SLC12A5及其抑制剂的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药工程技术领域，公开了SLC12A5及其抑制剂的应用。本发明专利技术通过特异性抑制剂抑制SLC12A5的生物学功能，与对照相比，SLC12A5抑制剂可以显著抑制胆管癌细胞增殖以及克隆形成率，此外还能够显著抑制皮下瘤生长，从而提示了以SLC12A5为靶点可以提供一种制备治疗或改善肝内胆管癌的药物和治疗肝内胆管癌的新途径。胆管癌的新途径。

【技术实现步骤摘要】
SLC12A5及其抑制剂的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药工程
，具体涉及SLC12A5及其抑制剂的应用。

技术介绍

[0002]肝内胆管细胞癌(ICC)通常被认为起源于肝内胆管上皮细胞，其发病率在全世界范围内呈明显上升趋势，是肝脏第二大原发恶性肿瘤，约占全部肝脏原发恶性肿瘤的5％
‑
30％。ICC发病隐匿，侵袭性高，易侵犯肝脏周围组织，发生淋巴结和远处转移，因此大部分患者在初诊时已处于晚期。即使在有条件接受根治性手术的患者中，术后复发率仍有40％
‑
80％，5年生存率仅为20％
‑
40％。ICC目前缺乏有效的治疗方案，其中肿瘤多发、淋巴结转移、远处转移是影响术后肿瘤复发的关键因素。近年来，随着对ICC相关肿瘤微环境、基因、蛋白、表观遗传修饰、信号通路及其与HBV关系的研究不断深入，潜在治疗靶点不断被发掘，基于这些靶点的临床试验将会层出不穷，为这种高度恶性、预后不佳的肿瘤的治疗带来新曙光。新胆管癌治疗药物的发现有望为胆管细胞癌的治疗提供新的途径和手段。
[0003]溶质转运蛋白(SoluteCarrier,SLC)超家族是一类重要的细胞膜蛋白家族，介导细胞与外界以及细胞内各类溶质的跨膜运输，参与了细胞间的能量传递、营养代谢、信号传导等重要的生理病理过程。SLC12A5是溶质转运蛋白家族的成员，是Na
+
/K
+
、Cl
‑
在细胞膜上的共转运蛋白，在健康的人体中多表达于大脑组织。SLC12A5存在两种亚型，由不同的启动子启动产生，研究发现，缺乏这两种亚型的小鼠会在出生后不久因为呼吸衰竭以及运动缺陷而死亡。SLC12A5在中枢神经系统神经元中高表达。很多神经系统疾病的研究表明，SLC12A5的异常表达与癫痫发作有关，也与应激障碍、慢性疼痛以及精神问题相关。近年来也有研究发现SLC12A5在膀胱移行细胞癌、结直肠癌和肺腺癌等肿瘤疾病中高表达。该基因能显著增强细胞增殖和促进G1－S期转化，抑制肿瘤细胞凋亡，但是其在其他癌症中的作用仍未有相关研究和报道。
[0004]目前国内外关于SLC12A5在神经系统之外的研究很少，特别是在肝脏中的研究寥寥无几。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供SLC12A5(SoluteCarrierFamily12Member5)作为治疗或改善肝内胆管癌的靶点中的应用，即任何形式的对其抑制、沉默、敲除、降低表达的方式或物质都可以应用于治疗或改善肝内胆管癌或其相关药物制备中；
[0006]本专利技术的另外一个目的在于提供SLC12A5抑制剂在制备治疗或改善肝内胆管癌的药物中的应用。
[0007]本专利技术应用SLC12A5的小分子特异性抑制剂VU0240551进行SLC12A5的抑制，并验证相关实验效果；VU0240551的CAS号：893990
‑
34
‑
6，分子式：C
16
H
14
N4OS2，分子量：342.44，是SLC12A5通道的抑制剂，结构式如下：
[0008][0009]MTT实验结果表明，分别对人胆管癌细胞系RBE细胞和HUCCT1细胞给予SLC12A5特异性抑制剂VU0240551干预后细胞增殖能力明显减弱；平板克隆实验同样表明，给予胆管癌细胞VU0240551治疗后明显降低其增殖能力。同时，PDX实验表明，相对于对照组而言，VU0240551干预可以显著抑制皮下瘤生长。这些数据表明，SLC12A5的靶向抑制剂VU 0240551可以通过抑制SLC12A5的生物学功能起到抑制肝内胆管癌增殖能力的作用。
