通过多肽链交换产生抗体衍生的多肽制造技术

本发明专利技术涉及一组异二聚体多肽及其用途，例如用于通过多肽链交换产生多特异性抗原结合物。物。物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过多肽链交换产生抗体衍生的多肽


[0001]本专利技术涉及一组异二聚体多肽及其用途，例如用于通过多肽链交换产生多特异性抗原结合物。

技术介绍

[0002]当每个产生的多特异性抗体需要通过重组方法单独提供时，从多种可能的抗原结合物中提供多特异性抗体中抗原结合物的最佳组合是一项挑战。需要替代方法来筛选多种多特异性抗体。
[0003]Labrijn,A.F.等人公开了通过受控的Fab臂交换有效产生稳定的双特异性IgG1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 110(2013)5145
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5150)。简而言之，使在CH3结构域中具有点突变的IgG样结构域布置的两个单特异性前体分子接触以进行多肽链交换，以形成双特异性产物分子，其也是IgG样结构域布置。因此，前体分子和产物分子的尺寸相同，使得从未反应的前体分子中分离产物分子和分析产物分子具有挑战性。
[0004]未公布的现有技术PCT/EP2018/078675和PCT/EP2018/079523公开了通过多肽链交换从两种不同的前体分子产生多特异性抗原结合物的方法。两种前体分子都是不对称结构域布置的异二聚体多肽。两种前体分子都包含根据“杵入臼”技术(WO 96/027011,Ridgway,J.B.,et al.,Protein Eng.9(1996)617
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621；and Merchant,A.M.,et al.,Nat.Biotechnol.16(1998)677
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681)修饰并包含以不对称模式布置的进一步去稳定突变的CH3结构域。在每个前体分子中，只有一个CH3结构域包含这种去稳定突变。多肽链交换后，形成两个产物分子，其中每个产物分子包含来自每个前体分子的多肽。前体分子和产物分子具有不同的结构域布置。PCT/EP2018/078675和PCT/EP2018/079523公开了待取代前体分子的CH3/CH3界面中的氨基酸位置。
[0005]然而，仍然需要通过多肽链交换产生多特异性抗原结合物的其他方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及一组异二聚体前体多肽，其包含：
[0007]‑
第一异二聚体前体多肽，其包含至少两条包含CH3结构域的多肽链，其中所述两条包含CH3结构域的多肽链通过所述CH3结构域相互缔合并形成异二聚体，其中所述CH3结构域中的一个包含杵突变，并且另一个CH3结构域包含臼突变，
[0008]其中所述第一异二聚体前体多肽包含第一抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分的至少一部分布置在所述两条包含CH3结构域的多肽链之一上，和
[0009]‑
第二异二聚体前体多肽，其包含至少两条包含CH3结构域的多肽链，其中所述两条包含CH3结构域的多肽链通过所述CH3结构域相互缔合并形成异二聚体，其中所述CH3结构域中的一个包含杵突变，并且另一个CH3结构域包含臼突变，
[0010]其中所述第二异二聚体前体多肽包含第二抗原结合部分，其中所述第二抗原结合部分的至少一部分布置在所述两条包含CH3结构域的多肽链之一上；
[0011]其中
[0012]A)或者i)在所述第一异二聚体前体多肽内，包含含有杵突变的CH3结构域的多肽链包含所述第一抗原结合部分的至少一部分，并且在所述第二异二聚体前体多肽内，包含具有臼突变的CH3结构域的多肽链包含所述第二抗原结合部分的至少一部分，或者ii)在所述第一异二聚体前体多肽内，包含含有臼突变的CH3结构域的多肽链包含所述第一抗原结合部分的至少一部分，并且在所述第二异二聚体前体多肽内，包含具有杵突变的CH3结构域的多肽链包含所述第二抗原结合部分的至少一部分；并且其中
[0013]B)或者
[0014]i)包含杵突变的第一异二聚体前体多肽的CH3结构域和包含臼突变的第二异二聚体前体多肽的CH3结构域，或者
[0015]ii)包含臼突变的第一异二聚体前体多肽的CH3结构域和包含杵突变的第二异二聚体前体多肽的CH3结构域
[0016]包含以下氨基酸取代，其中根据Kabat编号系统进行编号：
[0017]‑
具有臼突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：
[0018]ο用疏水性氨基酸替换S354；
[0019]ο用带正电荷的氨基酸替换D356；
[0020]ο用带正电荷的氨基酸或用疏水性氨基酸替换E357；
[0021]ο用带正电荷的氨基酸替换D356，并用带正电荷的氨基酸或用疏水性氨基酸替换E357；
[0022]ο用疏水性氨基酸替换S364；
[0023]ο用疏水性氨基酸替换A368；
[0024]ο用带负电荷的氨基酸替换E392；
