方案中，所述核酸分子包含与至少一个效应子结构域可操作地连接的退火结构域，其中所述退火结构域与htt的前体mRNA杂交，并且其中所述效应子结构域与U1 snRNP的U1 snRNA杂交。在特定实施方案中，U1AO可以针对全长的和/或截短的htt。
[0007]根据本专利技术的另一方面，所述核酸分子可以与靶向部分缀合(例如，直接地或经由接头)。所述靶向部分可以与5'端和/或3'端缀合(例如，核酸可以包含两个相同或不同的靶向部分)。在特定实施方案中，所述核酸分子与适配体缀合。
[0008]根据本专利技术的另一方面，提供用于抑制htt表达的方法，其包括向细胞递送至少一种本专利技术的核酸分子。
[0009]根据本专利技术的另一方面，提供组合物，其包含至少一种本专利技术的核酸分子和至少一种药学上可接受的载体。
[0010]在仍另一方面，还提供编码本专利技术的核酸分子的载体。
[0011]根据本专利技术的另一方面，提供治疗、抑制和/或预防受试者的亨廷顿病的方法。所述方法包括将治疗有效量的至少一种本专利技术的核酸分子(例如，U1AO或编码U1AO的载体)施用至有需要的受试者。在特定实施方案中，所述方法包括施用超过一种U1AO。在特定实施方案中，所述方法包括施用针对全长htt、截短的htt或者全长和截短的htt二者(例如，用单独的U1AO)的U1AO。
附图说明
[0012]图1A是U1衔接子寡核苷酸的示意图，描绘其2个结构域：用于与3'末端外显子中靶基因的前体mRNA碱基配对的退火结构域，以及通过内源U1snRNP的结合抑制前体mRNA的成熟的效应子结构域。所提供的效应子结构域序列是SEQ ID NO:1。图1B是与靶前体mRNA退火的U1衔接子的示意图。所提供的效应子结构域序列是SEQ ID NO:1。图1C是结合U1 snRNP的U1衔接子的示意图，其导致多聚(A)位点抑制。Ψ＝U1 snRNP中的U1 snRNA的假尿苷。所提供的在U1 snRNP中的U1 snRNA的序列是SEQ ID NO:2。所提供的效应子结构域序列是SEQ ID NO:1。
[0013]图2提供显示HD9197细胞中针对次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1(HPRT1)归一化的人亨廷顿蛋白(HTT)mRNA的变化百分比的图，所述HD9197细胞用一组20nM U1衔接子寡核苷酸(U1AO)和20nM针对全长人HTT的siRNA转染44小时。
[0014]图3提供用20nM的各种hHTT
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FL U1AO和siRNA转染48小时的DU145细胞的蛋白质印迹，泳道9中的7nM和泳道7中的30nM例外。GAPDH是作为上样对照来提供。U1A(U1 snRNP亚基)是作为第二上样对照来提供。每个泳道加载1,500,00个细胞当量。泳道4和6是独立的重复。MW：分子量标记。
[0015]图4A提供在将盐水或hHTT
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FL
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2 U1AO脑室内(ICV)注射至左脑室中之后，YAC128前脑中hHTT
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FL mRNA的变化百分比的图。YAC128是亨廷顿病的完善的小鼠模型，其含有约300,000个碱基对的具有128个CAG重复的人亨廷顿蛋白基因。将对照小鼠的平均值设为100％。N＝7是来自两个不同实验(n＝3和n＝4)。图4B提供在ICV注射盐水或hHTT
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FL
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2 U1AO后，YAC128前脑中hHTT
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TR mRNA的变化百分比的图。将对照小鼠的平均值设为100％。
[0016]图5提供在注射盐水或hHTT
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FL
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2 U1AO后，来自YAC128前脑的总RNA的8％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)RNA印迹的图像。探针是33个核苷酸的
32
P
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抗hHTT
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FL
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2寡核苷酸。标准品是未注射的U1AO。
[0017]图6提供本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于抑制亨廷顿蛋白基因表达的U1衔接子寡核苷酸，其中所述U1衔接子寡核苷酸是包含与至少一个效应子结构域可操作地连接的退火结构域的核酸分子，其中所述退火结构域与所述亨廷顿蛋白基因的前体mRNA杂交，并且其中所述效应子结构域与U1 snRNP的U1 snRNA杂交。2.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述退火结构域的长度为约10至约30个核苷酸。3.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述效应子结构域的长度为约8至约20个核苷酸。4.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述效应子结构域和退火结构域通过键或约1至约10个核苷酸的接头结构域来连接。5.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述效应子结构域包含序列5'
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CAGGUAAGUA
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3'(SEQ ID NO:1)、5'
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CAGGUAAGUAU
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3'(SEQ ID NO:4)或5'
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GCCAGGUAAGUAU
‑
3'(SEQ ID NO:5)。6.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其还包含至少一个靶向部分和/或细胞穿透部分，其中所述靶向部分和/或细胞穿透部分与所述U1衔接子寡核苷酸可操作地连接。7.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述U1衔接子寡核苷酸包含至少一个核苷酸类似物。8.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述U1衔接子寡核苷酸包含2'
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O
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甲基核苷酸、2'
‑
O
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甲氧基乙氧基核苷酸、2'
‑
卤基(例如，2'
‑
氟)和/或锁核酸。9.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中U1衔接子寡核苷酸包含硫代磷酸酯。10.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述退火结构域与所述亨廷顿蛋白基因的3'末端外显子中的靶序列杂交。11.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述效应子结构域与所述退火结构域的3'端、所述退火结构域的5'端或者所述退火结构域的5'和3'端两端可操作地连接。12.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述退火结构域包含一段至少七个脱氧核糖核苷酸。13.根据权利要求1所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述U1 snRNA是U1变体snRNA。14.根据权利要求6所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述U1衔接子寡核苷酸与所述靶向部分和/或细胞穿透部分经由接头缀合。15.根据权利要求14所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述接头是可切割的。16.根据权利要求6所述的U1衔接子寡核苷酸，其中所述靶向部分和/或细胞穿透...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：西拉基因公司，
类型：发明
国别省市：