[0010]作为优选，所述SLC12A5抑制剂包括抑制SLC12A5的化学药物、多肽 /蛋白类药物和基因药物中的一种或多种。其中，所述基因药物选自：能降低 SLC12A5表达量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、SLC12A5反义核苷酸或它们任意的组合；或者能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA、 miRNA、SLC12A5反义核苷酸的构建物或它们任意的组合。其中，所述多肽 /蛋白类药物中多肽是α
‑
氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物，不具备空间结构(即蛋白质的一级结构)；蛋白质是N 条多肽链按一定的空间结构缠绕构成的高分子物质，具有一定空间结构(即蛋白质的二级、三级、四级结构)；所述构建物指基因工程领域中能够承载并表达核苷酸的载体，包括但不限于细菌质粒、噬菌体、重组病毒载体和真核重组表达载体中的至少一种。
[0011]在本专利技术具体实施方式中，所述化学药物为SLC12A5特异性抑制剂 VU0240551。
[0012]此外，所述药物中还包括药学上可接受的载体，包括但不限于溶剂、聚合物、脂质体、重组病毒载体和真核重组表达载体中的至少一种。
[0013]作为优选，所述药物为口服药物或注射药物，剂型包括片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、丸剂或溶液剂。
[0014]由以上技术方案可知，本专利技术通过特异性抑制剂抑制SLC12A5的生物学功能，与对照相比，SLC12A5抑制剂可以显著抑制胆管癌细胞增殖以及克隆形成率，此外还能够显著抑制皮下瘤生长，从而提示了以SLC12A5为靶点可以提供一种制备治疗或改善肝内胆管癌的药物和治疗肝内胆管癌的新途径。
附图说明
[0015]图1所示胆管癌细胞RBE及HUCCT1的MTT实验结果；A、B为RBE 和HUCCT1分别给予不同浓度VU0240551干预后MTT结果；
[0016]图2所示胆管癌细胞RBE及HUCCT1的平板克隆结果；A为RBE细胞平板克隆形成比率结果；B为HUCCT1细胞平板克隆形成比率结果；
[0017]图3所示建立人胆管癌PDX模型，给予VU0240551干预后NOD
‑
SCID 鼠皮下成瘤结果。
具体实施方式
[0018]本专利技术公开了SLC12A5及其抑制剂的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适
当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术所述应用盒已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0019]本专利技术所涉及的实验的材料和方法参照如下：
[0020]1、实验动物和细胞
[0021]本研究使用的小鼠为雄性NOD
‑
SCID小鼠，饲养于本院实验动物研究中心，每笼8只小鼠，每天12h光照，自由饮食饮水，独立供气系统，环境温度恒定在22℃
‑
26℃。购得4周龄小鼠在适应环境一周后开始实验。所有动物实验均获中南大学实验动物伦理委员会批准，并严格遵守管理规范条例。
[0022]本实验使用的人胆管癌细胞系R本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.以SLC12A5作为治疗或改善肝内胆管癌的靶点制备药物中的应用。2.SLC12A5抑制剂在制备治疗或改善肝内胆管癌的药物中的应用。3.根据权利要求1或2所述应用，其特征在于，所述SLC12A5抑制剂包括抑制SLC12A5的化学药物、多肽/蛋白类药物和基因药物中的一种或多种。4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述基因药物选自：能降低SLC12A5表达量的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA、SLC12A5反义核苷酸或它们任意的组合；或者能表达或形成所述siRNA、dsRNA、shRNA、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐迅迪，秦伟，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：