新型AAV衣壳和含有其的组合物制造技术

本文提供新型AAV衣壳和包含其的rAAV。在一个实施例中，相比于现有技术AAV，采用新型AAV衣壳的载体展示增加的所选靶组织的转导。AAV衣壳的载体展示增加的所选靶组织的转导。AAV衣壳的载体展示增加的所选靶组织的转导。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型AAV衣壳和含有其的组合物

技术介绍

[0001]腺相关病毒(AAV)在人类基因疗法中具有广阔的前景，且由于其能够提供长期基因表达且缺乏致病性，因此在各种研究中已广泛用于靶向肝脏、肌肉、心脏、脑、眼睛、肾脏和其它组织。AAV属于细小病毒家族，且每个都含有单股DNA，两侧是两个反向末端重复序列。已经报道了数十种天然存在的AAV衣壳；其独特衣壳结构使其能够识别和转导不同的细胞类型和器官。
[0002]自1981年开始第一次试验以来，基于AAV载体的基因治疗的临床试验中没有报告任何与载体相关的毒性。AAV载体在临床试验中不断积累的安全记录，结合已证明的功效，表明AAV是一个有前景的基因递送平台。另一个有吸引力的特征是AAV相对容易操纵，因为它是一种单股DNA病毒，具有小基因组(～4.7kb)和简单的遗传成分
‑
反向末端重复序列(ITR)以及Rep和Cap基因。AAV载体中只需要ITR和AAV衣壳蛋白，其中ITR作为载体生产的复制和包装信号，且衣壳蛋白不仅形成衣壳以容纳载体基因组DNA，而且决定组织向性以将载体基因组递送到靶细胞和组织。
[0003]由于AAV的低免疫原性和非致病性，AAV是基因疗法最有效的候选载体之一。然而，尽管允许有效的基因转移，但目前在临床中使用的AAV载体可能会受到对病毒的预先存在的免疫力和限制的组织向性的阻碍。需要新的和更有效的AAV载体。