[0025]ο用疏水性氨基酸替换T394；
[0026]ο用疏水性氨基酸替换D399，并用带正电荷的氨基酸替换S400；
[0027]ο用疏水性氨基酸替换D399，并用带正电荷的氨基酸替换F405；
[0028]ο用疏水性氨基酸替换V407；和
[0029]ο用带负电荷的氨基酸替换K409；和
[0030]ο用带负电荷的氨基酸替换K439；
[0031]‑
具有杵突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：
[0032]ο用带正电荷的氨基酸替换Q347，并用带负电荷的氨基酸替换K360；
[0033]ο用带负电荷的氨基酸替换Y349；
[0034]ο用疏水性氨基酸替换L351，并用疏水性氨基酸替换E357；
[0035]ο用疏水性氨基酸替换S364；
[0036]ο用疏水性氨基酸替换W366，并用带负电荷的氨基酸替换K409；
[0037]ο用疏水性氨基酸替换L368；
[0038]ο用带负电荷的氨基酸替换K370；
[0039]ο用带负电荷的氨基酸替换K370，并用带负电荷的氨基酸替换K439；
[0040]ο用带负电荷的氨基酸替换K392；
[0041]ο用疏水性氨基酸替换T394；
[0042]ο用疏水性氨基酸替换V397；
[0043]ο用带正电荷的氨基酸替换D399，并用带负电荷的氨基酸替换K409；
[0044]ο用带正电荷的氨基酸替换S400；
[0045]οF405W；
[0046]οY407W；和
[0047]ο用带负电荷的氨基酸替换K439。
[0048]本专利技术的一个实施例涉及本专利技术的所述一组异二聚体多肽，其中或者i)包含所述第一异二聚体前体多肽的杵突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变，并且包含所述第二异二聚体前体多肽的臼突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变，或者ii)包含所述第一异二聚体前体多肽的臼突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变，并且包含所述第二异二聚体前体多肽的杵突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变。
[0049]本专利技术的一个实施例涉及本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一组异二聚体前体多肽，其包含：a)第一异二聚体前体多肽，其包含至少两条包含CH3结构域的多肽链，其中所述两条包含CH3结构域的多肽链通过所述CH3结构域相互缔合并形成异二聚体，其中所述CH3结构域中的一个包含杵突变，并且另一个CH3结构域包含臼突变，其中所述第一异二聚体前体多肽包含第一抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分的至少一部分布置在所述两条包含CH3结构域的多肽链之一上，和b)第二异二聚体前体多肽，其包含至少两条包含CH3结构域的多肽链，其中所述两条包含CH3结构域的多肽链通过所述CH3结构域相互缔合并形成异二聚体，其中所述CH3结构域中的一个包含杵突变，并且另一个CH3结构域包含臼突变，其中所述第二异二聚体前体多肽包含第二抗原结合部分，其中所述第二抗原结合部分的至少一部分布置在所述两条包含CH3结构域的多肽链之一上；其中A)或者i)在所述第一异二聚体前体多肽内，包含含有杵突变的CH3结构域的多肽链包含所述第一抗原结合部分的至少一部分，并且在所述第二异二聚体前体多肽内，包含具有臼突变的CH3结构域的多肽链包含所述第二抗原结合部分的至少一部分，或者ii)在所述第一异二聚体前体多肽内，包含含有臼突变的CH3结构域的多肽链包含所述第一抗原结合部分的至少一部分，并且在所述第二异二聚体前体多肽内，包含具有杵突变的CH3结构域的多肽链包含所述第二抗原结合部分的至少一部分；并且其中B)或者i)包含杵突变的第一异二聚体前体多肽的CH3结构域和包含臼突变的第二异二聚体前体多肽的CH3结构域，或者ii)包含臼突变的第一异二聚体前体多肽的CH3结构域和包含杵突变的第二异二聚体前体多肽的CH3结构域包含以下氨基酸取代，其中根据Kabat编号系统进行编号：
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具有臼突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：o用疏水性氨基酸替换S354；o用带正电荷的氨基酸替换D356；o用带正电荷的氨基酸或用疏水性氨基酸替换E357；o用带正电荷的氨基酸替换D356，并用带正电荷的氨基酸或用疏水性氨基酸替换E357；o用疏水性氨基酸替换S364；o用疏水性氨基酸替换A368；o用带负电荷的氨基酸替换E392；o用疏水性氨基酸替换T394；o用疏水性氨基酸替换D399，并用带正电荷的氨基酸替换S400；o用疏水性氨基酸替换D399，并用带正电荷的氨基酸替换F405；o用疏水性氨基酸替换V407；和o用带负电荷的氨基酸替换K409；和o用带负电荷的氨基酸替换K439；
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具有杵突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：o用带正电荷的氨基酸替换Q347，并用带负电荷的氨基酸替换K360；