技术实现思路

[0004]在一个实施例中，本文提供一种重组腺相关病毒(rAAV)，其具有包含衣壳蛋白的AAV衣壳，所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：2(AAVrh.92)、SEQ ID NO：4(AAVrh.93)或SEQ ID NO：6(AAVrh.91.93)，且在衣壳中包装有包含异源核酸序列的载体基因组。在某些实施例中，rAAV具有包含衣壳蛋白的衣壳，所述衣壳蛋白由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5的AAV衣壳序列，或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5具有至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、或至少99％一致性的序列的表达产生，且在衣壳中包装有包含异源核酸序列的载体基因组。
[0005]在某些实施例中，本文提供rAAV，其中AAV衣壳包含AAV衣壳蛋白，所述AAV衣壳蛋白包含：(1)选自以下的vp1蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：2的1至733的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp1蛋白、由SEQ ID NO：1产生的vp1蛋白、或由与SEQ ID NO：1具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp1蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：2的1至733的预测氨基酸序列；选自以下的vp2蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸138至733的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp2蛋白、由包含SEQ ID NO：1的至少核苷酸412至2199的序列产生的vp2蛋白、或由与SEQ ID NO：1的至少核苷酸412至2199具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp2蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸138至738的预测氨基酸序列；选自以下的vp3蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸204至738的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp3蛋白、由包含SEQ ID NO：1的至少核苷酸589到2199的序列产生的vp3蛋白、或由与SEQ ID NO：
1的至少核苷酸589至2199具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp3蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸197至733的预测氨基酸序列；和/或(2)作为编码SEQ ID NO：2的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp1蛋白的异质群体、作为编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸138至733的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp2蛋白的异质群体和作为编码SEQ ID NO：2的至少氨基酸197至733的核酸序列的产物的vp3蛋白的异质群体，其中：vp1、vp2和vp3蛋白含有具有氨基酸修饰的亚群，所述氨基酸修饰包含SEQ ID NO：2中的天冬酰胺
‑
甘氨酸对中的至少两个高度脱酰胺化的天冬酰胺(N)，并且任选地进一步含有包含其它脱酰胺化的氨基酸的亚群，其中所述脱酰胺化引起氨基酸变化。
[0006]在某些实施例中，本文提供rAAV，其中AAV衣壳包含AAV衣壳蛋白，所述AAV衣壳蛋白包含：(1)选自以下的vp1蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：4的1至728的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp1蛋白、由SEQ ID NO：3产生的vp1蛋白、或由与SEQ ID NO：3具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp1蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：4的1至728的预测氨基酸序列；选自以下的vp2蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸138至728的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp2蛋白、由包含SEQ ID NO：3的至少核苷酸412至2184的序列产生的vp2蛋白、或由与SEQ ID NO：3的至少核苷酸412至2184具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp2蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸138至728的预测氨基酸序列；选自以下的vp3蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸199至728的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp3蛋白、由包含SEQ ID NO：3的至少核苷酸595到2184的序列产生的vp3蛋白、或由与SEQ ID NO：3的至少核苷酸595至2184具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp3蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸199至728的预测氨基酸序列；和/或(2)作为编码SEQ ID NO：4的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp1蛋白的异质群体、作为编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸138至728的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp2蛋白的异质群体和作为编码SEQ ID NO：4的至少氨基酸197至728的核酸序列的产物的vp3蛋白的异质群体，其中：vp1、vp2和vp3蛋白含有具有氨基酸修饰的亚群，所述氨基酸修饰包含SEQ ID NO：4中的天冬酰胺
‑
甘氨酸对中的至少两个高度脱酰胺化的天冬酰胺(N)，并且任选地进一步含有包含其它脱酰胺化的氨基酸的亚群，其中所述脱酰胺化引起氨基酸变化。
[0007]在某些实施例中，本文提供rAAV，其中AAV衣壳包含AAV衣壳蛋白，所述AAV衣壳蛋白包含：(1)选自以下的vp1蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：6的1至733的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp1蛋白、由SEQ ID NO：5产生的vp1蛋白、或由与SEQ ID NO：5具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp1蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：6的1至733的预测氨基酸序列；选自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组腺病毒相关病毒(rAAV)，其具有包含衣壳蛋白的AAV衣壳，所述衣壳蛋白包含SEQ ID NO：2(AAVrh.92)、SEQ ID NO：4(AAVrh.93)或SEQ ID NO：6(AAVrh.91.93)，且在所述衣壳中包装有包含异源核酸序列的载体基因组。2.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其具有包含衣壳蛋白的衣壳，所述衣壳蛋白由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5的AAV衣壳序列，或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5中的任一个具有至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、或至少99％一致性的序列的表达产生，且在所述衣壳中包装有包含异源核酸序列的载体基因组。3.根据权利要求1或2所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5编码。4.根据权利要求1至3中任何一项所述的rAAV，其进一步包含5
′
AAV反向末端重复序列(ITR)和3
′
AAV ITR以及与调节序列可操作地连接的异源核酸序列，所述调节序列引导由所述异源核酸序列编码的产物在靶细胞中的表达。5.根据权利要求4所述的rAAV，其中所述AAV ITR序列来自除AAVrh.92、AAVrh.93或AAVrh.91.93以外的AAV。6.根据权利要求5所述的rAAV，其中所述ITR序列来自AAV2。7.根据权利要求1至6中任一项所述的rAAV，其中所述AAV衣壳包含AAV衣壳蛋白，所述衣壳蛋白包含：(1)选自以下的vp1蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：2的1至733的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp1蛋白、由SEQ ID NO：1产生的vp1蛋白、或由与SEQ ID NO：1具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp1蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：2的1至733的预测氨基酸序列；选自以下的vp2蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸138至733的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp2蛋白、由包含SEQ ID NO：1的至少核苷酸412至2199的序列产生的vp2蛋白、或由与SEQ ID NO：1的至少核苷酸412至2214具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp2蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸138至733的预测氨基酸序列；选自以下的vp3蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸197至733的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp3蛋白、由包含SEQ ID NO：1的至少核苷酸589至2199的序列产生的vp3蛋白、或由与SEQ ID NO：1的至少核苷酸589至2199具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp3蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸197至733的预测氨基酸序列；和/或(2)作为编码SEQ ID NO：2的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp1蛋白的异质群体、作为编码SEQ ID NO：2的至少约氨基酸138至733的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp2蛋白的异质群体和作为编码SEQ ID NO：2的至少氨基酸197至733的核酸序列的产物的vp3蛋白的异质群体，其中：vpl、vp2和vp3蛋白含有具有氨基酸修饰的亚群，所述氨基酸修饰包含SEQ ID NO：2中的天冬酰胺
‑
甘氨酸对中的至少两个高度脱酰胺化的天冬酰胺(N)，并且任选地进一步含有包含其它脱酰胺化的氨基酸的亚群，其中所述脱酰胺化引起氨基酸变化。8.根据权利要求7所述的rAAV，其中编码所述蛋白质的所述核酸序列为SEQ ID NO：1，或与SEQ ID NO：1具有至少80％到至少99％一致性的序列，所述序列编码SEQ ID NO：2的氨
基酸序列。9.根据权利要求7或8所述的rAAV，其中所述核酸序列为SEQ ID NO：1。10.根据权利要求1至6中任一项所述的rAAV，其中所述AAV衣壳包含AAV衣壳蛋白，所述衣壳蛋白包含：(1)选自以下的vp1蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：4的1至728的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp1蛋白，由SEQ ID NO：3产生的vp1蛋白、或由与SEQ ID NO：3具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp1蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：4的1至728的预测氨基酸序列；选自以下的vp2蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸138至728的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp2蛋白、由包含SEQ ID NO：3的至少核苷酸412至2184的序列产生的vp2蛋白、或由与SEQ ID NO：3的至少核苷酸412至2184具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp2蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸138至728的预测氨基酸序列；选自以下的vp3蛋白的异质群体：通过由编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸199至728的预测氨基酸序列的核酸序列的表达产生的vp3蛋白、由包含SEQ ID NO：3的至少核苷酸595至2184的序列产生的vp3蛋白、或由与SEQ ID NO：3的至少核苷酸595至2184具有至少70％一致性的核酸序列产生的vp3蛋白，所述核酸序列编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸199至728的预测氨基酸序列；和/或(2)作为编码SEQ ID NO：4的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp1蛋白的异质群体、作为编码SEQ ID NO：4的至少约氨基酸138至728的氨基酸序列的核酸序列的产物的vp2蛋白的异质群体和作为编码SEQ ID NO：4的至少氨基酸199至728的核酸序列的产物的vp3蛋白的异质群体，其中：所述vp1、vp2和vp3蛋白含有具有氨基酸修饰的亚群，所述氨基酸修饰包含SEQ ID NO：4中的天冬酰胺
‑
甘氨酸对中的至少两个高度脱酰胺化的天冬酰胺(N)，并且任选地进一步含有包含其它脱酰胺化的氨基酸的亚群，其中所述脱酰胺化引起氨基酸变化。11.根据权利要求10所述的rAAV，其中编码所述蛋白质的所述核酸序列为SEQ ID NO：3，或与SEQ ID NO：3具有至少80％到至少99％一致性的序列，所述序列编码SEQ ID NO：4的氨基酸序列。12.根据权利要求10或11所述的rAAV，其中所述核酸序列为SEQ ID NO：3。13.根据权利要求1至...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：