o用带负电荷的氨基酸替换Y349；o用疏水性氨基酸替换L351，并用疏水性氨基酸替换E357；o用疏水性氨基酸替换S364；o用疏水性氨基酸替换W366，并用带负电荷的氨基酸替换K409；o用疏水性氨基酸替换L368；o用带负电荷的氨基酸替换K370；o用带负电荷的氨基酸替换K370，并用带负电荷的氨基酸替换K439；o用带负电荷的氨基酸替换K392；o用疏水性氨基酸替换T394；o用疏水性氨基酸替换V397；o用带正电荷的氨基酸替换D399，并用带负电荷的氨基酸替换K409；o用带正电荷的氨基酸替换S400；o F405W；o Y407W；和o用带负电荷的氨基酸替换K439。2.根据权利要求1或2所述的一组异二聚体多肽，其中b)中指示的CH3结构域包含以下氨基酸取代：
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具有臼突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：S354V、D356K、E357K、E357F、S364L、A368F、K392E、T394I、V407Y、K409E、K439E和双突变D399A S400K；并且
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具有杵突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：Y349E、S364V、L368F、K370E、K392D、T394I、V397Y、S400K、F405W、Y407W、K349E以及双突变Q347K K360E、L351F E357F、W366I K409E和D399K K409E。3.根据权利要求1至4中的一项所述的一组异二聚体多肽，其中b)中指示的CH3结构域包含以下氨基酸取代：
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具有臼突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：D356K、E357K、E357F、S364L、V407Y、K409E和双突变D399A S400K；并且
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具有杵突变的CH3结构域包含至少一个选自下组的氨基酸取代：Y349E、K370E、K392D、T394I、V397Y、F405W、Y407W、K349E以及双突变Q347K K360E、W366IK409E和D399K K409E。4.根据前述权利要求中的一项所述的一组异二聚体多肽，其中在b)中指示的具有杵突变的CH3结构域包含突变E357K的情况下，b)中指示的具有臼突变的CH3结构域不包含突变K370E；并且其中在b)中指示的具有杵突变的CH3结构域包含突变D356K的情况下，b)中指示的具有臼突变的CH3结构域不包含突变K439E。5.根据前述权利要求中的一项所述的一组异二聚体多肽，其中或者i)包含所述第一异二聚体前体多肽的杵突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变，并且包含所述第二异二聚体前体多肽的臼突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变，或者ii)包含所述第一异二聚体前体多肽的臼突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变，并且包含所述第二异二聚体前体多肽的杵突变的CH3结构域包含半胱氨酸突变。6.根据权利要求5所述的一组异二聚体多肽，其中在所述第一异二聚体前体多肽内，包含杵突变的CH3结构域包含取代S354C，并且包含臼突变的CH3结构域在位置349处包含Y；并
且其中在所述第二异二聚体前体多肽内，包含臼突变的CH3结构域包含取代Y349C，并且包含杵突变的CH3结构域在位置354处包含S。7.根据前述权利要求中的一项所述的一组异二聚体多肽，其中所述第一抗原结合部分和/或所述第二抗原结合部分是抗体片段。8.根据前述权利要求中的一项所述的一组异二聚体多肽，其中a)所述第一异二聚体前体多肽包含：
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第一重链多肽，其包含CH3结构域和第一抗体可变结构域，
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第二重链多肽，其包含CH3结构域，其中所述第一重链多肽和所述第二重链多肽通过所述CH3结构域相互缔合并形成异二聚体，其中所述CH3结构域中的一个包含杵突变，并且另一个CH3结构域包含臼突变；和
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轻链多肽，其包含第二抗体可变结构域，其中所述第一抗体可变结构域和所述第二抗体可变结构...

【专利技术属性】
技术研发人员：U，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：